3p21.3区域鼻咽癌相关基因——BLU的抑癌功能

背景与目的:染色体3p21.3区域的杂合性丢失是鼻咽癌细胞中高发和早期的细胞遗传学变异,提示缺失区域内可能存在与鼻咽癌发生相关的抑癌基因。BLU基因定位于3p21.3,蛋白质结构中含有MYND功能域。已有研究表明,BLU基因在鼻咽癌细胞中发生高频率的启动子甲基化和表达缺失。本研究构建了野生型BLU基因和其突变体的表达载体,分析BLU基因对鼻咽癌细胞恶性增殖的可能抑制作用。方法:用RT-PCR方法钓取BLU基因全长cDNA;用定点突变技术分别构建缺失MYND结构域的突变体、携带Ser402Phe点突变及缺失第405位Cys和第406位Ser的突变体、以及携带Gly160Arg点突变的BLU基因突变体的表达载体。将野生型BLU基因和MYND缺失型突变体转染鼻咽癌细胞CNE1和CNE2,用TUNEL方法检测、观察细胞凋亡情况;通过细胞计数和克隆形成实验分析稳定转染细胞的生长特性;分析稳定转染BLU基因的载体对CNE2细胞裸鼠致瘤性的影响。结果:瞬时转染野生型或MYND缺失突变型BLU基因不能诱导CNE2细胞凋亡;外源表达BLU基因对CNE2的细胞凋亡以及对CNE1、CNE2的细胞增殖和克隆形成能力均无明显影响;BLU基因对CNE2细胞的裸鼠成瘤能力也没有明显抑制作用。结论:尽管BLU基因在鼻咽癌中发生高频率变异,但其对鼻咽癌细胞的恶性增殖并没有明显抑制作用。

3p21·3区域肺癌相关基因RASSF1A的抑癌功能研究

目的观察将野生型RASSF1A通过质粒载体pcDNA3·1导入不表达该基因的非小细胞肺癌(NSCL)细胞系A549后,肺癌细胞生物学特性的变化。方法通过脂质体Lipofectamine2000将质粒载体pcDNA3·1,pcDNA3·1-RASSF1A分别转染入A549细胞系中,通过流式细胞仪检测瞬时转染该基因对细胞周期的影响以及是否诱发凋亡;通过绘制细胞生长曲线,MTT检测,以及集落形成实验来分析稳定转染细胞的生物学特性;同时分析稳定转染RASSF1A对A549细胞裸鼠转移能力的影响。结果瞬时转染RASSF1A使细胞周期阻断在G1/S期(P<0·001);稳定转染该基因的细胞其增殖能力和集落形成能力均显着下降(P<0·01),同时裸鼠转移能力也明显被抑制(P<0·01)。结论野生型RASSF1A基因的外源性表达能显著抑制肿瘤细胞的生长和转移,提示该基因在肺癌的发生发展中发挥重要作用。