6-羟基染料木素及其甲基化衍生物的合成和抗氧化与抗缺氧活性

目的:缺氧是一种常见的病理现象,通常由机体组织供氧不足或无法有效利用氧导致。羟基化及甲氧基化黄酮类化合物具有显著的抗缺氧活性。本研究旨在探索6-羟基染料木素(6-hydroxygenistein,6-OHG)及其甲基化衍生物的合成方法和抗氧化与抗缺氧活性。方法:以鹰嘴豆芽素A为原料,经甲基化反应、溴化反应、甲氧基化反应及去甲基化反应得到6-OHG及其4个甲基化衍生物[4’,6,7-三甲氧基-5-羟基异黄酮(化合物3)、4’,5,6,7-四甲氧基异黄酮(化合物4)、4’,6-二甲氧基-5,7-二羟基异黄酮(化合物6)、4’-甲氧基-5,6,7-三羟基异黄酮(化合物7)]。采用氢-1核磁共振波谱法(1H-nuclear magnetic resonance spectroscopy,1H-NMR)和质谱法(mass spectrometry,MS)表征产物结构;高压液相色谱法检测化合物的纯度;1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除实验检测化合物的体外抗氧化活性。将PC12细胞分为正常组、缺氧模型组、芦丁组(1×10-9~1×10^(-5)mol/L),以及常氧和缺氧条件下的目标化合物组(1×10-9~1×10^(-5)mol/L),采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞活力,筛选得到抗缺氧活性优异的目标化合物及其最佳抗缺氧活性时的药物浓度。分别用抗缺氧活性优异的目标化合物、芦丁的最佳药物浓度处理PC12细胞后,在光镜下观察细胞形态,采用流式细胞术测定细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的蛋白质表达水平。结果:6-OHG及其4个甲基化衍生物的结构无误,纯度均>97%。当浓度为4 mmol/L时,化合物7和6-OHG的DPPH自由基清除率分别为81.16%和86.94%,均高于阳性对照芦丁,而化合物3、4、6的清除率均低于20%。与正常组相比,缺氧模型组的细胞活力显著下降(P<0.01);与缺氧模型组相比,化合物3、4、6对缺氧条件下的细胞活力无显著影响;在所有实验浓度下,6-OHG组的细胞活力均显著高于缺氧模型组(均P<0.05);在给药浓度为1×10^(-7)或1×10^(-6)mol/L时,化合物7组的细胞活力显著高于缺氧模型组(均P<0.05)。6-OHG和化合物7的抗缺氧活性优异,最佳药物浓度分别为1×10^(-6)和1×10^(-7)mol/L。采用6-OHG(1×10^(-6)mol/L)和化合物7(1×10^(-7)mol/L)处理PC12细胞后,与缺氧模型组相比,细胞损伤明显减轻,细胞凋亡率显著下降(P<0.01),HIF-1α和VEGF蛋白质的表达水平显著下调(均P<0.01)。结论:优化后的合成路线可提高6-OHG的产率,通过甲基化和选择性去甲基化得到4个衍生物。6-OHG和其衍生物化合物7表现出优异的体外抗氧化和抗缺氧活性,该活性与其分子中存在的A环邻三酚羟基结构有关。

新型含1,2,3-三氮唑的染料木素糖缀合物的合成

以染料木素为起始原料,经两步反应制得中间体7-O-炔丙基染料木素(3);以Cu I为催化剂,3与叠氮乙酰基糖经Click反应合成了7-O-[1-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-糖苷)-1H-1,2,3-三氮唑-4-甲基]-染料木素(5a^5c);5a^5c经去乙酰基制得三种含1,2,3-三氮唑的氮苷染料木素糖缀合物(6a^6c)。3,5和6均为新化合物,其结构经1H NMR,13C NMR和HR-MS表征。

