小鼠成纤维细胞衰老模型建立

目的:构建小鼠成纤维细胞的衰老模型。方法:利用小鼠3T3成纤维细胞系,给予P53激动剂Nutlin3a(5μmol/L)诱导衰老成纤维细胞。使用β-半乳糖苷酶(senescence associatedβ-galactosidase staining,SA-β-gal)衰老染色评估衰老细胞比例,使用实时定量聚合酶链反应(quantitative realtime polymerase chain reaction,qRT-PCR)的方法检测细胞中衰老标志分子P16和Gls的mRNA表达变化。利用GLS1抑制剂BPTES处理衰老成纤维细胞评估对衰老细胞的清除作用,并评估了不同浓度的BPTES对衰老成纤维细胞的影响。结果:Nutlin3a可诱导3T3成纤维细胞衰老,与对照组细胞相比,成纤维细胞中SA-β-gal阳性的衰老细胞比例增加(11.8%vs.92.8%,P<0.01)。qRT-PCR结果显示诱导衰老的成纤维细胞中衰老标志分子P16和Gls的表达显著上调(P均<0.01)。BPTES处理也可显著减少Nutlin3a诱导的衰老成纤维细胞的数量(P<0.01),并且BPTES对衰老细胞的杀伤作用呈剂量依赖性(P<0.01)。结论:使用P53激动剂Nutlin3a可成功建立成纤维细胞的细胞衰老模型,BPTES可有效清除衰老成纤维细胞。