3p26.3p25.3缺失患儿1例的临床表型与遗传学分析

目的探讨1例特殊面容合并多发畸形患儿的遗传学病因并分析其与临床表型的相关性。方法选取2020年11月4日因"孕妇胎膜早破、双胎妊娠(双绒毛膜双羊膜囊)、妊娠期糖尿病"于孕34+6周自然分娩出生的1例患儿作为研究对象,应用常规G显带方法分析患儿的染色体核型,再用高通量测序法分析患儿拷贝数变异(CNVs)的情况。结果患儿为男性,顺产出生,表现为特殊面容、尿道下裂、隐睾、四肢肌张力低等。患儿染色体核型为46,XY,del(3)(p26),高通量测序结果提示染色体3p26.3-p25.3(60000-9860000)存在约9.80 Mb的缺失,共涉及33个蛋白编码基因。结论3p26.3p25.3缺失可能是患儿的致病原因,需对其进行持续随访,提高生存质量。

一例1q41q44重复及3p26.2p26.1缺失患儿的表型与遗传学分析

目的:探讨1例发育落后患儿染色体拷贝数变异的性质及来源,分析基因型与疾病表型的相关性。方法:应用常规G显带分析患儿及其父母的外周血染色体核型,并对患儿进行二代测序(next generation sequencing, NGS)检测。结果:染色体G显带核型分析显示患儿存在染色体结构异常,核型描述为46,XX,−3, der (3),t (1;3) (q41;p26.1),其父亲染色体核型为46,XY,t (1;3) (q32;p25),其母亲核型未见异常。NGS检测显示患儿染色体1q41q44区存在约29.093 Mb的重复,3p26.2p26.1区存在约1.717 Mb的缺失。结论:患儿染色体异常是来自其父亲的平衡易位。1q41q44重复及3p26.2p26.1缺失是导致患儿表型异常的遗传学病因。

3p25.3p25.2染色体杂合缺失伴矮小及多发畸形1例遗传学特征与临床表型分析

目的 分析3号染色体p25.3p25.2(3p25.3p25.2)片段缺失的临床表型及分子遗传学特点.方法 回顾分析1例3p25.3p25.2染色体片段缺失患儿的临床资料,分析其临床表型及分子遗传学特征.结果 患儿,男,1岁4个月.宫内发育迟缓,重度矮小、全面生长发育落后、语言发育迟缓、特殊面容伴多发畸形(小头畸形、小下颌、长人中、低耳位、双侧耳前瘘管等)、先天性十二指肠闭锁、肠旋转不良,先天性心脏病、隐睾、龟头裸露、肌张力低下、婴儿期喂养困难、睡眠障碍、甲状腺功能减低.患儿染色体核型分析46,XY.基因芯片分析示3p25.3p25.2区域存在一段3327 kb的杂合缺失,共39个基因缺失.结论 3p25.3p25.2区域3327 kb杂合缺失,致SETD5、VHL、FANCD2基因缺失导致该患儿临床表型.

口腔癌前病变、口腔鳞癌3p、9p染色体微卫星位点杂合性缺失研究

目的 探讨 3p、9p微卫星分析在口腔粘膜癌前病变中的改变及应用价值。 方法 应用PCR为基础的微卫星分析技术 ,选取人正常口腔粘膜 (8例 )、口腔白斑 (31例 )及口腔鳞状细胞癌 (2 2例 )标本 ,分析分别位于3p(D3S6 5 9)、9p(D9S16 1、D9S15 7、D9S171)上四位点微卫星的改变。 结果 在正常口腔粘膜 (NOM )及单纯上皮增生组均未见等位基因的改变。在口腔鳞癌 (OSCC)组中 12 / 2 2 (5 4.5 % )存在至少一个位点的杂合性缺失 (LOH) ,异常增生组中 6 / 2 3(2 5 .1% )存在至少一个位点的LOH。还观察到这几个位点均存在一定频率的微卫星不稳定性(MI)。OSCC组 9/ 2 2观察到MI,达 40 .9% ,异常增生组中达 2 1.9%。结论 3p、9p上可能存在与口腔鳞癌相关的抑癌基因。 3p、9p上这四位点的改变可能系口腔鳞癌发生的早期分子事件。本研究提示该四位点微卫星不稳定性在一部分口腔癌发生中起一定作用。

