高耐盐紫球藻资源筛选及其miR398-CSD盐胁迫应答模式研究

紫球藻是一类极具开发潜力的特色微藻,本研究旨在筛选、鉴定一批高耐盐紫球藻株,并对其miR398-CSD盐胁迫应答模式进行研究,以期为特色紫球藻的工业化高效应用及其耐盐机理机制的研究奠定基础。以国内外不同品系的紫球藻为试材,采用形态学、生理学、系统进化的方法分析其基本特征,从中筛选高耐盐品系;用高通量测序及生物信息学技术,鉴定紫球藻miR398及其靶基因CSD序列,分子生物学技术对其抑制类型进行验证;用stem-loop qRT-PCR和qRT-PCR技术,对紫球藻高耐盐品系不同盐度胁迫下的miR398及CSD表达模式进行分析。7株藻株均属于紫球藻属,系统进化上可划分为3簇,其细胞形态均符合典型的紫球藻特征,P1和P4属于高耐盐品系;miR398以切割抑制的方式对其靶基因CSD进行抑制,紫球藻miR398的表达随盐度的升高而下调,CSD则随盐度的升高而上调。研究结果为高耐盐紫球藻资源的开发利用及miRNAs分子定向改良藻株品质奠定基础。

玉米杂交种泛玉398及其亲本指纹图谱构建

为构建玉米杂交种泛玉398及其亲本的指纹图谱,利用40对玉米核心引物,通过简单序列重复长度多态性(SSR)分子标记技术进行分析。结果表明,筛选出6对亲本条带互补、清晰稳定的引物,分别是bnlg439w1、umc2015k3、umc1705w1、bnlg291k4、umc1147y4、bnlg1671y17,并将所构建指纹图谱数字化,分别用“0”和“1”表示,计算得到出现相同指纹图谱的概率为5.96×10^(-8)。这6对引物所构建指纹图谱可以用于玉米杂交种泛玉398及其亲本的真实性鉴定。

中早熟玉米新品种豪单398的选育

豪单398是广西万禾种业有限公司和四川奥力星农业科技有限公司以自交系奥301为母本、自交系660为父本杂交育成的中早熟玉米新品种。经多年多点试验和玉米区域试验及生产试验,该品种具有熟期较早、高产稳产等特点,2022年通过广西壮族自治区农作物品种审定委员会审定,审定编号:桂审玉2022069号。适宜在广西玉米种植区春、秋季种植。

玉米新品种泛玉398的选育及其高产栽培技术

泛玉398是河南黄泛区地神种业有限公司于2013年以自选系A552为母本、B13为父本杂交选育而成中晚熟玉米新品种。该品种高产、抗病、抗倒伏,优良性状。于2021年通过河南省审定。本文作者介绍了该品种的选育经过、特征特性及产量表现,并总结了该品种的高产栽培技术,主要包括适时播种、合理密植、科学施肥、及时除草、病虫害防治等。

玉米新品种泛玉398品种选育及其高产制种技术

玉米新品泛玉398是河南黄泛区地神种业有限公司于2021年通过河南省审定。该品种是2013年以自选系A552为母本、B13为父本杂交选育而成的中晚熟玉米新品种。本文主要介绍玉米杂交种泛玉398品种来源、选育经过、特征特性;西北高产制种过程中亲本播期,播种技术,母本去雄、去杂等田间管理技术,同时对其杂交种西北制种流程和阶段关键技术进行总结。

miR398在植物逆境胁迫应答中的作用

MicroRNA(miRNA)是一类新型的调控基因表达的小分子RNA,它作为基因表达的负调控因子,在转录后水平调节靶基因的表达。miRNA参与调控植物的生长发育,并在多种非生物与生物胁迫响应中发挥重要作用。miR398是第一个被报道的受氧化胁迫负调控的miRNA。它通过负调控其靶基因Cu/Zn过氧化物歧化酶(Cu/Zn-superoxide dismutase,CSD)的表达,在多种逆境胁迫响应中扮演重要角色,如调节铜代谢平衡,应答重金属、蔗糖、臭氧等非生物胁迫,以及参与应答生物胁迫等。文章综述了miR398在多种逆境胁迫响应中重要的调节作用及miR398自身的转录调控。

AS1.398中性蛋白酶固定化条件的初步研究

考察壳聚糖、卡拉胶、海藻酸钠、琼脂等固定化载体对 AS1 .398中性蛋白酶固定化的影响。确定 0 .3%戊二醛在 30℃ ,p H8.0的条件下处理壳聚糖 8～ 1 0 h,加酶液 ,固定 8h,酶活力回收约为 77% ,固定化酶最适作用温度为 55℃ ,最适作用 p H为 8.0 ;

