3,5,4'-三甲基白藜芦醇对豚鼠心室肌细胞钠电流和钾电流的影响

目的研究3,5,4'-三甲基白藜芦醇(trans-resveratrol derivative3,5,4'-trimethoxystilbene,TMS)对豚鼠心室肌细胞钠电流(INa)和钾电流(IK1)的直接作用,探讨其心肌保护作用。方法用全细胞膜片钳技术记录TMS对单个心室肌细胞INa和IK1的作用。结果TMS(10μmol·L-1)可快速抑制豚鼠心室肌细胞INa,用药后3min左右即开始起效,10min时抑制率为(36.8±5.6)%(P<0.005),洗脱后可完全恢复;1,3μmol·L-1TMS未影响INa大小。TMS不改变INa的最大激活电压,也不影响IK1的大小。10μmol·L-1使半数最大失活电压(V1/2)由(-87.0±3.3)mV变化到(-96.7±3.5)mV(P<0.001),使失活曲线斜率(S)由(4.9±0.3)mV变化到(5.4±0.3)mV(P<0.01);使半数最大激活电压(V1/2)(-38.9±1.4)mV变化到(-47.3±1.3)mV(P<0.001),未改变激活S。结论TMS可直接作用于豚鼠心室肌细胞,快速抑制INa,且此作用快速、可逆。

HPLC-MS法测定大鼠血浆中白藜芦醇衍生物(E)-3，5，4′-三甲氧基二苯乙烯的浓度

目的:建立测定大鼠血浆中白藜芦醇衍生物(E)-3,5,4′-三甲氧基-1,2-二苯乙烯的液相色谱-质谱法(HPLC-MS)定量分析方法。方法:血浆样品0.1 mL,经乙腈沉淀蛋白后,以 ODS Hypersil C_(18)(5 μm,250 mm×4.6 mm)为固定相,甲醇-10 mmol·L^(-1)醋酸铵(0.2%甲酸)(80:20,v/v)为流动相,流速为0.85 mL·min^(-1);采用 HPLC-MS,选择离子监测(SIM)法检测(E)-3,5,4′-三甲氧基-1,2-二苯乙烯([M+H]^+,m/z 271.3),卡马西甲([内标,M+H]^+,m/z 237.5),保留时间分别为8.9,4.0 min。结果:(E)-3,5,4′-三甲氧基-1,2-二苯乙烯的线性范围为0.01～5.0 μg·mL^(-1),r>0.999;日内、日间精密度 RSD 小于12.9%;相对回收率在94.8%～104.7%之间,最低检出限为0.005 μg·mL^(-1)结论:经方法学确证和稳定性评价,该方法成功用于大鼠血浆中(E)-3,5,4′-三甲氧基-1,2-二苯乙烯的定量测定。

4-羟基白藜芦醇甲基化物的合成研究

目的合成抗氧化活性化合物4-羟基白藜芦醇甲基化物。方法以四氢呋喃为溶剂,3,4,5-三甲氧基苯甲酸为起始原料,经过还原反应、卤代,制备格利雅试剂,与大茴香醛缩合制备目标化合物。结果合成得到的4-羟基白藜芦醇的四甲基衍生物经MS、1H-NMR确证。结论该路线能顺利实现4-羟基白藜芦醇甲基化物的合成。

白藜芦醇和三甲基白藜芦醇对豚鼠心室肌细胞钠电流的作用

目的研究反式白藜芦醇(RES)和反式3,5,4’-三甲基白藜芦醇(3,5,4’-Trimethoxystilbene,TMS)对豚鼠心室肌细胞钠电流(INa)的直接作用,探讨其心肌保护机制并比较其作用强弱。方法用全细胞膜片钳技术记录RES和TMS对豚鼠单个心室肌细胞INa的作用。结果 RES(10,30,100μmol/L)浓度依赖性的抑制豚鼠心室肌细胞INa,其中30μmol对INa的抑制率为(17.3±3.1)%(P<0.005),而100μmol对其抑制率为(52.7±10.2)%(P<0.01);TMS(10μmol)对其抑制率(36.8±5.6)%(P<0.005),作用迅速,用药后3 min左右即开始起效,洗脱后均可以完全恢复,1、3μmol/L TMS未影响INa大小。结论 RES和TMS均可浓度依赖性的抑制豚鼠心室肌细胞INa,作用快、可逆,且TMS作用强于RES。

大鼠血浆中白藜芦醇衍生物(BTM-0512)药代动力学研究

目的:建立 RP-HPLC 法测定大鼠血浆中白藜芦醇衍生物3,5,4'-O-三甲基白藜芦醇(BTM-0512)浓度的方法并进行药代动力学研究,为该化合物的进一步开发提供实验依据。方法:取血浆样品,以乙腈沉淀蛋白,用 Hypersil C_(18)柱(5 μm,250 mm×4.6 mm)分离,己烯雌酚为内标,乙腈-水(65:35)为流动相,流速1.0 mL·min^(-1),检测波长319 nm。结果:BTM-0512的线性范围为0.01～10.0μg·mL^(-1),r>0.999;日内、日间精密度 RSD 小于10.0%;相对回收率在98.2%～101.3%之间,最低检出限为0.005μg·mL^(-1),最低定量限为0.01μg·mL^(-1)。结论:本方法灵敏度高,操作简便、准确,经方法学确证和稳定性评价,可用于大鼠血浆中 BTM-0512的测定及药代动力学研究。

