bta-miR-27a-5p的生物信息学分析及其对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响

为了探究bta-miR-27a-5p的生物学特性及其对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响,试验利用miRBase数据库对不同物种间miR-27a-5p的保守性进行分析,并构建了miR-27a-5p的系统进化树;利用TargetScan和miRWalk在线网站预测bta-miR-27a-5p的靶基因,并对靶基因进行GO功能注释和KEGG信号通路分析;利用实时荧光定量PCR方法检测在不同月龄夏南牛不同器官中bta-miR-27a-5p基因的相对表达量;最后通过实时荧光定量PCR方法、Western-blot检测、三酰甘油浓度测定和油红O染色探究过表达bta-miR-27a-5p后对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响。结果表明:不同物种miR-27a-5p的成熟序列保守性较高;牛miR-27a-5p基因与山羊的亲缘关系最近,与非洲爪蟾的亲缘关系最远;bta-miR-27a-5p靶基因主要在细胞过程、生物过程、细胞、细胞部分、结合等GO条目上富集,并富集在胰岛素抵抗、细胞衰老、脂肪细胞因子等信号通路中;bta-miR-27a-5p基因可在夏南牛的多个器官中表达,且12月龄夏南牛脂肪组织中的相对表达量均显著低于0月龄和24月龄(P<0.05);过表达bta-miR-27a-5p基因可显著或极显著抑制C/EBPα、PPARγ和FABP4基因和蛋白质表达(P<0.05或P<0.01),并显著或极显著降低3T3-L1前脂肪细胞内脂滴和三酰甘油浓度(P<0.05或P<0.01)。说明bta-miR-27a-5p在不同物种间高度保守,在不同月龄夏南牛脂肪组织中显著差异表达,并且能抑制3T3-L1前脂肪细胞分化,bta-miR-27a-5p基因可能是调控牛脂肪生成的候选miRNA。

木犀草苷对3T3-L1前脂肪细胞分化和脂代谢的影响

目的:研究木犀草苷对3T3-L1前脂肪细胞分化和脂代谢的影响及其作用机制。方法:采用3T3-L1前脂肪细胞,利用四甲基偶氮唑蓝法检测不同质量浓度木犀草苷对3T3-L1前脂肪细胞毒性的影响;使用鸡尾酒诱导法诱导细胞分化,用油红O染色观察脂滴形成情况;测定分化后细胞中甘油三酯、总胆固醇的含量以及相关炎症因子如肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-10、瘦素(leptin,LEP)和脂联素(adiponectin,ADPN)的分泌量;利用Western Blot法检测细胞过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferators activated receptor,PPAR)γ、CCAAT增强子结合蛋白(CCAAT-enhancer-binding proteins,C/EBP)-α、固醇调节元件结合蛋白1(sterol regulatory element-binding protein 1,SREBP1)、PPARα、解偶联蛋白1(uncoupling protein 1,UCP-1)、肉碱棕榈酰转移酶1(carnitine palmitoyltransferase 1,CPT-1)蛋白的相对表达水平。结果:3T3-L1前脂肪细胞存活率随木犀草苷质量浓度的升高整体呈降低趋势,木犀草苷质量浓度在5~60μg/mL时细胞存活率均在80%以上。木犀草苷处理组可显著抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化,减少脂质积累;木犀草苷可下调成脂分化后细胞中总胆固醇、甘油三酯的含量以及炎症因子TNF-α、IL-6和LEP的分泌量,上调IL-10和ADPN的分泌量;木犀草苷能下调PPARγ、C/EBP-α和SREBP1蛋白的相对表达水平,上调PPARα、UCP-1和CPT-1蛋白的相对表达水平。结论:木犀草苷可以抑制3T3-L1前脂肪细胞分化和影响脂代谢,其机制一方面是下调PPARγ、C/EBP-α和SREBP1蛋白表达,抑制脂肪合成;另一方面是激活PPARα上调下游蛋白,促进脂肪消耗;木犀草苷还可能通过调节细胞因子的分泌量,促进细胞脂解,从而改善脂代谢失衡。