RP-HPLC测定染料木素-4′-葡萄糖苷及其有关物质

目的 建立染料木素-4′-葡萄糖苷的含量测定方法。方法 采用反相高效液相色谱法。DiamonsilC18柱（4.6mm×250mm，5μm），流动相为乙腈-水（用磷酸调节pH至2.73）（25∶75），流速1.0mL·min^-1，检测波长261nm，柱温35℃。结果 染料木素-4′-葡萄糖苷在0.5055-101.1mg·L^-1内峰面积与浓度呈良好线性关系（r=1.0000，n=6），平均回收率99.2%（RSD=1.1%，n=9），日内精密度RSD〈0.5%，日间精密度RSD〈0.7%，最低检测限0.2ng。同时对样品中所含染料木素、染料木素-7-葡萄糖苷和染料木素-7，4′-二葡萄糖苷等微量有关物质的分离和检测也获得满意的结果。结论 该方法简便、可靠，可用于染料木素及其苷类的质量控制。

4′,7-二辛氧基染料木素的合成及其抗乳腺癌活性研究

目的合成4′,7-二辛氧基染料木素并检测其生物活性。方法在染料木素的7位和4′位引入辛氧基,并采用MTT比色法,以5氟尿嘧啶为阳性对照,评价其对体外培养的人乳腺癌(MCF-7)细胞的作用。结果 4′,7-二辛氧基染料木素对MCF-7细胞的增殖抑制作用强于阳性对照药物。结论提示4′,7-二辛氧基染料木素可作为抗乳腺癌的新型候选药物。

7-二氟甲氧基-4′,5-二辛氧基染料木素对小鼠急性毒性研究

目的研究化合物7-二氟甲氧基-4′,5-二辛氧基染料木素对小鼠的急性毒性。方法给小鼠按剂量2000mg·kg^-1一次性灌胃7-二氟甲氧基-4′,5-二辛氧基染料木素,连续观察9天,统计死亡率,计算出LD50值。结果小鼠按剂量2000mg·kg^-1给予7-二氟甲氧基-4′,5-二辛氧基染料木素后,均无明显中毒反应出现,也无死亡现象。结论 7-二氟甲氧基-4′,5-二辛氧基染料木素毒性极低,属低毒范围。

6-羟基染料木素和6,8-二羟基染料木素的简便合成

以鹰嘴豆芽素A为原料,通过溴代、甲氧基化和去甲基化三步反应合成了6-羟基染料木素(2b)和6,8-二羟基染料木素(3b),总产率分别为20%和40%,其结构经1H NMR,13C NMR,IR和HR-MS(ESI)表征。

8,′8″-去甲基三白脂素-8的全合成

以2-甲氧基酚,丁二酰氯和L-乳酸乙酯为起始原料,用会聚法完成了8,′8″-去甲基三白脂素-8的全合成,总产率1.79%。其结构经1H NMR和MS表征。

5,7,4′-三羟基取代黄酮化合物与牛血清白蛋白的相互作用

利用荧光光谱法与紫外光谱法研究5,7,4′-三羟基取代类黄酮化合物芹菜素、柚皮素和染料木素与牛血清白蛋白(BSA)的结合,探讨了C环氢化及取代位置对其与BSA相互作用的影响。结果表明,3种化合物对BSA内源性荧光均有猝灭作用,且猝灭类型为静态猝灭;3种化合物与BSA的结合位点约为1,在295K条件下,与BSA结合由强到弱顺序为芹菜素、染料木素、柚皮素,结合常数分别为1.269×107、3.011×105和1.342×105 L/mol;芹菜素主要通过氢键与范德华力与BSA结合,柚皮素和染料木素主要通过静电作用与BSA结合;说明具有相同A环与B环结构的黄酮化合物,C环氢化后削弱其与BSA的作用,B环连接在C-2位置上与BSA的结合作用更强。3种化合物的加入均改变了BSA酪氨酸残基与色氨酸残基的微环境;同时也改变了蛋白质的二级结构与氨基酸残基,与BSA均形成了复合物。