小细胞肺癌血浆中游离性DNA的3p位点杂合性缺失

目的 研究小细胞肺癌 (Smallcelllungcancer ,SCLC)患者血浆游离性DNA的 3p位点的杂合性缺失 (Lossofheteroxygosity ,LOH)在SCLC诊断中的价值。方法 用PCR 银染法对 3 3例SCLC患者的病理组织及血浆标本中三个位点微卫星 ( 3p14、3p2 1、3p2 5 )杂合性缺失的情况。结果 3 3例病理组织标本LOH的发生率为 5 4.5 % ( 18 3 3 ) ,血浆游离DNA同时发生LOH的百分率为 42 .4% ( 14 3 3 ) ;二者相关性为 77.8% ( 14 18)。结论 SCLC患者血浆游离DNA来自于肿瘤组织 ,其 3p部位的LOH在诊断中有一定的价值。

肝外胆管癌染色体3p21.3区段微卫星不稳定和杂合性缺失分析

目的:研究肝外胆管癌染色体3p21.3区段的微卫星不稳定性(MSI)及杂合性缺失(LOH),探讨染色体3p21.3区段遗传不稳定性与肝外胆管癌的发生发展的关系,定位该区段上肝外胆管癌相关肿瘤基因。方法:用PCR-SSCP方法检测24例肝外胆管癌染色体3p21.3区段上D3S1568,D3S1621,D3S1578和D3S1289四个微卫星位点的MSI和LOH发生率,分析其与临床病理因素之间的关系。结果:24例肝外胆管癌组织中,四个微卫星位点的MSI和LOH平均发生率分别为7.23%和15.63%。其中D3S1621位点的LOH最高(45.83%,11/24),并与TNM分期、是否伴有局部/淋巴结转移相关(p<0.05)。结论:染色体3p21.3区段D3S1621位点高频率杂合性缺失,提示3p21.3区段可能定位有肝外胆管癌的候选抑癌基因,并在肝外胆管癌的发生发展过程中发挥重要作用。

miR-27a-3p在氧糖缺失-复氧复糖损伤PC12细胞中的表达及其对PC12细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨miR-27a-3p在氧糖缺失-复氧复糖(OGD/R)损伤PC12细胞中的表达及其对OGD/R损伤PC12细胞增殖、凋亡的影响。方法将PC12细胞随机分为正常培养(Normal组)、氧糖缺失2 h后分别复氧复糖3 h、6 h和9 h组,qRT-PCR法检测各时点miR-27a-3p表达。之后将PC12细胞随机分为正常对照(Ctrl组)、氧糖缺失2 h复氧复糖(OGD/R组),慢病毒分别转染miR-27a-3p模拟物、模拟物阴性对照、抑制剂和抑制剂阴性对照入细胞后行OGD/R,分别设为Mimics组、Mimics-Ctrl组、Inhibitor组和Inhibitor-Ctrl组,CCK-8法检测各组细胞复氧复糖后24、48、72和96 h细胞的增殖活性;根据前述结果,选择miR-27a-3p表达差异最大的时间点进行复氧复糖,RT-qPCR法检测各组miR-27a-3p、凋亡相关因子Caspase-3、Bax和Bcl-2 mRNA表达,Western blotting法检测各组Cleaved-Caspase-3、Bax和Bcl-2蛋白表达。结果与Normal组相比,3 h、6 h、9 h组miR-27a-3p表达在OGD/R后均降低(P均<0.05),6 h组呈最低(P<0.05)。与Ctrl组比较,复氧复糖后48、72和96 h,OGD/R组细胞增殖活性均降低(P均<0.05);与Mimics-Ctrl组比较,24、48、72和96 h时Mimics组细胞的增殖活性均升高(P均<0.05);与Inhibitor-Ctrl组比较,72 h和96 h时Inhibitor组细胞增殖活性均降低(P均<0.05)。复氧复糖后6 h,与Ctrl组比较,OGD/R组miR-27a-3p表达降低(P<0.05),Caspase-3、Baxm RNA和蛋白相对表达量均升高(P均<0.05),Bcl-2表达量降低(P<0.05);过表达miR-27a-3p后,miR-27a-3p表达升高(P<0.05),Caspase-3、BaxmRNA和蛋白相对表达量均降低(P均<0.05),Bcl-2表达量升高(P<0.05),抑制miR-27a-3p表达后结果与之相反。结论miR-27a-3p在OGD/R损伤PC12细胞中呈低表达,miR-27a-3p能促进OGD/R损伤PC12细胞的增殖并抑制其凋亡。