医用高能光子水吸收剂量测量规范TRS-277与TRS-398比较

随着吸收剂量测量及其量值溯源理论和技术的发展,国际原子能机构先后发布了TRS-277、TRS-398号报告,规范了高能光子水中吸收剂量的测量,以满足临床应用时不确定5.0%(k=2)的要求。文中依据两个报告,从量值溯源方式、测量方法、参数引用、修正因子的来源及其确定等方面,比较了两个报告在高能光子水中吸收剂量测量中的使用差异;同时指出了应用TRS-398号报告能进一步减少测量结果的不确定度,对开展精确放射治疗具有指导意义。

选择性COX-2抑制剂NS-398诱导白血病细胞凋亡的作用机制

目的探讨选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398诱导白血病细胞系K562细胞凋亡的分子机制。方法采用流式细胞术检测细胞凋亡;采用蛋白印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白Bcl-2、半胱氨酸酶-3(Caspase-3)的表达;并应用流式细胞术检测Caspase-3的活性。结果①NS-398作用K562细胞24h后,对照组未出现凋亡峰,各药物处理组(100~400μmol·L-1)均出现明显的凋亡峰,其凋亡率分别为(10.51±1.04)%、(27.79±2.40)%、(45.72±3.32)%和(60.22±2.03)%(P【0.01)。②不同浓度NS-398处理后,K562细胞中Bcl-2蛋白表达下降,而Caspase-3蛋白表达增加,与对照组相比差异具有显著性(P【0.05)。③NS-398能以剂量依赖方式促进Caspase-3活性的增加,表达活化Caspase-3的细胞百分率分别为(2.67±0.22)%、(9.53±0.15)%、(21.28±0.43)%、(39.63±0.8)%和(63.40±0.69)%(P【0.01)。结论选择性COX-2抑制剂NS-398可能通过调节Bcl-2蛋白表达、活化Caspase-3,从而诱导白血病K562细胞凋亡。

环氧合酶-2选择性抑制剂NS-398诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡及其机制探讨

目的:探讨环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)选择性抑制剂NS-398对人肝癌BEL-7402细胞凋亡及凋亡抑制蛋白survivin、XIAP和c-IAP1表达的调节作用。方法:用不同浓度的NS-398作用BEL-7402细胞后,MTT法测定细胞增殖抑制情况,FCM法和TUNEL法检测细胞凋亡情况,免疫细胞化学法检测COX-2、survivin、XIAP和c-IAP1蛋白的表达情况。结果:NS-398可以显著抑制BEL-7402细胞的增殖,诱导其凋亡。免疫细胞化学法检测结果显示,与未处理组相比,NS-398作用可使BEL-7402细胞中COX-2、survivin、XIAP和c-IAP1蛋白的表达明显下调(P<0.01)。结论:NS-398对人肝癌细胞株BEL-7402有抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用,其机制可能与通过下调survivin、XIAP和c-IAP1的表达有关。

NS-398联合顺铂对Eca-109细胞增殖及凋亡的影响

目的:观察环氧化物酶-2选择性抑制剂NS-398联合顺铂对食管癌Eca-109细胞增殖及凋亡的影响。方法:采用细胞增殖抑制实验(CCK-8法)检测不同-质量浓度的顺铂(1.25、2.50、5.00和10.00mg/L)单用及联合小剂量(1.00和10.00μmol/L)NS-398作用于人食管癌Eca-109细胞24h后细胞增殖抑制率;采用流式细胞仪检测细胞周期的改变及早期凋亡情况。结果:顺铂、N-398单用及2者联合对Eca-109细胞均有抑制增殖作用(F顺铂=1391.300,FNS-398=642.898,F交互=15.254,P均<0.001),可阻止细胞周期的进程(G0/G1期:F顺铂=1308.300,FNS-398=133.138,F交互=26.692,P均<0.001;S期:F顺铂=1470.300,FNS-398=149.638,F交互=30.000,P均<0.001),诱导细胞凋亡(F顺铂=39.493,P<0.001,FNS-398=0.000,P=0.987;F交互=4.325,P=0.006)。顺铂联合NS-398对Eca-109细胞的作用明显强于顺铂单用,且随着NS-398剂量的增高而增高(P<0.01)。结论:NS-398能够增强顺铂对食管癌细胞的生长抑制和诱导凋亡效应。

