Ywhab通过靶向Hsp90aa1抑制小鼠B细胞淋巴瘤38B9细胞生长

目的:研究Ywhab在小鼠B细胞淋巴瘤发生发展中的作用,并探讨其可能的分子机制。方法:使用生物信息学分析Ywhab与弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的相关性。在小鼠B细胞淋巴瘤38B9细胞中感染逆转录病毒构建Ywhab基因过表达细胞系,并采用RT-qPCR和Western blot验证Ywhab的mRNA及蛋白(14-3-3β)水平;通过细胞计数法、CCK-8法和小鼠皮下成瘤实验检测Ywhab过表达对38B9细胞在体内外生长的影响;RT-qPCR和Western blot检测细胞凋亡相关蛋白的表达;应用蛋白质免疫共沉淀联合蛋白质谱(CoIP-MS)筛选与14-3-3β特异性结合的蛋白并采用Western blot及分子对接分析进行验证。结果:Ywhab基因在DLBCL中低表达,其低表达预示DLBCL患者的临床预后较差。与正常小鼠骨髓B细胞相比,Ywhab在38B9细胞中低表达。Ywhab过表达能在体内外诱导38B9细胞凋亡,促进凋亡蛋白Puma、Noxa和Bax的mRNA及蛋白表达,抑制抗凋亡蛋白Bcl2的mRNA及蛋白表达(P<0.05)。14-3-3β蛋白能特异性结合Hsp90aa1蛋白并抑制其表达,从而促进38B9细胞凋亡。结论:Ywhab能够显著诱导小鼠B细胞淋巴瘤38B9细胞凋亡,其机制可能是通过靶向抑制Hsp90aa1蛋白表达来实现的。

uc.477+在小鼠B淋巴瘤细胞中的表达研究

目的根据超保守RNA uc.477+在小鼠正常B细胞与小鼠B淋巴瘤细胞中的表达差异,探讨uc.477+对小鼠B淋巴瘤细胞增殖的影响。方法从C57BL/6野生型小鼠脾脏中分选出正常B细胞,RT-PCR检测uc.477+在小鼠正常B细胞与B淋巴瘤细胞中的表达。将uc.477+基因片段构建到pMSCV-PIG逆转录病毒表达载体上,过表达质粒477-pMSCV-PIG和空载体质粒pMSCV-PIG经293T包装成逆转录病毒感染小鼠淋巴瘤细胞38B9,倒置荧光显微镜和流式细胞术检测感染率。细胞计数和细胞周期检测uc.477+过表达后38B9细胞株和空载体38B9细胞株的增殖变化。结果uc.477+在小鼠B淋巴瘤细胞中的表达显著高于小鼠正常B细胞。稳定过表达uc.477+38B9细胞株和空载体38B9细胞株构建成功。uc.477+过表达38B9细胞株比空载体38B9细胞株增殖能力强。结论超保守RNA uc.477+在小鼠B淋巴瘤细胞中的表达显著高于小鼠正常B细胞中的表达。uc.477+能促进小鼠B淋巴瘤细胞增殖。