口腔鳞癌染色体3p14-24区域不同位点杂合缺失的分析

目的 探讨 3号染色体短臂 14 2 4区域等位基因杂合缺失与口腔鳞癌临床相关因素之间的关系 ,以及抑癌基因在口腔鳞癌发生发展中的作用。方法 采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性分析方法 ,检测 40例口腔鳞癌及正常组织中 3p14 2 4等位基因的杂合性缺失。结果 40例口腔鳞癌组织中 3p2 4位点EAβMD有 2 4例为信息个体 ,12例出现杂合缺失 ,杂合缺失率为 5 0 %,EAβH有 15例出现杂合缺失 ,杂合缺失率为 6 2 5 %;3p2 1位点杂合缺失率为 0 0 7%;3p14位点杂合性缺失率为 0 13%。 3p2 4杂合缺失与口腔鳞癌临床分期关系明显 ,Ⅲ -Ⅳ期晚期鳞癌的杂合缺失率高于Ⅰ -Ⅱ期早期鳞癌 ,两组间有差异 (P <0 0 5 ) ;口腔鳞癌高分化组的杂合缺失率明显低于中低分化组 ,其差异有显著性意义 (P <0 0 1) ;淋巴结转移阴性与阳性组的杂合缺失率有显著性意义 (P <0 0 1)。结论 3p2 4杂合缺失在口腔鳞癌中普遍存在 ,从而说明 3p2 4位点处存在着某些与口腔鳞癌发生发展有关的抑癌基因 。

肝细胞肝癌细胞p53基因第2～3,4,11外显子纯合性缺失、杂合性缺失的分析

目的 研究非高发区肝细胞癌 (HCC) p5 3基因外显子 2～ 3、4和 11的纯合性、杂合性缺失 (L OH)。方法 应用 PCR为基础的微卫星多态性分析技术。结果 2 0例 HCC标本中 p5 3基因外显子 2～ 3(TP5 3.A )、外显子 4 (TP5 3.B)、外显子 11(TP5 3.G)纯合性缺失率分别为 0 %、30 %、10 % ;p5 3基因外显子 2～ 3(TP5 3.A)、外显子 4 (TP5 3.B)、外显子 11(TP5 3.G)杂合性缺失率分别为 2 0 %、30 %、0 %。 p5 3基因的缺失率与 HCC病理分级高低之间的差异无统计学意义。结论 以上结果提示 :p5 3基因第 4外显子的纯合性缺失及杂合性缺失在本组肝细胞癌的发生中可能起重要作用 ,而第 11、2～

食管癌患者3p25等位基因杂合缺失的初步研究

目的 :检测 35例食管癌患者 3p2 5 D3S10 38染色体位点的杂合缺失 ,为寻找此位点附近潜在的抑癌基因奠定基础。 方法 :微卫星 DNA- PCR-银染法检测 3p2 5 D3S10 38位点杂合缺失。结果:3p2 5 D3S10 38位点有 11例存在杂合缺失 (L OH) ,L OH率为 31.4 % ,此位点杂合缺失在各民族中均存在。结论:3p2 5 D3S10 38存在杂合缺失且有一定发生频率 ,可能与食管癌的发生有关 ,值得继续研究。

宫颈染色体3p14杂合性缺失和微卫星不稳定性研究

目的探讨宫颈癌染色体3p14区域D3S1300、D3S1600位点微卫星不稳定性(microsatellite instability,MSl)及等位基因杂合性缺失(loss of heterozygosity,LOH)频率,为准确定位宫颈癌相关肿瘤抑制基因位点提供实验依据,并探讨LOH及MSI与宫颈癌临床分期、病理分级的相关性。方法选择3p14区域两个微卫星多态性位点,显微分离提取41例宫颈癌石蜡切片中的正常组织和肿瘤组织,经PCR扩增及聚丙烯酰胺凝胶电泳和硝酸银染色,进行LOH及MSI研究。结果41例样本中有25例至少存在一个位点的LOH,D3S1300位点LOH的频率为35%,D3S1600位点LOH的频率为28%。MSI发生频率相对较低,D3S1300的MSI频率为7.5%,D3S1600的MSI频率为12.8%。D3S1300、D3S1600位点LOH的发生率与临床分期、病理分级相关性有显著意义(P<0.05),而MSI与之无显著的差别(P>0.05)。结论3p14区域内D3S1300、D3S1600位点具有较高的LOH,提示这两个微卫星位点附近可能存在尚未克隆的与宫颈癌发生、发展相关的肿瘤抑制基因。宫颈癌染色体3p14区域LOH与临床分期、病理分级成正相关,提示检测该区域的LOH可作为病程进展及预后的重要参考指标。MSI在本研究中与宫颈癌临床分期、病理分级无明显相关。

