猪链球菌2型溶血素基因与38KDa蛋白基因克隆及联合表达

目的:研究有效的猪链球菌病疫苗。方法:以四川株猪链球菌2型基因组DNA为模板分别扩增溶血素基因和38KDa基因主要功能区基因;并经连接、克隆及酶切鉴定。分别构建原核表达载体pET32a-Sly、pET32a-38KDa,提取阳性克隆质粒分别进行双酶切并纯化,通过PCR串联两片断,将目的片断定向克隆到表达载体pET32a中,经测序正确后,重组质粒转化入大肠杆菌BL21 (DE3),用IPTG进行诱导表达。结果:重组菌菌体裂解物经SDS-PAGE电泳可检测到相对分子量约为60Ku的重组蛋白,表达产物经纯化后,免疫印迹法(Western-blotting)证实该重组蛋白可以与SS2阳性血清发生特异性反应。结论:本研究为重组蛋白的免疫保护应用奠定基础。

重组结核分枝杆菌38KDa蛋白用于军人结核分枝杆菌感染筛查

目的评价重组结核分枝杆菌蛋白38KDa皮试注射液（rTPA38）用于军人结核分枝杆菌感染筛查的价值。方法以结核菌素纯蛋白衍生物（PPD）为对照，采用同体双臂Mantoux法（皮内注射）为1150人同时做PPD和rTPA38皮试；皮试后24h，48h双盲测量皮试反应（包括红晕或硬结）。PPD和rTPA38皮试阴性者接种卡介苗，3个月后同前进行皮试试验。结果局部皮肤红晕（或硬结）横、纵平均直径≥5mm为阳性。24．6％受试者rTPA38皮试反应阳性，阳性反应直径集中于5mm～10mm；53．0％受试者PPD皮试反应阳性，阳性反应直径集中于5mm～15mm。rTPA38皮试反应阳性率随年龄增长基本呈现上升趋势，同一年龄段，rTPA38皮试反应阳性率明显低于PPD（P〈0．01）。有卡痕与无卡痕受试者rTPA38皮试反应阳性率比较、统计学分析差异有极显著性意义（χ^2=27．06，P〈0．01）。PPD皮试阳转率与rT—PA38皮试阳转率分别为62．0％和27．2％，两者比较差异有极显著性意义（χ^2=52．90，P〈0．01）。结论rTPA38可作为结核分枝杆菌感染筛查的诊断试剂。

重组结核分枝杆菌38kDa蛋白的表达、纯化和复性及免疫特性的研究

目的构建结核分枝杆菌38kDa的重组质粒,在大肠杆菌中表达、纯化和复性重组蛋白,并评价其在结核病血清学诊断方面的价值。方法用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出psts1基因片段,连接到表达载体PET30a中,在大肠杆菌中表达;应用组氨酸标签(His-Tag)纯化重组蛋白;在PBS中通过半透膜恢复重组蛋白的天然结构。结果构建了含38kDa重组质粒的大肠杆菌工程菌,并以包涵体形式表达重组蛋白38kDa,其占细胞总蛋白的55%;重组蛋白变性后经镍柱纯化,其纯度达90%以上;通过半透膜完全恢复重组蛋白的天然结构,经蛋白印迹证实重组蛋白能与结核杆菌多克隆抗体结合。结论具有天然结构和高纯度的重组融合蛋白有可能成为有效的结核病血清学诊断的候选抗原。

重组结核分枝杆菌38KDa蛋白的免疫学特性研究

目的:探讨利用毕赤酵母表达体系表达的重组结核分枝杆菌38KDa蛋白的免疫学特性。方法:利用甲醇作为诱导剂诱导表达重组结核分枝杆菌38KDa蛋白,之后以高、低剂量免疫BALB/c小鼠,同时设BCG疫苗对照组和PBS空白对照组,每2周免疫1次,第3次免疫2周后剪尾取血,分离血清,ELISA法检测免疫小鼠血清中的抗体和IFN-γ表达水平。9周后,处死小鼠并分离各组小鼠的脾淋巴细胞,MTT法检测脾淋巴细胞的增殖。结果:重组结核分枝杆菌38KDa蛋白免疫小鼠后,能产生较高滴度抗体;38KDa蛋白高、低剂量诱导组脾淋巴细胞增值刺激指数(SI)均高于PBS对照组(P<0.05),与BCG组无差异(P>0.05);高、低剂量组IFN-γ的表达水平明显高于PBS对照组(P<0.05),与BCG组无差异(P>0.05),高低剂量组间SI、IFN-γ水平均无差异(P>0.05)。结论:重组38KDa蛋白在动物机体内表现有一定的免疫原性,可以作为结核病新疫苗的备选抗原之一。

重组38kDa抗原对结核病诊断应用价值的评价

目的初步评价重组38kDa在检测血清中抗结核抗体方面的应用价值。方法用不同浓度的重组蛋白38kDa包被ELISA板,分别用结核病阳性血清和阴性对照及空白对照血清,确定ELISA板最佳包被浓度。再根据已确定的浓度包被ELISA板,检测205份血清(包括105份患者血清和100份阴性对照血清)。结果经检测最佳蛋白包被浓度为2μg/mL,最佳血清稀释度为1∶225。结核38kDa抗原ELISA检测的总灵敏度为55.2%,阳性预测值为93.5%。结论重组38kDa诊断的阳性预测能力比较高,有助于临床医师的诊断。

OT强阳性新兵血清抗38KD_a抗体检测的意义

目的:调查新兵亚临床结核感染与OT试验强阳性的相关性,探讨军队结核病预防新措施。方法:采用ELISA和免疫层析法分别检测了10399名新兵中OT强阳性者血清抗38KDa抗体和抗LAM(脂阿拉伯甘露聚糖)抗体;对抗体阳性者作为期3个月随访和1年信访。结果:OT强阳性新兵血清抗LAM抗体均为阴性;无卡痕和有卡痕OT强阳性组血清抗38KDa抗体阳性分别有5例和1例,阳性比率分别为3.96%和0.56%,差异显著(P<0.05)。抗体阳性者3个月随访发现:无卡痕OT强阳性组有3例新兵出现结核体质特征或症状,其中2例1年内诊断为胸膜炎结核,1例因身体不适调离原工作岗位。结论:血清抗38KDa抗体水平与新兵结核菌亚临床感染有关。OT强阳性且38KDa抗体阳性新兵,应给于3个月预防性抗痨治疗。

广州地区部分就诊病人结核菌抗体检测结果趋势分析

近年来结核病在我国以及全世界有明显回升的趋势[1]。1993年世界卫生组织（WHO）将结核病列为重点控制的传染病之一,1998年WHO再次提出遏制结核病的传播与感染。据WHO2008年全球结核病控制报告,我国结核病发病人数居全球第二位。