miR-15b-3p靶向CMTM6对胃癌细胞上皮-间充质转化的影响

目的探讨miR-15b-3p靶向趋化素样因子超家族6(CMTM6)对胃癌细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响。方法采用实时荧光定量PCR法检测人胃癌细胞SGC-7901、BGC-823、MKN-1及人正常胃黏膜上皮细胞GES-1中miR-15b-3p和CMTM6表达水平。采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-15b-3p和CMTM6的靶向关系。将BGC-823细胞随机分为对照组(不做处理)、miR-15b-3p抑制剂组(转染miR-15b-3p抑制剂)、miR-15b-3p抑制剂+shRNA-CMTM6组(转染miR-15b-3p抑制剂和shRNA-CMTM6)。分别采用MTT实验、细胞划痕愈合实验、Transwell实验检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力。采用蛋白质印迹法检测EMT相关蛋白表达水平。结果与GES-1细胞相比,SGC-7901、BGC-823和MKN-1细胞中miR-15b-3p和CMTM6 mRNA的相对表达量均显著升高(P均<0.05)。双荧光素酶报告基因实验检测结果显示,与miR-NC+CMTM6-WT组相比,miR-15b-3p抑制剂+CMTM6-WT组细胞的相对荧光素酶活性显著降低(P<0.05)。与对照组相比,miR-15b-3p抑制剂组细胞中miR-15b-3p和CMTM6mRNA的相对表达量均显著降低(P均<0.05);与miR-15b-3p抑制剂组相比,miR-15b-3p抑制剂+shRNA-CMTM6组细胞中miR-15b-3p的相对表达量无显著变化(P>0.05),而CMTM6 mRNA的相对表达量显著降低(P<0.05)。与对照组相比,miR-15b-3p抑制剂组的细胞增殖抑制率升高,细胞划痕愈合率降低,细胞侵袭数目减少,N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平均降低,E-cadherin蛋白表达水平升高,差异均具有统计学意义(P均<0.05)。与miR-15b-3p抑制剂组相比,miR-15b-3p抑制剂+shRNA-CMTM6组的细胞增殖抑制率升高,细胞划痕愈合率降低,细胞侵袭数目减少,N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平均降低,E-cadherin蛋白表达水平升高,差异均具有统计学意义(P均<0.05)。结论miR-15b-3p表达下调可通过靶向CMTM6而抑制胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力及EMT进程。

MiR-15a-3p调节Twist1/Jagged1/Notch/KLF4信号通路对肺腺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的:探讨miR-15a-3p通过调节碱性螺旋环螺旋转录因子1(Twist1)/Jagged1/Notch/Kruppel样因子4(KLF4)信号通路对肺腺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法:采用RT-qPCR实验检测肺腺癌组织、癌旁组织和肺腺癌细胞系(A549、HCC827)及人肺正常上皮细胞(BEAS-2B)中miR-15a-3p和Twist1 mRNA水平。A549细胞分成Control组(未转染)、NC mimics组(转染NC mimics)、miR-15a-3p mimics组(转染miR-15a-3p mimics)、si-NC组(转染si-NC)、si-Twist1组(转染si-Twist1)、miR-15a-3p mimics+pcDNA组(共转染miR-15a-3p mimics和pcDNA)、miR-15a-3p mimics+pc-Twist1组(共转染miR-15a-3p mimics和pc-Twist1)。CCK-8法检测细胞增殖情况;TUNEL凋亡试剂盒检测细胞凋亡情况;Transwell实验评估细胞迁移和侵袭能力;双荧光素酶报告分析实验确定miR-15a-3p和Twist1的靶向作用关系;Western blotting实验检测Twist1、Jagged1、Notch、KLF4蛋白表达水平。结果:在肺腺癌组织和细胞系中,miR-15a-3p表达降低,Twist1 mRNA表达升高(P<0.05)。A549细胞通过转染miR-15a-3p mimics或si-Twist1,上调miR-15a-3p或下调Twist1后,细胞增殖率(24 h、48 h、72 h)显著下降,TUNEL阳性细胞比显著增加,细胞迁移数和侵袭数显著降低(P<0.05)。Twist1是miR-15a-3p的下游靶基因,被miR-15a-3p直接负调控。Twist1的上调明显逆转了miR-15a-3p过表达对A549细胞进展的抑制作用。miR-15a-3p过表达抑制Jagged1、Notch、KLF4蛋白表达,而继续上调表达Twist1后Jagged1、Notch、KLF4蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论:miR-15a-3p通过靶向抑制Twist1/Jagged1/Notch/KLF4信号通路,降低A549细胞增殖、迁移和侵袭能力,促进凋亡。