脑胶质瘤患者染色体3p24等位基因杂合缺失的研究

目的 :从分子水平上探索胶质瘤的发生机理 ,为胶质瘤的诊断、预后提供有意义的指标 ,并且为基因治疗胶质瘤提供理论依据。方法 :应用 PCR技术配合限制性片段长度多态性 (RFL P)分析 ,对胶质瘤 3号染色体短臂3p2 4两个 DNA标志不同位点的杂合缺失 (L OH)进行检测。结果 :2 7例胶质瘤标本中在 EAβH位点发现 6个信息个体中有 3例显示杂合缺失 ,杂合缺失率为 3/ 6 ,而 EAβ MD位点未发现杂合缺失。 结论 :胶质瘤中未发现 3p2 4EAβ MD等位基因的杂合缺失 ,说明该基因可能不参与胶质瘤的发生发展过程 ;3p2 4EAβ H等位基因的杂合缺失存在于 级和 级胶质瘤中 。

母源性1p36缺失综合征和3p26.3p25.2重复1例胎儿的产前诊断

目的探讨1例1p36缺失综合征和3p26.3p25.2重复胎儿的特征。方法选取2022年2月22日于临沂市人民医院确诊的1例胎儿作为研究对象,收集其临床资料,并对其进行染色体核型分析、荧光原位杂交(FISH)检测和染色体微阵列分析(CMA)。结果孕24周超声提示胎儿存在室间隔缺损、单脐动脉、左侧脑室轻度增宽(12 mm)。孕妇染色体核型为46,XX,t(1;3)(p36.22;p25.2),FISH检测结果为46,XX.ish t(1;3)(3pter+,1qter+;1pter+,3qter+);胎儿羊水细胞G显带核型为46,X?,add(1)(p36);CMA显示胎儿染色体1p36.33p36.22区存在9.0 Mb缺失,3p26.3p25.2区存在12.6 Mb重复,结合孕妇的染色体核型,最终确定胎儿的分子细胞核型为46,X?,der(1)t(1;3)(p36.22;p25.2)mat.arr[hg19]1p36.33p36.22(849467_9882666)×1,3p26.3p25.2(61892_12699607)×3。其中1p36.33p36.22缺失片段与1p36缺失综合征相关。结论胎儿的1p36.33p36.22缺失和3p26.3p25.2重复来源于孕妇1号和3号染色体平衡易位所产生的不平衡配子,可能导致室间隔缺损、单脐动脉、侧脑室增宽等表型。

微小RNA-301b-3p靶向第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物对骨肉瘤细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨微小RNA-301b-3p(miR-301b-3p)对骨肉瘤细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法本研究起止时间为2019年3—9月。人成骨细胞(hFOB)和骨肉瘤细胞U2OS、MG63购自美国菌种保藏中心。U2OS细胞分为miRNA抑制物阴性对照(anti-miR-NC)组、miR-301b-3p抑制物(anti-miR-301b-3p)组、anti-miR-301b-3p+小干扰RNA阴性对照(si-NC)组、anti-miR-301b-3p+第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)小干扰RNA(si-PTEN)组;实时荧光定量PCR(RT-qP-CR)检测miR-301b-3p表达水平;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验检测miR-301b-3p和PTEN的靶向关系。结果与h FOB细胞相比,U2OS、MG63中miR-301b-3p表达水平[(0.89±0.09),(0.70±0.07)比(0.20±0.02)]显著升高。与anti-miR-NC组比较,anti-miR-301b-3p组U2OS细胞活性[(0.59±0.06)比(1.33±0.13)]显著降低,而凋亡率[(22.06±2.31)%比(7.48±0.78)%]、PTEN蛋白表达[(0.69±0.07)比(0.35±0.03)]显著升高。PTEN是miR-301b-3p的直接靶基因。与anti-miR-301b-3p+si-NC组比较,anti-miR-301b-3p+si-PTEN组U2OS细胞活性[(1.16±0.12)比(0.56±0.06)]显著升高,而凋亡率[(10.28±1.16)比(22.12±2.34)]显著降低。结论抑制miR-301b-3p表达可通过调控PTEN抑制骨肉瘤细胞增殖,促进细胞凋亡。