高良姜二苯庚烷化合物对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响和机制研究

目的探讨高良姜二苯庚烷化合物对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响和机制。方法本研究选取2022年9月—2023年2月珠海市人民医院·暨南大学附属珠海医院3T3-L1前脂肪细胞为研究对象,使用MTT法评估高良姜二苯庚烷化合物对3T3-L1细胞增殖的影响。通过油红O染色检测分析高良姜二苯庚烷化合物对3T3-L1细胞分化的影响。应用实时定量聚合酶链锁反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)方法检测高良姜二苯庚烷化合物对过氧化物酶体增殖物激活受体γ(Peroxisome Proliferator Activated Receptorγ,PPARγ)和CCAAT/增强子结合蛋白α(CCAAT/Enhancer Binding Proteinα,C/EBPα)基因mRNA表达的调控作用。通过Western blot分析检测高良姜二苯庚烷化合物对PPARγ和C/EBPα蛋白表达的影响。结果高良姜二苯庚化合物(0、0.05、0.2、0.4 g/L)在24、48 h对前脂肪细胞的生长表现为增殖趋势,呈现一定的量效关系,其中高良姜二苯庚烷化合物浓度为0.4 g/L时3T3-L1增殖[(7.02±0.35)、(17.23±0.95)g/L]高于与对照组,差异有统计学意义(t=13.794、10.843,P均<0.05)。高良姜二苯庚烷化合物呈剂量依赖性地抑制了3T3-L1细胞的增殖。油红O染色结果显示,高良姜二苯庚烷化合物处理显著抑制了3T3-L1细胞的脂肪细胞分化,并减少了脂滴的积累;100μmol/L处理组,PPARγ和C/EBPα的mRNA表达水平显著降低。高良姜二苯庚烷化合物通过抑制PPARγ和C/EBPα基因的表达,调控了3T3-L1前脂肪细胞的分化过程,从而减少了脂肪滴的积累。结论高良姜二苯庚烷化合物抑制3T3-L1前脂肪细胞分化,其机制与PPARr/EBPα的低表达有关。

紫色悬钩子提取物对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响

目的研究紫色悬钩子提取物对3T3-L1前脂肪细胞成脂分化的影响,进一步探讨紫色悬钩子对脂肪细胞代谢的潜在机制,为肥胖症的预防和治疗提供新依据。方法MCI中压色谱柱分离制备紫色悬钩子提取物。MTT法检测细胞增殖,油红O染色及试剂盒检测分析细胞的脂质积累水平。Western blot检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、CCAAT增强子结合蛋白(C/EBPα)、腺苷5′-单磷酸活化蛋白激酶(AMPK)及磷酸化的AMPK(p-AMPK)蛋白的表达。结果当紫色悬钩子提取物的质量浓度≤100 mg·L^(-1)时,对细胞活力的影响无明显变化(P<0.05),其中Fr.2、Fr.3、Fr.4、Fr.5可降低细胞中脂质的积累(P<0.05)。Fr.1低剂量组(10 mg·L^(-1))和Fr.4的高剂量组(100 mg·L^(-1))可以减少细胞中总胆固醇(TC)和三酰甘油(TG)含量,降低PPARγ、C/EBPα,升高p-AMPK的蛋白表达(P<0.05)。结论紫色悬钩子提取物可能是通过激活AMPK蛋白,抑制PPARγ信号通路相关蛋白的表达,从而降低细胞中脂质的积累。

新型SIRT1激活剂XZG2151对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响

目的探讨新型沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)激活剂化合物XZG2151对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响。方法将3T3-L1前脂肪细胞分成4组:3T3-L1细胞组(Pre组)、DMSO组(Ctrl组)、阳性对照组(SRT2104组)、实验组(XZG2151组)。采用CCK8法检测XZG2151对3T3-L1细胞增殖的影响。油红O染色法、甘油含量测定法观察XZG2151对3T3-L1细胞中脂肪形成的影响。实时荧光定量PCR及蛋白质免疫印迹法检测XZG2151对3T3-L1细胞分化过程中相关基因和蛋白表达水平的影响。结果10μmol/L XZG2151对3T3-L1前脂肪细胞的增殖无显著影响(P>0.05)。与Ctrl组相比,SRT2104组和XZG2151组3T3-L1细胞脂肪含量显著降低(P<0.05)。与Ctrl组相比,XZG2151组SIRT1、激素敏感脂肪酶(HSL)、肉毒碱棕榈酰基转移酶1A(CPT1A)的mRNA表达水平显著升高(P<0.05);脂肪合成转录因子PPARγ和C/EBPβ、硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)、乙酰辅酶A羟化酶(ACC)、脂肪酸合成酶(FASN)的mRNA表达水平显著下降(P<0.05)。此外,与Ctrl组相比,XZG2151组SIRT1、p-ACC、CPT1A蛋白表达显著升高(P<0.05),FASN蛋白表达显著下降(P<0.05)。结论XZG2151可调节3T3-L1前脂肪细胞的脂肪生成和脂质代谢,从而抑制前脂肪细胞分化。