NS-398降低结肠癌细胞系HT-29体外侵袭力

研究环氧合酶 2选择性抑制剂NS 398对结肠癌细胞系HT 2 9体外侵袭力的作用。通过流式细胞术检测COX 2在HT 2 9细胞的表达 ,MTT法检测HT 2 9细胞与matrigel的黏附性及细胞活性 ,通过改良的Boyden小室法观察HT 2 9细胞侵袭重组基底膜的能力以及趋化运动能力。结果显示HT 2 9细胞COX 2表达阳性 ,存在NS 398作用的靶 ,0 1、1 0、10 μmol/LNS 398可显著抑制HT 2 9细胞与matrigel的黏附性以及侵袭重组基底膜的能力和趋化运动能力 ,且上述作用与NS 398的毒性作用无关 ,提示NS

NS-398诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

目的 :研究选择性环氧化酶 2 (COX 2 )抑制剂NS 398对人肝癌细胞HepG2 凋亡的影响 ,及其相关蛋白Bcl 2在细胞凋亡中的作用。方法 :通过体外细胞培养 ,应用荧光显微镜、透射电镜、流式细胞仪观察NS 398对HepG2 的凋亡诱导作用 ,应用免疫细胞化学法观察Bcl 2在人肝癌细胞HepG2 凋亡中的表达。结果 :NS 398处理HepG2 细胞后 ,电镜下可见到细胞核固缩、染色质凝集成新月型紧靠核膜周边 ,核碎裂、染色质片断化等典型的细胞凋亡形态变化。荧光显微镜及流式细胞检测则未见凋亡征象。免疫细胞化学分析显示 ,NS 398处理后的HepG2 细胞 ,其Bcl 2表达较对照组明显下降。结论 :COX 2选择性抑制剂NS 398对人肝癌HepG2 细胞有显著的凋亡诱导作用 ;抗凋亡基因Bcl 2在NS 398诱导的HepG2 细胞凋亡中有重要的调控作用。

非甾体类抗炎药NS398对前列腺癌动物模型中RECK基因表达的调控

目的:通过检测非甾体类抗炎药NS398对前列腺癌动物模型中RECK基因表达的调控,探讨其可能的抗肿瘤机制。方法:成瘤裸鼠分为实验组和对照组,实验组裸鼠予口咽管下喂服NS398,每天剂量0.1 mg/g体重,分别喂服10 d、20 d、30 d,对照组不予喂药,各组均在30 d后处死裸鼠;抽提各组肿瘤组织总RNA,RT-PCR检测RECK基因与MMP-9的表达;抽提各组肿瘤组织总蛋白,应用W estern印迹法检测RECK蛋白的表达。结果:实验组肿瘤组织中RECK基因的表达量较对照组明显升高,而MMP-9的表达量明显降低,且其变化与用药时间有明显的相关性。结论:NS398对前列腺癌的发生及转移有明显的抑制作用,其具体的作用机制可能与其诱导RECK基因的表达,从而抑制MMP-9的表达有关。

顺铂联合COX-2选择性抑制剂NS-398对食管癌Eca-109细胞增殖和凋亡的影响

目的体外观察顺铂(diamminedichloroplatinum,DDP)以及DDP联合环氧合酶-2(cyclooxygenase,COX-2)选择性抑制剂NS-398对人食管癌Eca-109细胞增殖和凋亡的影响,比较单独应用DDP与DDP联合NS-398应用于食管癌Eca-109细胞的抗肿瘤效应。方法 CCK-8法检测不同浓度的DDP(1.25、2.50、5.00、10.00、20.00mg/L)单独作用及DDP联合NS-398(1.00、10.00μmol/L)作用Eca-109细胞24h的细胞增殖抑制率。琼脂糖凝胶电泳技术检测DDP(1.25、2.50、5.00mg/L)单用及联合NS-398(1.00、10.00、80.00μmol/L)作用Eca-109细胞24h和48h的DNA Ladder出现情况。透射电镜观察DDP单用以及联合NS-398作用于Eca-109细胞24h超微结构的变化。药物未处理组作为对照组。结果细胞增殖抑制实验表明顺铂、NS-398对Ec-109细胞有剂量依赖性抑制增殖作用(P<0.05)。顺铂联合NS-398用药组细胞增殖抑制率明显高于同浓度顺铂单用组,且随添加的NS-398的剂量的增加而增加,DDP联合NS-398用药组对Ec-109细胞的增殖抑制效应和诱导凋亡效应明显高于DDP单药组,二者具有协同效应。结论与DDP单用相比,添加低剂量NS-398能够增强DDP对Eca-109细胞的增殖抑制效应和诱导凋亡效应。