上皮性卵巢肿瘤中3p14、3p25杂合性丢失

目的 :经对原发性上皮性卵巢癌的 3号染色体短臂 (3p14和 3p2 5 )杂合性丢失 (LOH)分析研究 ,以探讨 3pLOH与卵巢癌的发生发展之间的相关性。方法 :采用PCR法分别对 5 0例原发性上皮性良恶性卵巢肿瘤 (4 0例癌组织及 10例非癌组织 )的 3p14及 3P2 5处两个特定的位点D3S12 2 8和D3S10 38作杂合性丢失 (LOH)检测。结果 :40例原发性上皮性卵巢癌中在 3p处总LOH率为 80 % ,其中 3p14处发生LOH为 2 4例 (6 0 .0 % ) ,3p2 5处为16例 (4 0 .0 % ) ,两处共同发生LOH的有 8例 (2 0 .0 % )。FIGO卵巢癌的Ⅲa及Ⅲb期患者 3pLOH率分别为93.8%及 91.6 %明显高于Ⅰ—Ⅱ期患者 5 0 .0 %的 3p丢失率 (P <0 .0 5 )。 10例良性卵巢肿瘤患者分别在 3p14和3p2 5各处仅 1例出现杂合性丢失 ,但未见有共丢失现象。 40例不同病理类型的卵巢癌中以浆液性癌 3p14和 3p2 5LOH率为最高 ,但因病例数少而无统计学意义 (P >0 .0 5 )。结论 :3p处可能存在一或多个与卵巢癌发生发展有关的侯选抑癌基因并与卵巢癌的恶性程度相关 。

H_9P_2W_(15)V_3/C催化1,4-丁二醇环化脱水制备四氢呋喃

以活性炭为载体,通过浸渍法制备了H9P2W15V3/C催化剂,对催化剂进行FT-IR表征。以催化1,4-丁二醇脱水制备四氢呋喃为探针反应,考察催化剂的酸催化性能。通过正交实验得出了最佳条件反应:w(催化剂)=3.93%(相对1,4丁二醇质量),反应温度为185～190℃,反应时间为40 min,四氢呋喃平均收率达93.30%,催化剂重复使用3次,产率仍可达90.94%。本工艺具有绿色、安全、操作简单、收率高等优点。

H9P2W15V3／C催化绿色合成对羟基苯甲酸丁酯

以活性碳为载体,通过浸渍法制备了H9P2W15V3/C催化剂,对催化剂进行Uv-Vis、FT-IR表征。以对羟基苯甲酸丁酯的合成反应为探针,考察了催化剂的催化性能。研究了磷钨钒杂多酸负载量、催化剂用量、醇酸比、反应时间和反应温度对反应的影响。通过单因素实验和正交实验确定了反应的最佳条件:杂多酸负载量为30%,催化剂用量8.7%(按反应体系总质量计算),醇酸摩尔比2∶1,反应时间3h,反应温度125℃,酯化率可达91.30%。催化重复使用5次,酯化率仍可达76.42%。

α-K_9P_2W_(15)Nb_3O_(62)纳米粒子的制备与表征

目的对多金属氧酸盐α-K9P2W15Nb3O62的形貌和结构进行研究。方法用高压静电纺丝和程序焙烧的方法,制备α-K9P2W15Nb3O62纳米粒子。结果红外光谱,X-射线粉末衍射数据表明制备的纳米材料依然保持了Dawson-Wells结构,扫描电子显微镜显示焙烧后得到的α-K9P2W15Nb3O62纳米粒子直径约为220 nm。结论成功获得了具有纳米粒子形貌的多金属氧酸盐:α-K9P2W15Nb3O62。

MicroRNA-15b-3p对三阴性乳腺癌细胞增殖、迁移能力的影响

目的 研究MicroRNA-15b-3p对HCC1937三阴性乳腺癌细胞株增殖、迁移、凋亡能力的影响。方法 选用乳腺癌细胞株MCF-7、T47D、HCC1937及MDA-MB-468作为研究模型,实时荧光定量PCR方法分别检测4种细胞株中hsa-miR-15b-3p的表达情况。体外培养HCC1937细胞,将上调后的MicroRNA-15b-3p转染至HCC1937细胞株中设为实验组,并设置阴性对照组,Brdu实验检测细胞乳腺癌细胞的增殖能力、Transwell小室检测细胞迁移能力、FACS细胞凋亡检测细胞凋亡情况。结果 hsa-miR-15b-3p在不同的乳腺癌细胞株中表达量均较正常乳腺细胞少,实验组细胞增殖能力强于阴性对照组(P<0.05),实验组乳腺癌细胞的迁移能力强于阴性对照组(P<0.05),但实验组与对照组细胞凋亡水平差异无显著性。结论 MicroRNA-15b-3p可增强三阴性乳腺癌细胞的增殖、迁移能力,有可能会促进乳腺癌的发生与发展。