PTEN缺失的前列腺癌细胞中P13K的激活机理

研究目的：根据底物及产物的不同，PI3K可分为3类。I类PI3K的产物是3，4，5-三磷酸肌醇（PIP3），该产物可与蛋白中的PH domain结合，从而将蛋白招募到细胞膜附近。I类PI3K可进一步被分为IA和IB两个亚类，IA类PI3K由调节亚单位p85和催化亚单位p110（包括p110α，β和δ）组成，其中p85亚单位的SH2domain可与Tyr磷酸化的受体或adaptor蛋白结合，该类P13K由受体Tyr蛋白激酶（RTK）所激活。IB类P13K则由调节亚单位p101和催化亚单位p110γ组成，由G蛋白偶联受体（GPCR）所激活。近期有研究表明p110β也可通过GPCR激活Pi3K信号通路。正常细胞中，Pi3K信号通路被PIP3的磷酸酶PTEN所拮抗。许多研究表明，由PTEN缺失所导致的P13K信号通路的激活在成胶质神经细胞瘤和前列腺癌（prostatecancer；VCa）中起着主要作用，并在其他一些肿瘤中起着一定作用。对于PTEN突变的鉴定以及PTEN蛋白的研究表明，在大部分转移性PCa及许多侵袭性的原发性PCa中，PTEN的活性发生丢失。

肺癌3p缺失区基因传感器的研究

目的研究3p缺失区基因传感器,早发现人类个体的基因缺失,以便预测、预防肺癌的发生,即使有早期肺癌,本人积极参与治疗,也是可以治愈的。方法采用电化学中的循环伏安法与金电极的自组装法对缺失的靶基因进行检测。结果自组装的金电极用循环伏安法可检测出缺失的靶基因。结论对3p多个缺失基因的检测,可早预防、预测、治疗肺癌,具有较好的临床意义。

HL-60细胞Nucleostemin表达下调对PI3K/AKT/mTOR通路相关分子的影响

本研究旨在探讨白血病细胞中nucleostemin(NS)基因下调对其非依赖p53通路的候选途径PI3K/AKT/mTOR的相关分子表达的影响。通过重组慢病毒表达载体NS-RNAi-GV248转染至p53缺失型HL-60细胞以干扰NS基因的表达。用Real-time PCR技术评价转染后HL-60细胞NS基因的表达情况并检测干扰前后PI3K/AKT/mTOR信号通路中相关分子水平表达的变化。结果表明:重组慢病毒载体NS-RNAi-GV248成功感染了HL-60细胞,在荧光显微镜下可见GFP荧光水平较高,大于80%。Real-time PCR结果显示,NS基因mRNA的抑制率在HL-60细胞中为56.5%;干扰NS的表达后PI3K、AKT和GβL基因mRNA表达量分别为0.491±0.084、0.398±0.164、0.472±0.097,下调明显,与空白对照组(分别为1.002±0.171、1.000±0.411、1.001±0.206)比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:在HL-60细胞中PI3K/AKT/mTOR通路相关分子的变化与NS基因的下调呈正相关,两者的关联性为证明PI3K/AKT/mTOR信号通路可能是NS的一种非依赖p53作用途径提供了依据。