NS-398对人胃癌裸鼠移植瘤血管生成的影响

目的 :探讨NS 398对裸鼠胃癌移植瘤血管生成的影响。方法 :1 2只裸鼠随机分为 2组 ,以人胃癌细胞株SGC790 1建立荷瘤裸鼠动物模型。治疗组于接种第 2d开始给予 1 0mg/kgNS 398腹腔注射 ,隔d给药 ;对照组隔d腹腔注射同体积PBS ,连续 2 0d ,观察抑瘤率 ,应用免疫组织化学技术检测 2组肿瘤组织环氧合酶 2 (COX 2 )、VEGF表达及微血管密度 (MVD)。结果 :NS 398抑瘤率达 88.7% ,COX 2、VEGF及MVD在治疗组分别为 2 .6± 0 .8,2 .3± 1 .2和 2 1 .2± 4 .8,显著低于对照组的 5 .0± 0 .6 ,5 .8± 0 .4和 4 1 .3± 2 .6 (P均 <0 .0 5 )。结论 :NS 398可能通过抑制COX 2。

NS-398对肝细胞癌VEGF、MMP-9表达的调节

目的探讨NS-398对肝细胞癌血管生成和侵袭的调节作用。方法NS-398取0、25、50、75、100μmol/L5个浓度组,每个浓度组选取24h、48h、72h三个作用时间点进行检测。采用RT-PCR和流式细胞技术,观察NS-398对人肝癌SMMC-7721细胞株VEGF、MMP-9表达的影响。结果NS-398对SMMC-7721细胞有明显的生长抑制作用。与对照组相比,NS-398能显著抑制SMMC-7721细胞COX-2、VEGF、MMP-9基因和蛋白表达,并呈显著的剂量和时间依赖性关系(P<0.001)。结论NS-398能显著抑制SMMC-7721肝细胞癌中VEGF、MMP-9mRNA和蛋白的表达。

IAEA TRS398与TRS277应用于加速器输出量校准的比较

目的:通过对IAEA TRS398和TRS277号报告推荐方法在加速器输出量校准中的使用比较,分析两者之间的区别和联系,正确指导临床外照射治疗源的校准。方法:用PTW公司UNIDOS E剂量仪和PTW30013指形电离室及NE2570A型剂量仪和2571型电离室,分别按照TRS398和TRS277号报告的要求对Varian 23EX线加速器两档光子线(6 MV,10 MV)吸收剂量进行测量,并对结果进行比较。结果:不同的剂量仪和不同的测量规程得到的结果基本相同。结论:采用TRS277号报告和TRS398号报告所有仪器测量结果偏差均小于1%,结合修正因子的不确定度,认为测量结果是一致的,采用两种规程得到测量结果均是正确的。398号报告应用比277号报告简单,且更接近用户现场测量实际情况。

冬小麦miR398前体的克隆及其在低温条件下对靶基因CSD1表达的调控

miR398是受逆境胁迫负调控的miRNA,其靶基因CSD编码超氧化物歧化酶(SOD),使植物抵御活性氧(ROS)的毒害。为进一步了解低温胁迫下miR398的调控机制,从东农冬麦1号中克隆小麦miR398前体,构建过表达载体并转化拟南芥,用Real-time PCR检测T0代植株中小麦miR398及其靶基因CSD1在低温胁迫下的表达量。结果表明,随着低温胁迫时间的延长,miR398表达下调、CSD1基因表达上调,认为小麦miR398能响应低温胁迫、负调控CSD1基因表达,间接提高了拟南芥的抗寒性。

盐胁迫下花花柴 miR398 对 Cu/Zn 超氧化物歧化酶基因的调控研究

植物miRNA能够参与盐胁迫下基因表达的调控。在盐胁迫条件下盐生植物花花柴miR398（KcmiR398）呈现显著性差异表达，为了探讨rniR398的靶基因及其对靶基因的调控方式，通过生物信息学分析（http：／／plant—grn．noble．Org／psRNATarget／），预测KcmiR398的靶基因分别为Cu／Zn超氧化物歧化酶（SOD）基因CSDl和CSD2。利用RACE技术从花花柴中克隆到CSDl和CSD2基因全长序列，分别命名为KcCSDl和KcCSD2。qRTPCR结果表明：（1）KcmiR398在盐胁迫的花花柴茎中上调表达，在新叶中下调表达；KcCSDl在盐胁迫的老叶中上调表达，而在老茎和根中下调表达；KcCSD2在盐胁迫的老茎和根中上调表达。（2）300mmol／I，NaCl胁迫24~48h，KcmiR398与对照无显著差异；KcCSDl的表达为对照的3倍以上，而KcCSD2的表达没有显著差异。研究表明，花花柴的KcmiR398和KcCSDl、KcCSD2有组织差异性表达，盐胁迫可以影响KcmiR398和KcCSDl、KcCSD2基因的表达以适应盐胁迫产生的氧化危害。