普鲁卡因通过miR-15a-5p/PI3K-AKT3途径调控乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制

目的探讨普鲁卡因对乳腺癌细胞MCF-7增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法以不同浓度(0.5、1.0、2.5、5.0、10.0 mmol/L)普鲁卡因处理MCF-7细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;5.0 mmol/L普鲁卡因处理MCF-7细胞48 h后,Transwell法检测迁移和侵袭,实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-15a-5p的表达。转染miR-15a-5p mimic至MCF-7细胞,检测细胞增殖、迁移和侵袭。靶基因预测软件预测miR-15a-5p和AKT3靶向结合位点,双荧光素酶报告基因实验检测二者靶向关系。转染miR-15a-5p inhibitor至MCF-7细胞,并用5.0 mmol/L普鲁卡因处理48 h,检测细胞增殖、迁移和侵袭,Western印迹检测蛋白激酶B(AKT)3的表达。结果与Con组相比,普鲁卡因能明显抑制MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭(P<0.001),促进细胞中miR-15a-5p的表达(P<0.01)。过表达miR-15a-5p可抑制MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭(P<0.001,P<0.01,P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实miR-15a-5p和AKT3的靶向结合有关。抑制miR-15a-5p表达减弱了普鲁卡因对MCF-7细胞增殖、迁移、侵袭及AKT3表达的抑制作用(P<0.05)。结论普鲁卡因能够抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖、迁移和侵袭能力,其机制可能与调控miR-15a-5p/磷脂酰肌激-3-激酶(PI3K)-AKT3途径有关。

H6P2Mo15W3O62改性MOF-508金属有机框架对水中亚甲基蓝的吸附

采用溶剂热法,在合成金属有机骨架MOF-508的过程中引入活性组分H_6P_2Mo_(15)W_3O_(62),制备出一种新型吸附剂H_6P_2Mo_(15)W_3O_(62)/MOF-508,利用FT-IR、XRD、TG、BET、SEM对其结构进行分析,进而研究其亚甲基蓝的吸附性能.研究结果表明,H_6P_2Mo_(15)W_3O_(62)/MOF-508对亚甲基蓝有很好的吸附性能,在20℃和溶液的p H=2的条件下的吸附量达277.78 mg/g.等温吸附模型符合Langmuir等温吸附型,拟二级动力学能较好描述吸附的过程.H_6P_2Mo_(15)W_3O_(62)/MOF-508对亚甲基蓝的吸附是自发和放热的过程.

H_6P_2Mo_(15)W_3O_(62)修饰三维金属有机骨架Cu(BDC)(4,4'-Bipy)_(0.5)吸附亚甲基蓝

采用溶剂热法,在合成金属有机骨架Cu(BDC)(4,4'-Bipy)_(0.5)的过程中引入活性组分H_6P_2Mo_(15)W_3O_(62),制备出一种新型吸附剂H_6P_2Mo_(15)W_3O_(62)/Cu(BDC)(4,4'-Bipy)_(0.5)。利用IR、XRD、BET、SEM对其结构进行分析,进而研究其亚甲基蓝的吸附性能。研究结果表明,H_6P_2Mo_(15)W_3O_(62)/Cu(BDC)(4,4'-Bipy)_(0.5)对亚甲基蓝有很好的吸附性能,在40℃和pH 2的条件下吸附量达78.8 mg/g。H_6P_2Mo_(15)W_3O_(62)/Cu(BDC)(4,4'-Bipy)_(0.5)对亚甲基蓝的吸附符合Langmuir等温吸附型和拟二级动力学模型,吸附过程是一个自发和吸热过程。

H_6P_2Mo_(15)W_3O_(62)/TiO_2催化合成丁醛乙二醇缩醛

采用浸渍法制备H_6P_2Mo_(15)W_3O_(62)/TiO_2催化剂,使用正丁醛和乙二醇来合成丁醛乙二醇缩醛.经过实验研究得出此催化剂在缩醛反应中表现出的性能,催化剂用量、原料量比、环己烷用量和反应时间等多种因素对收率的影响.实验表明最佳反应条件为:在催化剂用量1.1%、正丁醛和乙二醇的摩尔比为1.0∶1.6、带水剂10.0ml、反应时间100 min,产物的收率达80.0%.

