日本沼虾C型凝集素结构域家族3的cDNA克隆、原核表达和定位分析

C型凝集素(C-typelectin)是一类能与糖类结合的非抗体的蛋白质或糖蛋白家族,为了研究C型凝集素基因在日本沼虾组织分布、细胞定位和细菌感染过程中的表达情况,本研究应用cDNA末端快速克隆(rapid-amplification of cDNA ends,RACE)技术首次克隆了日本沼虾C型凝集素结构域家族3基因(MnLec3)的全长序列,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析MnLec3基因在不同组织、细菌感染后不同时间的表达水平,Westernblot和免疫荧光分别分析蛋白的表达水平和细胞定位。结果显示,MnLec3基因cDNA全长1357bp,包括125bp的5′末端非翻译区(UTR)、1026bp的开放阅读框(ORF)和206bp的3′UTR,其中开放阅读框编码341个氨基酸。氨基酸序列比对显示,日本沼虾MnLec3基因含有保守钙结合点(Met1-Glu17)和糖识别结构域(CRD)。同源性分析结果显示,MnLec3与罗氏沼虾C型凝集素3相似度较高;邻接法(Neighbor-Joining,NJ)进化树分析结果显示,MnLec3与其他甲壳动物C型凝集素聚为一支。通过构建原核表达载体获得体外重组蛋白rMnLec3,并将纯化重组蛋白免疫大鼠获得抗血清,免疫荧光结果显示,绿色荧光信号主要在肝胰腺细胞核中表达。qRT-PCR结果显示,MnLec3在日本沼虾所检测组织中均表达,其中肝胰腺中表达量最高,血细胞次之;与对照组相比,在嗜水气单胞菌刺激12~48h时MnLec3表达量显著升高,48h表达量最高,Western blot分析结果显示,MnLec3蛋白表达丰度与基因表达模式基本相似,提示克隆得到的MnLec3参与日本沼虾抵御细菌入侵的免疫过程。

3C型动磁式直线振荡电机的设计与分析

为了进一步提高动磁式直线振荡电机的推力密度,在传统E型铁心结构基础上提出一种3C型直线振荡电机,采用有限元法建立两种结构电机的2D分析模型,在此基础上,计算了电机的磁场分布和电磁推力,研究了共振状态下电机的动态性能。分析表明3C型电机可以有效缓解电机局部磁饱和,提升气隙磁密,相同激励下拥有更大的电磁推力,更好的动态性能。最后,在有限元分析基础上制作了一台3C型直线振荡电机样机,并进行了电机的静态推力测试,实验结果与有限元仿真取得了较好的一致性。研究结果对推动直线振荡电机的大功率应用具有重要意义。