口蹄疫病毒3D基因真核表达载体pEGFP-3D的构建及其融合蛋白分子在BHK细胞中的定位

为研究口蹄疫病毒RNA聚合酶3D基因的分子生物学特性及定位,构建了3D基因真核表达载体pEGFP-3D,观察了3D在BHK-21细胞中的瞬时表达情况。从重组质粒pMD18-T-3D扩增到3D基因,与pGEM-T easy载体连接,将鉴定为阳性的重组质粒pGEM-3D与表达载体pEGFP-N1分别经BamHⅠ/HindⅢ酶切,进行定向亚克隆;重组表达质粒pEGFP-3D经PCR、酶切鉴定,阳性质粒进行测序。利用脂质体介导阳性pEGFP-3D质粒转染BHK-21细胞,免疫组化检测转染细胞中3D基因表达情况和3D基因在细胞中的定位,Western blotting验证pEGFP-3D融合基因的表达。结果表明,成功构建了重组表达质粒pEGFP-3D,并在BHK-21细胞中进行了表达。免疫组化分析表明,3D蛋白主要定位于细胞核;Western blotting证实pEGFP-3D融合蛋白在80 kDa处出现阳性条带,说明表达的外源蛋白具有免疫活性。pEGFP-3D表达载体转染细胞后很快就能通过观察荧光蛋白而检测出基因的瞬时表达情况,为基因转染研究中确定转染效率、3D的表达情况及蛋白定位等提供了直观的靶标,有望应用于FMDV聚合酶分子的生物学特性研究。

物流管理课堂实训教学载体及实施方案探讨

实操性非常强的物流管理专业,该如何开展物流实训课,才能实现培养合格的物流人才是物流实训教学中最棘手的问题之一。此处,简要回顾了我国物流实训教学载体的发展与演化过程,并针对每种载体的实训教学方案进行了对比分析,通过对比分析指出了前三代物流教学实训方案的优劣性,并从最新的第四代(3D)物流教学实训方案中发现了解决方案,不但解决了学校的成本投入难题、安全问题,同时大幅提高了学生的学习热情和积极性,更为重要地是使得实训教学效果得以满足物流行业的人才需求。因此,本文通过对比分析和实际测试最终得出第四代(3D)物流教学实训方案为今后我国高校切实可行的物流实训载体及实训方案的发展方向。

人源化食管癌移植瘤模型的建立

目的将人原代食管鳞状细胞癌细胞与新型3D微载体——microcarrier 6复合,皮下接种于正常免疫功能小鼠,建立患者来源的食管癌移植瘤动物模型,并分析移植瘤病理学特点。方法将40只C57BL/6雄性小鼠按是否接种微载体或微载体与人源性食管鳞状细胞癌细胞复合物分为对照组和实验组,分4次实验进行,每次用10只小鼠,每组各5只,将上述载体及复合物分别接种于小鼠腋下。观察小鼠成瘤时间、成瘤大小、成瘤率,后期行移植瘤病理学苏木素-伊红(HE)染色及免疫组化分析。结果基于microcarrier 6皮下种植人原代食管鳞状细胞癌细胞可在正常免疫功能小鼠成功长出移植瘤,成瘤率为80%,成瘤时间为10~12天,成瘤直径0.8~1.2 cm。病理学HE染色和免疫组化检测结果均符合人食管癌病理学特点。结论应用新型3D微载体复合人食管鳞状细胞癌细胞可成功构建正常免疫功能小鼠人食管癌移植瘤模型。