微小RNA-15a-3p靶向调控烯醇化酶2对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨微小RNA-15a-3p(miR-15a-3p)靶向调控烯醇化酶2(ENO2)对卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响。方法 采用qRT-PCR检测人卵巢癌组织和细胞系中miR-15a-3p表达,对卵巢癌细胞SKOV3进行干预,过表达miR-15a-3p或同时过表达miR-15a-3p和ENO2,分别检测SKOV3细胞增殖、凋亡,Western Blot检测ENO2、CyclinD1、Bax及Bcl-2蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验验证miR-15a-3p和ENO2的靶向关系。结果 miR-15a-3p在卵巢癌组织表达水平(0.47±0.06)显著低于癌旁组织(1.05±0.12),差异有统计学意义(t=25.208,P<0.05)。miR-15a-3p在卵巢癌细胞系HO-8910、SKOV3、A2780及OVCAR3中表达水平分别为(0.75±0.07)、(0.25±0.04)、(0.58±0.07)及(0.47±0.05),显著低于HOSEpiC细胞(1.01±0.13),差异有统计学意义(F=27.326,P<0.05)。选择SKOV3细胞进行后续实验,与miR-NC组比较,miR-15a-3p mimics组细胞凋亡率[(18.56±3.25)%]高于miR-NC组[(2.98±0.84)%],差异有统计学意义(t=28.385,P<0.05);细胞OD值[(0.35±0.04)]和EdU阳性细胞率[(13.35±2.73)%]低于miR-NC组[(0.70±0.08),(35.34±5.56)%],差异均有统计学意义(t=26.335、29.374,均P<0.05);ENO2、CyclinD1及Bcl-2蛋白表达水平[(0.35±0.04)、(0.31±0.04)及(0.44±0.06)]低于miR-NC组[(0.87±0.07)、(1.05±0.13)及(1.23±0.16)],Bax蛋白表达水平[(1.15±0.12)]高于miR-NC组[(0.27±0.03)],差异均有统计学意义(t=25.364、25.735、26.256及25.273,均P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果证实,miR-15a-3p可靶向调控ENO2表达,过表达ENO2可逆转过表达miR-15a-3p对SKOV3细胞增殖的抑制作用并降低细胞凋亡(P<0.05)。结论 miR-15a-3p在卵巢癌组织和细胞中低表达,过表达miR-15a-3p可靶向抑制ENO2表达,抑制卵巢癌细胞增殖,促进细胞凋亡。

微小RNA-15a-3p通过肿瘤蛋白D52增强Hela细胞放射敏感性的实验研究

目的研究微小RNA-15a-3p(microRNA-15a-3p,miR-15a-3p)的表达与Hela细胞放射敏感性的关系,探讨肿瘤蛋白D52(Tumor protein D52,TPD52)参与调节的机制。方法设立空白对照组、放射组、miR-15a-3p mimics组和IR+miR-15a-3p mimics组。各组细胞培养结束后,采用CCK-8试剂盒测定细胞活力,结晶紫染色测定单克隆形成数目,FACScan流式细胞仪检测凋亡,Transwell室测定细胞侵袭水平,RT-PCR法及蛋白印迹法测定miR-15a-3p、TPD52 mRNA和蛋白水平。结果与宫颈癌Hela细胞组比较,IR组、miR-15a-3p mimics组、IR+miR-15a-3p mimics组OD值、存活率、单克隆形成数目、穿膜数、TPD52 mRNA和蛋白降低(t=10.965、8.321、9.654、10.215、14.654、12.698、17.632、10.214、9.874、13.658、17.987、20.321、23.214、14.474、16.214、18.695、17.459、19.510,P均<0.05)。与IR组、miR-15a-3p mimics组比较,IR+miR-15a-3p mimics组OD值、存活率、单克隆形成数目、穿膜数、TPD52 mRNA和蛋白降低(t=10.321、6.657、9.547、10.214、14.658、9.654、8.954、9.547、14.514、10.369、18.654、16.632,P均<0.05)。与宫颈癌Hela细胞组比较,IR组、miR-15a-3p mimics组、IR+miR-15a-3p mimics组凋亡率、miR-15a-3p表达均升高(t=23.321、18.624、9.995、11.214、16.654、9.965,P均<0.05),与IR组、miR-15a-3p mimics组比较,IR+miR-15a-3p mimics组凋亡率、miR-15a-3p表达均升高(t=20.369、17.548、11.548、12.258,P均<0.05)。结论miR-15a-3p过表达能提高人宫颈癌细胞放射敏感性,抑制宫颈癌细胞增殖、侵袭,促进其凋亡;其机制与miR-15a-3p靶向抑制TPD52表达有关。