384孔PCR仪温度参数校准方法探讨

PCR技术作为一项革命性的分子生物学工具,在基因分析、病原体检测、药物研发、遗传学研究等领域发挥着重要作用。384孔PCR仪作为高通量PCR仪的代表,具备一次性处理多个样本的能力。由于现有的校准规范主要针对96孔,使用384孔时存在校准困难和准确性较差的问题。因此,本文通过对两者进行对比,提出了384孔PCR仪的校准布点方式,并进行试验验证。结果表明:采用该校准布点方式具有有效性。

一种适宜高通量基因型鉴定的植物组织取样法及其应用

高效快速植物基因型鉴定是现代分子育种及分子生物研究中基因定位与克隆的前提条件,因而快速且高通量的取样技术有利于建立高效快速植物基因型鉴定技术体系。随着高通量测序技术的飞速发展,可对重要遗传材料进行重测序来进行全基因组范围内基因型鉴定,但因成本及鉴定周期等限制,该技术尚难应用于大群体遗传材料的图位克隆及基于基因型鉴定的分子育种。虽然目前已有多种不同的植物叶片取样方法、DNA提取方法,但步骤繁琐,耗时较长,或所需要特殊的仪器设备,其效率并不能满足现代高通量的技术需求。本研究以外直径为3.0 mm的塑料圆管结合木质牙签为简易的取样器,将大豆叶片均匀准确地取样至384深孔微孔板,同时优化了配套的DNA提取方法与步骤,建立了一整套的高效大豆植株基因型鉴定流程。本鉴定技术体系可大大提高工作效率,缩短鉴定周期。应用该技术流程,成功地对杂合型洐生后代群体1150个植株个体进行了基因型鉴定,确定了与黄化突变相关分子标记之间的联系,为进一步精细定位与克隆控制黄化突变基因奠定了基础。本研究所建立的植物组织高效取样法及基因型鉴定流程可扩展应用于水稻、玉米等多种作物的基因克隆研究与分子育种中。

Development of a miniaturized 3D organoid culture platform for ultra-high-throughput screening

The recent advent of robust methods to grow human tissues as 3D organoids allows us to recapitulate the 3D architecture of tumors in an in vitro setting and offers a new orthogonal approach for drug discovery.However,organoid culturing with extracellular matrix to support 3D architecture has been challenging for high-throughput screening(HTS)-based drug discovery due to technical difficulties.Using genetically engineered human colon organoids as a model system,here we report our effort to miniaturize such 3D organoid culture with extracellular matrix support in high-density plates to enable HTS.We first established organoid culturing in a 384-well plate format and validated its application in a cell viability HTS assay by screening a 2036-compound library.We further miniaturized the 3D organoid culturing in a 1536-well ultra-HTS format and demonstrated its robust performance for large-scale primary compound screening.Our miniaturized organoid culturing method may be adapted to other types of organoids.By leveraging the power of 3D organoid culture in a high-density plate format,we provide a physiologically relevant screening platform to model tumors to accelerate organoid-based research and drug discovery.

快速、无损大豆种子连续取样技术及其DNA制备

建立简便、快速和无损种子连续取样技术流程及基因型鉴定技术体系,可节约种植成本及缩短鉴定周期,提高基因功能研究和育种效率。该研究利用微型电钻和空气泵等简单装置设计了一种连续且无损钻取大豆(Glycine max)种子组织的方法,并优化了利用384深孔微孔板高通量提取DNA及基因型鉴定技术体系。该方法也可用于水稻(Oryzasativa)和玉米(Zea mays)等多种主要作物的种子取样及基因型鉴定。