白藜芦醇通过SIRT1/AMPK信号通路减轻MPTP诱导的小鼠多巴胺能神经元丢失

目的观察白藜芦醇(RV)对帕金森病(PD)小鼠的神经保护作用,并探索其发挥神经保护作用的可能机制。方法将48只小鼠随机分为CON组、MPTP组、RV+MPTP组和EX527+RV+MPTP组,每组12只。腹腔注射MPTP建立PD小鼠模型,并给予RV灌胃、SIRT1特异性抑制剂EX257腹腔注射处理,利用免疫荧光、western blot等检测相关蛋白表达。结果给予RV后,与MPTP组相比,RV+MPTP组SIRT1蛋白表达显著增加(P<0.001),p-AMPK蛋白水平显著升高(P<0.01),Cleaved caspase 3蛋白水平显著下降(P<0.01),小鼠黑质区TH阳性神经元丢失率明显降低,纹状体组织中TH蛋白表达显著增加(P<0.01)。给予EX527后,阻断了RV的上述作用,p-AMPK蛋白水平显著降低(P<0.01),Cleaved caspase 3显著升高(P<0.01),小鼠黑质区TH阳性神经元丢失率明显升高,纹状体组织中TH蛋白表达显著下降(P<0.001)。结论 RV可能通过激活SIRT1/AMPK信号通路,SIRT1与AMPK相互调控,减少MPTP小鼠黑质区多巴胺能神经元丢失。

白藜芦醇对氧化应激诱导的大鼠海马神经元损伤的影响

目的:研究不同剂量的白藜芦醇对大鼠海马神经元氧化损伤的影响。方法:通过体外原代培养获得大鼠海马神经元。实验分为对照(control,Con)组、三甲基氯化锡(trimethyltin chloride,TMT)组、溶剂对照(vehicle)组和白藜芦醇(resveratrol,Res)组。其中,Res设4个浓度:5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L和40μmol/L;除对照组外,其它各组细胞均采用三甲基氯化锡(TMT)处理使细胞出现氧化应激状态。采用CCK-8法和荧光探针DCFH-DA法观察各组神经元的活力与细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量的变化;TUNEL荧光染色法检测各组神经元的凋亡程度。结果:与TMT组相比,不同浓度的白藜芦醇均能提高神经元的活力,其中20μmol/L的作用最显著。20μmol/L白藜芦醇能抑制经TMT处理后神经元内的ROS水平以及凋亡程度的增加。结论:白藜芦醇具有抑制TMT诱导的大鼠海马神经元氧化损伤的作用。

化合物E-2-(3',5'-二甲氧基苯亚甲基)-环己酮的体外抗肿瘤作用

目的:研究化合物E-2-(3',5'-二甲氧基苯亚甲基)-环己酮(IV8)对人类宫颈癌(HeLa)、肝癌(Hep G2)、前列腺癌(Du145)和胃癌(SGC7901)细胞系的抗肿瘤活性。方法:采用MTT法评价IV8对上述4株肿瘤细胞株增殖的影响,并在光学显微镜下观察IV8对HepG2细胞形态学上的变化,以及采用AO/EB双荧光染色法评价IV8对HepG2细胞的凋亡作用。结果:IV8抑制HeLa,Hep G2,Du145和SGC7901细胞的IC50值分别为2.10,11.32,36.50和89.53μmol/L;光学显微镜下观察IV8处理的细胞出现明显增殖抑制和形态学改变;AO/EB双荧光染色IV8组可见凋亡细胞。结论:药理实验结果表明IV8具有较好的体外抗肿瘤的活性,值得进一步研究。

4-羟基白藜芦醇甲基化合物的羟丙基-β-环糊精包合物的制备及表征

目的:制备4-羟基白藜芦醇甲基化合物(MR-4)的羟丙基-β-环糊精的包合物。方法:采用溶液-搅拌法制备包合物,并采用紫外光谱扫描及红外光谱测定包合物的包封率和溶解度。结果:通过溶-搅拌液法能够顺利制备4-羟基白藜芦醇甲基化合物的羟丙基-β-环糊精包合物,并且4-羟基白藜芦醇甲基化合物的溶解度得到改善。结论:采用溶液-搅拌法制备4-羟基白藜芦醇甲基化合物-羟丙基-β-环糊精包合物的制备工艺较为简便,且包合效果较好,明显提高了MR-4的药物溶解度。