微小RNA-92a-3p靶向PTEN调控胰腺癌细胞增殖和转移

目的:探讨微小RNA-92a-3p(microRNA-92a-3p,miR-92a-3p)靶向第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(phosphatase and tension homolog deleted on chromosome ten,PTEN)调控胰腺癌细胞增殖和转移的作用机制。方法:采用Real-time PCR检测人正常胰腺导管上皮细胞株(HPDE6-C7)与胰腺癌细胞株(Panc-1,BxPC-3,AsPC-1,MIA Paca-2,Capan-2)中的miR-92a-3p表达;同时,采用蛋白质印迹法检测上述细胞中PTEN的表达。选取胰腺癌细胞株BxPC-3和Panc-1的细胞进行实验,分为转染对照模拟物组(NC mimics组)、miR-92a-3p模拟物组(miR-92a-3p mimics组)、对照拮抗剂组(NC inhibitor组)、miR-92a-3p拮抗剂(miR-92a-3p inhibitor组),采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖,Transwell小室检测细胞转移能力,蛋白质印迹法检测PTEN蛋白表达水平。将野生型PTEN的3’-非编码区(untranslated regions,UTR)(wt-PTEN 3’UTR)或突变体PTEN的3’-UTR(mutPTEN 3’UTR)分别与NC mimics,miR-92a-3p mimics,NC inhibitor,miR-92a-3p inhibitor共转染293T细胞,采用双萤光素酶报告实验检测miR-92a-3p与PTEN的靶向结合关系。在BxPC-3细胞的回复实验中,实验又分NC inhibitor+siNC组、miR-92a-3p inhibitor+si-NC组、NC inhibitor+si-PTEN组和miR-92a-3p inhibitor+si-PTEN组;在Panc-1细胞的回复实验中,实验又分为NC mimics+NC组、miR-92a-3p mimics+NC组、NC mimics+PTEN组和miR-92a-3p mimics+PTEN组,再分别采用CCK-8检测细胞增殖,Transwell小室检测细胞转移能力,蛋白质印迹法检测PTEN蛋白的表达。结果:与HPDE6-C7细胞相比,miR-92a-3p在胰腺癌细胞株中均呈高表达(均P<0.01),PTEN在胰腺癌细胞株中均呈低表达(均P<0.05)。与NC mimics组相比,miR-92a-3p mimics组BxPC-3和Panc-1细胞活力均升高(均P<0.01);与NC inhibitor组相比,miR-92a-3p inhibitor组BxPC-3和Panc-1细胞活力均降低(均P<0.01)。与NC mimics组相比,miR-92a-3p mimics组穿过微孔的BxPC-3和Panc-1细胞数均增多(均P<0.01);与NC inhibitor组相比,miR-92a-3p inhibitor组穿过微孔的BxPC-3和Panc-1细胞数均减少(均P<0.01)。与NC mimics组相比,miR-92a-3p mimics组的wtPTEN 3’UTR荧光素酶活性被抑制(P<0.01);与NC inhibitor组相比,miR-92a-3p inhibitor组的wt-PTEN 3’UTR荧光素酶活性被增强(P<0.01)。与miR-92a-3p inhibitor+si-NC组相比,miR-92a-3p inhibitor+si-PTEN组恢复了miR-92a-3p inhibitor对BxPC-3细胞增殖和转移的影响;与miR-92a-3p mimics+NC组相比,miR-92a-3p mimics+PTEN组恢复了miR-92a-3p mimics对Panc-1细胞增殖和转移的影响。结论:MiR-92a-3p可靶向抑制PTEN的表达,促进胰腺癌细胞的增殖和转移。