荭草素抑制3T3-L1前脂肪细胞分化及其改善胰岛素抵抗的作用研究

目的研究荭草素对3T3-L1前脂肪细胞分化及对脂肪细胞胰岛素抵抗的影响,并探讨其作用机制。方法传统鸡尾酒法诱导分化3T3-L1前脂肪细胞,MTT法检测荭草素对前脂肪细胞活力的影响,油红O染色法检测脂质积累,酶法检测细胞内甘油三酯(triglyceride,TG)的含量。地塞米松诱导成熟的脂肪细胞,建立胰岛素抵抗模型,荧光标记2-脱氧葡萄糖(2-[N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diaxol-4-yl)amino]-2-deoxyglucose,2-NBDG)摄入法观察脂肪细胞对葡萄糖的摄取能力;Western blot检测腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK)、乙酰辅酶A羧化酶(acetyl Co A carboxylase,ACC)的磷酸化水平及葡萄糖转运体4(glucose transporter type 4,GLUT4)的表达水平,免疫荧光法检测GLUT4的向膜转位能力。结果荭草素可浓度依赖性地减少细胞脂滴的积累及细胞内TG的含量,但对细胞活力无明显的影响(P>0.05)。胰岛素抵抗状态下,荭草素明显增加脂肪细胞对2-NBDG的摄取(P<0.05),明显上调AMPK、ACC的磷酸化水平(P<0.05),促进GLUT4的向膜转位及表达。结论荭草素抑制前脂肪细胞的分化,同时,荭草素通过上调AMPK/GLUT4信号途径相关蛋白的表达,促进了细胞对葡萄糖的摄取,达到改善胰岛素抵抗的作用。

11β-羟化类固醇脱氢酶1促进3T3-L1前脂肪细胞分化

目的:应用3T3-L1细胞模型研究11β-羟化类固醇脱氢酶1(11β-HSD1)与前脂肪细胞分化的关系,探讨11β-HSD1在前脂肪细胞分化及肥胖中的作用。方法:构建11β-HSD1-SiRNA表达质粒pGCsilencerTMH1/TetO1-11β-HSD1并稳定转染3T3-L1细胞,采用油红染色观察脂滴堆积情况,采用Westernblot方法检测11β-HSD1在正常3T3-L1细胞分化过程中的表达;并用Real-timePCR检测脂肪细胞分化相关标志基因的变化,阐明11β-HSD1对前脂肪细胞成脂分化的影响。结果:正常3T3-L1前脂肪细胞在上述三联诱导分化后脂滴堆积随着分化过程逐渐增加;在pGCsilencerTMH1/TetO1-11β-HSD1转染的3T3-L1诱导分化过程中可见脂滴堆积的减少。在3T3-L1前脂肪细胞分化模型中(days0,2,4,6,8),11β-HSD1蛋白水平是上调的。3T3-L1前脂肪细胞分化模型中GR在分化模型早期(D4及D6)是上调的,但是在分化后期(D8)很快又下降。在正常3T3-L1前脂肪细胞分化早期LPL上调,随着分化后期FAS、PPARγ等明显上升,Pref-1作为脂肪细胞分化抑制因子,在分化早期升高,在分化后期明显下调。在pGCsilencerTMH1/TetO1-11β-HSD1转染后的3T3-L1细胞分化模型中上述有关标志基因发生变化。结论:11β-HSD1作为受体前调节剂促进前脂肪细胞分化,与肥胖和胰岛素抵抗相关。

血管紧张素II对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响

为探讨血管紧张素II(angiotensin II,AngII)对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响,采用鸡尾酒法诱导3T3-L1前脂肪细胞分化,并用油红O染色法和还原型烟酰胺嘌呤二核苷酸(nicotinamide-adenine dinuceotid,NADH)氧化速率法检测了3T3-L1脂肪细胞分化过程中胞浆脂质的累积和甘油磷酸脱氢酶(glycerol phosphatedehydrogenase,GPDH)的活性。结果表明,100 nmol/L的AngII可显著增大3T3-L1前脂肪细胞分化过程中胞浆脂质累积和GPDH活性(P<0.01),外源性AngII可促进3T3-L1前脂肪细胞的分化,增加脂肪细胞中脂类合成和储存。

