睾丸酮丛毛单胞菌teiR基因插入失活突变体构建及降解特性分析

睾丸酮丛毛单胞菌(Comamonas testosteroni)是革兰氏阴性菌,能够以各种类固醇化合物作为唯一碳源和能源,生物信息学分析发现睾丸酮丛毛单胞菌teiR基因编码蛋白属于LuxR-type转录调控蛋白.利用同源重组原理构建teiR基因插入失活突变体C.mut,初步研究了teiR基因在类固醇代谢途径中的作用,以及对睾丸酮丛毛单胞菌关键降解酶3a-HSD/CR的表达影响.结果发现,teiR基因插入失活突变体C.mut在LB培养基中的生长速率不受影响,突变体C.mut抑制了teiR基因和关键降解酶3a-HSD/CR的表达,同时突变体C.mut丧失了以睾丸酮作为碳源进行生长的能力.结果表明teiR基因调节睾丸酮丛毛单胞菌类固醇代谢,同时teiR基因表达对3a-HSD/CR基因的表达是必需的.

可见光直接光度法测定硫代氧化型辅酶

建立了可见光直接光度法测定硫代氧化型辅酶。方法为通过确定测定试剂中各组分最佳含量,建立了一种运用3а-HSD偶联的酶法光度法测定Thio-NAD＋。本法线性范围为0~2 mmol∕L,平均回收率为102.67%,批内变异系数（CV）和批间变异系数分别为1.50%~2.49%和2.44%~4.04%,线性回归方程和相关系数分别为Y=0.0467X＋0.0033,r=0.9985。本法具有选择性好、灵敏度高、测定简便等特点,能真实反映Thio-NAD＋浓度,对于提高Thio-NAD＋检测的效率、结果的准确性都具有重要意义。