三羟基二苯乙烯及其对肺动脉平滑肌细胞生长抑制和致凋亡作用的研究

目的:以虎杖为原料提取的白藜芦醇(Res),再经甲基化反应合成的3,5,4'-三羟基二苯乙烯(3,5,4'-trimethoxystilbene,TMS),对TMS进行结构鉴定和药代动力学测定。检测TMS对肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)的生长抑制和致凋亡作用。方法:用紫外吸收光谱、红外吸收光谱、1H-NMR谱、13C-NMR图谱、质谱检测等方法对TMS进行结构鉴定。测定大鼠口服TMS后的生物利用度,肠道吸收特点,体内组织分布和体内排泄。测定TMS对小鼠的急性毒性。利用大鼠肺动脉制备PASMCs。将细胞分为8组。A组(空白对照组):不加TNF-α,TMS,Res;B组(TNF-α组):100 pg/mL TNF-α;C^E组(低~高浓度TMS组):TNF-α(100 pg/mL)+TMS(5,10,20μmol/L);F^H组(低~高浓度Res组):TNF-α(100 pg/mL)+Res(50,100,200μmol/L)。MTT法测定TMS对PASMCs增殖的影响。流式Annexin V/PI法测定TMS对PASMCs凋亡的影响。结果:TMS的紫外吸收图谱为λmax(MeOH):318,306.2,217.8nm;红外光谱解析为IRνKmaBxr/cm:2999,2935,2836,1591,1511,1456/cm;1H-NMR谱解析显示结构含有3个羟基;13C-NMR图谱解析为17个碳信号,并且其结构中含有对称的结构片段。质谱图谱解析为ESI-MS m/z:271[M+H]+,256[M+H-CH3]+,241[256-CH3]+,相对分子质量为270,推测分子式为C17H18O3,结构中含有甲基。样品元素分析得分子结构式可用C17H18O3表示,因此可确定化合物为反-3,5,4'-三羟基二苯乙烯。TMS绝对生物利用度为45.4%,在小肠上段有较好吸收,通过粪便、胆汁排泄,在各组织中均有分布,最大耐受量(MTD)约5.85 g/kg。TMS干预PASMCs 24 h后经MTT法测定显示对其生长具有显著的抑制作用,其强度呈剂量依赖性改变。A^H组的生长抑制率分别为(4.07±2.12)%,(6.54±4.78)%,(9.35±4.26)%,(16.75±5.34)%,(23.74±7.07)%,(6.78±5.58)%,(8.81±5.16)%,(17.81±6.03)%。流式Annexin V/PI法检测结果显示:TMS干预PASMCs 24 h组细胞凋亡率显著高于TNF-α干预组,且其作用呈剂量依赖性。A^H组的细胞凋亡率分别为(2.63±0.74)%,(3.54±0.81)%,(5.77±4.62)%,(11.68±5.35)%,(18.79±4.15)%,(4.11±3.59)%,(6.33±4.8)%,(12.47±5.06)%。结论:TMS的分子式可用C17H18O3表示,结构式为反-3,5,4'-三羟基二苯乙烯。TMS的生物利用度为45%。TMS呈剂量依赖性地抑制PASMCs的增殖并诱导其凋亡。

天然活性化合物羟基白藜芦醇中间体的制备研究

白藜芦醇（Resveratrol,3,4＇,5-trihydroxy-trans-stil-bene）即反式3,4＇,5-三羟基茋,广泛存在于虎杖、葡萄、花生等多种植物中。白藜芦醇作为一种重要的植物抗毒素,具有多种医疗保健生理活性作用,如抗菌、抗氧化、抗癌、抗血小板凝聚、抗艾滋病活性等[1～5]。被誉为继紫杉醇后的第二大抗癌药物。

朊病毒感染细胞模型中趋化因子CXCL1变化特征研究

目的 探究CXCL1在朊病毒感染细胞模型SMB-S15中的变化特征,比较感染细胞内朊病毒含量变化对CXCL1水平变化的影响。方法 通过荧光定量PCR、蛋白免疫印迹和酶联免疫吸附试验(ELISA)对朊病毒感染细胞模型SMB-S15及其对照细胞SMB-PS、SMB-RES中CXCL1的转录及翻译水平进行分析。利用ELISA对用白藜芦醇和3,4-二羟基苯亚甲基丙酮(DBL)分别处理不含朊病毒和含少量朊病毒的SMB-S15细胞的CXCL1蛋白水平进行分析。结果 在朊病毒感染细胞SMBS15中,CXCL1的转录水平显著高于对照细胞SMB-PS和SMB-RES,差异有统计学意义。在细胞裂解液和对应的培养基中,SMB-S15细胞的CXCL1蛋白表达水平均高于SMB-PS和SMB-RES细胞。白藜芦醇处理不同时间的SMB-S15细胞和不同浓度DBL处理的SMB-S15细胞中CXCL1蛋白水平均呈下降趋势,具有时间和剂量依赖性。结论 朊病毒感染细胞模型中CXCL1含量明显升高,且与胞内朊病毒的含量呈正相关。