五甲基槲皮素对3T3-L1前脂肪细胞分化及对脂肪细胞PPAR-γ和脂联素mRNA表达的影响

目的：比较PMQ和罗格列酮3T3-L1前脂肪细胞分化及脂肪细胞PPA脚和脂联素mRNA表达的影响。方法：待细胞融合2天后，加用胰岛素诱导3T3-L1前脂肪细胞分化。分化的过程中全程分别给予0.1，0.3，1,3，10，30，100μM的五甲基槲皮素和1，10μM的罗格列酮。诱导分化第12天，油红O染色，异丙醇洗脱后，570nm波长测值，

丝瓜络多糖对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响

目的:分离提纯丝瓜络多糖,观察其对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响,并探讨其作用机制。方法:采用热水浸提法和DEAE-cellulose柱层析法对丝瓜络多糖进行初步分离和提纯,并对分离组分进行红外光谱分析。运用油红O染色法,观察丝瓜络多糖对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响,并通过RT-q PCR观察3T3-L1前脂肪细胞分化时CCAAT增强子结合蛋白β(CCAAT/enhancer binding proteinβ,C/EBPβ)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorsγ,PPARγ)和CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)mRNA的表达情况。结果:经DEAE-cellulose柱层析法分离得到2个多糖组分,丝瓜络提取物Ⅰ(RLFⅠ)和丝瓜络提取物Ⅱ(RLFⅡ),红外光谱分析结果表明2个组分均为多糖类物质。RLFⅠ具有显著抑制3T3-L1前脂肪细胞分化及甘油三酯合成的作用(P<0.05),RLFⅡ则无显著效应。与对照组相比,RLFⅠ处理组3T3-L1前脂肪细胞C/EBPβ、PPARγ和C/EBPα的mRNA表达水平明显降低(P<0.05)。结论:丝瓜络多糖RLFⅠ具有显著抑制3T3-L1前脂肪细胞分化的能力,其作用机制可能与下调脂肪细胞分化转录因子C/EBPβ、PPARγ和C/EBPα有关。

绿原酸对3T3-L1前脂肪细胞分化的抑制作用

目的研究绿原酸对3T3-L1前脂肪细胞分化的抑制作用。方法第1天,细胞培养皿中加入不同质量浓度绿原酸(50、100、200μg/m L),以氯化锂为阳性对照。第9天,油红O染色观察细胞内脂质沉积情况,生化法检测细胞内甘油三酯(TG)水平,Western blot、RT-PCR法测定PPARγ2、a P2、LPL mRNA和蛋白表达,免疫荧光染色观察PPARγ2在细胞浆及细胞核中的表达,CCK-8法分析绿原酸对3T3-L1细胞的细胞毒作用。结果绿原酸无细胞毒作用。随着绿原酸质量浓度增加,脂质沉积逐渐减少,TG水平逐渐下降,细胞核中PPARγ2蓝色荧光逐渐变淡。与诱导分化组比较,绿原酸组(50、100、200μg/m L) PPARγ2、a P2、LPL mRNA和蛋白表达显著降低(P <0. 05),并呈量效关系。结论绿原酸可抑制3T3-L1前脂肪细胞分化,可能是该成分抑制脂肪生成、安全有效减肥的机制。

叶瓜参长链碱抑制3T3-L1前脂肪细胞分化作用机制

目的:研究叶瓜参长链碱(long-chain base from the sea cucumber Cucumaria frondosa,Cf-LCB)对3T3-L1前脂肪细胞分化的作用,并探讨其作用机制。方法:以四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测Cf-LCB对3T3-L1前脂肪细胞增殖活性的影响;采用传统鸡尾酒法诱导3T3-L1前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞,分别采用油红O染色和甘油三酯(triglycerides,TG)含量测定法评价其对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响;反转录实时荧光定量聚合酶链式反应(quantity real-time reverse transcript polymerase chain reaction,q RT-PCR)法检测脂肪细胞分化关键基因CCAAT增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer binding protein alpha,C/EBPα)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferators-activated receptors gamma,PPARγ)以及WNT/β-catenin通路关键基因WNT10b(wingless-type MMTV integration site family members)、卷曲蛋白1(frizzled protein1,FZ1)、低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LDL-receptor-related protein6,LRP6)和β-连环蛋白(β-catenin)的m RNA表达水平;Western blotting法检测WNT/β-catenin通路关键基因LRP6和β-catenin的蛋白表达量。结果:Cf-LCB能显著抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖;抑制3T3-L1细胞脂滴形成以及C/EBPα和PPARγm RNA表达;显著上调WNT/β-catenin通路关键基因FZ1、LRP6和β-catenin m RNA表达,对WNT10b的表达无影响;显著促进LRP6和β-catenin的蛋白表达,提高核内β-catenin含量。结论:Cf-LCB能够显著抑制3T3-L1前脂肪细胞分化,其作用机制与激活WNT/β-catenin通路有关。