miR-489-3p靶向PTEN/PI3K/Akt信号通路对膀胱癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的探讨微小RNA(miR)-489-3p靶向第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)/磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路对膀胱癌(BC)细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法2021年1-7月于河北北方学院附属第一医院进行细胞实验,利用火山图从癌症基因组图谱(TCGA-BLCA)数据库筛选BC差异表达miRNA。以110例BC患者的癌组织及其癌旁组织和购买的人膀胱上皮永生化细胞SV-HUC-1及人BC细胞系5637、J82、T24为研究对象,采用实时荧光定量PCR测定miR-489-3p和PTEN mRNA的表达。根据miR-489-3p的相对表达量均值将BC患者分为低表达组(≤0.36)70例和高表达组(>0.36)40例,并分析miR-489-3p表达在BC患者不同临床病理特征中的变化。双荧光素酶实验验证miR-489-3p和PTEN的靶向关系。选择miR-489-3p表达最低的T24细胞进行转染实验,T24细胞随机分组为对照组、miR-NC(阴性对照)组、miR-489-3p mimics(模拟物)组、miR-489-3p mimics+pcDNA组、miR-489-3p mimics+pc-PTEN组。MTT和克隆形成实验、Transwell实验、流式细胞术分别检测细胞增殖、侵袭和凋亡;Western-blot检测PTEN、PI3K、Akt蛋白表达。结果通过火山图筛选出BC组织中显著下调的miR-489-3p。BC癌组织中miR-489-3p表达低于癌旁组织,PTEN mRNA表达高于癌旁组织(t=186.168,510.107,P均<0.001);BC细胞系miR-489-3p表达低于SV-HUC-1细胞,PTEN mRNA表达高于SV-HUC-1细胞(F=883.826,807.220,P均<0.001)。miR-489-3p低表达组患者TNM分期T_(3~4)、有淋巴结转移、肿瘤低分化比例高于高表达组(P<0.05)。双荧光素酶实验显示,miR-489-3p靶向负调控PTEN表达。miR-489-3p mimics组凋亡率及PI3K、Akt蛋白表达水平高于miR-NC组,PTEN蛋白表达水平、OD值(24 h、48 h、72 h)、克隆数目和细胞侵袭数低于miR-NC组(P均<0.01);miR-489-3p mimics+pc-PTEN组凋亡率及PI3K、Akt蛋白表达水平低于miR-489-3p mimics组,PTEN蛋白表达水平、OD值(24 h、48 h、72 h)、克隆数目和细胞侵袭数高于miR-489-3p mimics组(P<0.01)。结论miR-489-3p可能通过靶向下调PTEN表达,激活PI3K/Akt信号通路,进而抑制BC细胞增殖、侵袭,促进凋亡。

敲降miR-222-3p靶向PTEN对甲状腺癌^(131)Ⅰ放疗抵抗的影响及其机制

目的:探讨miR-222-3p通过人第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白合同源基因(PTEN)对甲状腺癌细胞增殖和凋亡的影响,阐明miR-222-3p在甲状腺癌131Ⅰ放疗抵抗中的作用及机制。方法:采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测人甲状腺癌细胞和人正常甲状腺滤泡上皮Nth-ori 3-1细胞中miR-222-3p表达水平。以人甲状腺癌K1细胞和放射抗性K1(K1R)细胞为研究对象,实验分为空白对照组、131Ⅰ处理组、131Ⅰ+miR-222-3p敲降组、131Ⅰ+PTEN过表达组和131Ⅰ+PTEN过表达+miR-222-3p过表达组。空白对照组K1和K1R细胞不经任何处理,131Ⅰ处理组K1和K1R细胞经1和3 Gy131Ⅰ处理,131Ⅰ+miR-222-3p敲降组K1和K1R细胞转染miR-222-3p inhibitor后再经1和3 Gy131Ⅰ处理,131Ⅰ+PTEN过表达组K1和K1R细胞转染PTEN过表达载体后再经1和3 Gy131Ⅰ处理,131Ⅰ+PTEN过表达+miR-222-3p过表达组K1和K1R细胞同时转染PTEN过表达载体和miR-222-3p mimic后再经1和3 Gy131Ⅰ处理。克隆形成实验检测K1和K1R细胞克隆形成数,CCK-8实验检测K1和K1R细胞增殖活性,AnnexinⅤ-FITC/PI双染法流式细胞术检测K1和K1R细胞凋亡率,Western blotting检测K1和K1R细胞中PTEN蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-222-3p与PTEN的靶向关系。结果:与Nth-ori 3-1细胞比较,甲状腺癌细胞中miR-222-3p表达水平升高(P<0.01);且甲状腺癌K1R细胞中miR-222-3p表达水平高于甲状腺癌K1细胞(P<0.01)。与131Ⅰ处理组比较,131Ⅰ+miR-222-3p敲降组K1和K1R细胞克隆形成数减少(P<0.01),细胞增殖活性降低(P<0.01),细胞凋亡率升高(P<0.01)。与miR-NC-PTEN-WT组比较,miR-222-3p-PTEN-WT组HEK-293细胞中荧光素酶活性降低(P<0.01)。与敲降前比较,敲降miR-222-3p后K1和K1R细胞中PTEN蛋白表达水平升高(P<0.01)。与131Ⅰ+PTEN过表达组比较,131Ⅰ+PTEN+miR-222-3p过表达组K1和K1R细胞克隆形成数增加(P<0.01),细胞增殖活性升高(P<0.01),细胞凋亡率降低(P<0.01)。结论:敲降miR-222-3p靶向PTEN并上调其表达水平可以缓解甲状腺癌131Ⅰ的放疗抵抗。