中药复方益糖康对3T3-L1前脂肪细胞分化过程中凋亡的影响

目的:探讨中药复方益糖康对3T3-L1前脂肪细胞凋亡的影响。方法:以分化的3T3-L1前脂肪细胞为研究对象,给予含益糖康的大鼠血清,应用AO/EB染色的方法,确定对凋亡影响的含药血清浓度;用Western检测凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2的表达,并用t检验进行统计分析;用电镜观察细胞凋亡的形态。结果:含益糖康的大鼠血清,对3T3-L1前脂肪细胞的凋亡有促进作用,其中5%含药大鼠血清作用4天效果最佳;含药血清组与正常组比较,凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2的表达有差异(P<0.05);含药血清组电镜观察有线粒体溶解、细胞核固缩、伪足减少。结论:中药复方益糖康具有促进3T3-L1前脂肪细胞分化过程中的凋亡的作用。

太子参提取物对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响

目的探索太子参提取物对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响。方法采用超声提取法获得太子参乙醇提取物,再分别用石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇进行连续萃取,用得到的太子参各溶剂萃取层作用于3T3-L1前脂肪细胞分化模型,以罗格列酮为阳性对照药,并通过油红O染色观察其对前脂肪细胞分化过程的影响。结果太子参乙醇提取物及各极性溶剂萃取层在0.4μg·m L-1和0.8μg·m L-1两个浓度下均能在一定程度上促进前脂肪细胞的分化过程,而且乙酸乙酯萃取层活性最强。结论太子参乙酸乙酯萃取层具有较好的促进3T3-L1前脂肪细胞分化的活性。

3T3-L1前脂肪细胞分化过程中miRNAs表达谱的变化

目的探讨3T3-L1前脂肪细胞分化过程中微小RNA(miRNAs)表达谱的变化。方法3T3-Ll前脂肪细胞培养和诱导分化,通过形态学观察和RT-PCR方法,判断3T3-Ll前脂肪细胞是否分化成脂肪细胞。运用miRNAs芯片技术检测3T3-Ll前脂肪细胞和脂肪细胞中差异表达miRNAs。结果3T3-L1前脂肪细胞呈现成纤维状,诱导分化的第9天,细胞变成球形,内含许多脂滴;过氧化物酶体增殖物激活受体r2(PPARr2)和脂肪性脂肪酸结合蛋白(aP2)的表达显著增加。3T3-L1前脂肪细胞分化成脂肪细胞上调的miRNAs有26个,下调的miRNAs有2个。结论3T3-L1前脂肪细胞分化过程中存在miRNAs表达谱的变化。

维生素D及其受体对3T3-L1前脂肪细胞分化影响的分子机制

前脂肪细胞增殖、分化过度是肥胖的一个重要病理机制。早在20多年前就已发现维生素D可以抑制3T3-L1前脂肪细胞系分化成熟,相关的分子机制近几年有了新的进展。3T3-L1分化是一个受多种基因蛋白调节的具有严格时序性的过程,现已证实维生素D与其受体结合后作用于3T3-L1分化早期的分子事件,如减少PPARγ配体形成,减少CCAAT/增强子结合蛋白βmRNA的表达,抑制C/EBPβ的转录活性,同时也作用于晚期分子事件,如抑制C/EBPα和PPARγ的mRNA表达等,通过影响这些重要分子发挥其抑制作用。

益糖康对3T3-L1前脂肪细胞分化过程中信号转导的影响

目的探讨中药复方益糖康对3T3-L1前脂肪细胞分化过程中胰岛素样生长因子(IGF)-1R、PI3K、AKT、mTOR信号转导的影响。方法以生长抑制2 d的3T3-L1前脂肪细胞为研究对象,给予含益糖康的大鼠血清、LY294002预处理细胞,用Western印迹检测IGF-1R、PI3K、AKT、mTOR的蛋白表达。结果益糖康下调IGF-1R的蛋白表达,LY294002组与正常组比较,IGF-1R的蛋白表达没有差异(P>0.05);益糖康、LY294002均能下调PI3K、AKT、mTOR的蛋白表达。结论中药复方益糖康通过PI3K、AKT、mTOR通路来抑制脂肪分化过程中的脂滴聚集。

羊栖菜多糖对3T3-L1前脂肪细胞分化及其相关基因表达的影响

目的:探讨羊栖菜多糖(Sargassum fusiforme polysaccha-ride,SFPS)在3T3-L1前脂肪细胞分化中的作用及其机制。方法:采用MTT法测定细胞增殖活性,采用油红O染色分析细胞分化程度,采用生化法检测甘油三酯(triglyceride,TG)的含量,蛋白印迹法检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(Peroxisome proliferator activator receptorγ,PPARγ)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)的蛋白表达。结果:不同浓度SFPS组与对照组比较,3T3-L1细胞的分化显著抑制,细胞中的脂质及甘油三酯含量显著降低,PPARγ、FAS蛋白表达显著减少。结论:SFPS可以抑制3T3-L1细胞分化,其机制可能与抑制PPARγ、FAS蛋白表达有关。

蛋白酪氨酸磷酸酶1B在3T3-L1前脂肪细胞分化过程中表达的变化

目的:观察在3T3-L1前脂肪细胞分化过程中蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)mRNA表达及其蛋白水平的变化,探讨PTP1B与脂肪细胞分化的关系。方法:体外培养3T3-L1前脂肪细胞,在3T3-L1前脂肪细胞分化成熟过程中(第1～10日),采用油红O染色及RT-PCR法检测过氧化物酶体增殖物活化受体β2(PPARγ2)基因表达评价脂肪细胞分化成熟情况,RT- PCR法及Western印迹法检测脂肪细胞分化过程中PTP1B mRNA表达及其蛋白水平的变化。结果:随着脂肪细胞诱导分化逐步深入,油红O染色显示其中脂滴形成逐渐增多,至占全视野90%以上;同时PPARγ2基因表达逐步增多,均提示脂肪细胞分化逐步成熟,至最终分化为成熟脂肪细胞。PTP1B mRNA和蛋白水平在前脂肪细胞中表达较高,随着脂肪细胞的逐步成熟,其表达逐渐降低,至分化成熟时表达水平降至最低。结论:在3T3-L1前脂肪细胞分化成熟过程中,PTP1B mRNA及其蛋白表达水平逐渐减低,PTP1B可能参与了脂肪细胞分化。

牛磺酸对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响

目的:有研究发现,喂食牛磺酸的糖尿病鼠脂肪细胞摄糖的能力增加,但牛磺酸是否能影响脂肪细胞分化,目前还尚不清楚。本实验观察牛磺酸对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响,并探讨牛磺酸影响3T3-L1前脂肪细胞分化的机制。方法:实验于2006-07/09在中南大学湘雅三医院实验中心完成。①实验材料:实验中应用的3T3-L1细胞由中国科学院上海细胞库提供。②实验方法:将3T3-L1细胞用含体积分数为0.10胎牛血清的高糖DMEM培养液培养,内含108u/L青霉素,80×1010U/L链霉素。细胞达汇片后,按5×107L-1密度接种于培养瓶中,应用0.5mmol/LIBMX、0.5mg/L胰岛素和1μmol/L地塞米松诱导分化,实验组加入牛磺酸,对照组未实施牛磺酸干预。油红O染色观察脂肪细胞分化情况。10,20mmol/L牛磺酸分别干预C3T3-L1前脂肪细胞24,48h,抽提实验组和对照组细胞RNA及蛋白。③实验评估:采用RT-PCR及Western-blot方法观察脂肪分化相关基因的表达变化。结果:①10mmol/L牛磺酸干预后14d,实验组油红O染色阳性脂肪细胞明显少于对照组。②10,20mmol/L牛磺酸分别干预3T3-L1前脂肪细胞24,48h后,对脂肪分化相关基因Insig-2蛋白、PPAR、Insing-2、脂联素、脂联素受体、GLUT-4、AP-2mRNA表达无明显影响。结论:牛磺酸可抑制前脂肪细胞分化,但具体机制还需要进一步研究。