HPLC测定降脂酮Ⅱ号中的5,7,4'-三甲基染料木素及其有关物质

目的采用HPLC法测定降脂酮Ⅱ号中5,7,4'-三甲基染料木素(TMG)的含量及其有关物质。方法色谱柱为Kromasil C_(18)柱(150 mm×4.6 mm,5μm),柱温30℃,流动相为甲醇-水(80∶20),流速1 m L·min^(-1),检测波长260 nm。结果0.024~0.24μg TMG与峰面积具良好的线性关系(r=0.9999),平均回收率为99.42%,RSD=1.00%(n=6)。结论所用方法快速、简便、准确、专属性强,可用于降脂酮Ⅱ号的质量控制。

抗癌异黄酮染料木素的合成研究

目的：研究染料木素的一种合成新方法；方法：以间苯三酚和对羟基苯乙腈为起始原料，经过4′—羟基苯基—2，4，6—三羟基苯基酮中间体，然后发生增碳反应和利用微波合成新技术进行关环反应而得目标产物；结果：目标产物的收率有了较大提高，总收率为38．7％；结论：工艺简单，产率较高，具有一定的应用价值。

糙叶败酱中木脂素成分研究

目的 研究糙叶败酱 (PatriniascabraBge .)中的木脂素类化学成分。方法 应用柱色谱和HPLC法分离纯化 ,通过光谱 (IR ,MS ,1 HNMR ,1 3CNMR ,DEPT ,HMQC和HMBC)鉴定其化学结构。结果和结论 分离并鉴定了 4个木脂素类化合物 ,分别鉴定为 :落叶松脂醇 (1) ,4 [1 乙氧基 1 (4′ 羟基 3′ 甲氧基 )苯基 ]甲基 2 (4 羟基 3 甲氧基 )苯基 3 羟甲基四氢呋喃 (2 ) ,异落叶松树脂酚 (3) ,去甲络石糖苷 (4)。化合物 2为新的木脂素 ,化合物 3,4为首次从该属植物中分得。

8-羟基染料木素及其甲基化衍生物的合成与抗缺氧活性研究

目的 制备8-羟基染料木素及其甲基化衍生物,并考察其抗氧化和抗缺氧活性,初步阐明其构效关系。方法以鹰嘴豆芽素A为原料,经甲基化、溴代、甲氧基化和去甲基化等反应,得到8-羟基染料木素(化合物Ⅰ)及3个甲基化衍生物(化合物Ⅱ~Ⅳ);用DPPH自由基清除实验测定4个目标化合物的自由基清除活性;CCK-8法考察其对缺氧PC12细胞的保护作用,于光镜下观察经目标化合物处理后的细胞形态,比色法测定细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性。结果 目标化合物Ⅰ~Ⅳ的结构通过对比文献或经NMR、MS等波谱手段确认,HPLC检测纯度均>98%。化合物Ⅰ、Ⅱ对DPPH自由基有较好的清除作用。除化合物Ⅳ外,化合物Ⅰ~Ⅲ均可显著提高缺氧PC12细胞的存活率,降低LDH的活性,维持细胞形态,减轻缺氧对PC12细胞的损伤,其活性顺序为:Ⅰ>Ⅱ>Ⅲ>Ⅳ。结论 8-羟基染料木素及其甲基化衍生物的DPPH自由基清除活性及对缺氧PC12细胞的保护作用随着分子结构中酚羟基数目的增加而增强,提示这些化合物的自由基清除作用可能是其发挥抗缺氧活性的主要机制,其中,8-羟基染料木素的活性最佳。

温度及pH敏感的β-环糊精聚合物微球的合成及药物控制释放研究

以反相乳液聚合得到了β-CD聚合物微球,对β-CD微球进行氯乙酰化改性后,利用原子转移自由基聚合的方法把聚甲基丙烯酸N ,N 二甲氨基乙酯(PDMAEMA)接枝到β-CD微球上,从而得到了具有温度和pH响应性的β- CD聚合物微球.通过红外光谱、元素分析确定了PDMAEMA接枝的β- CD微球的结构,采用热台偏光显微镜直接观测到了β- CD微球的温度和pH敏感性.对模型药物染料木素(GNT)和苯丁酸氮芥(CLB )进行了控制释放研究,结果表明pH值可对微球的“内环境”起到“开 关”作用,从而可构筑出一种新型的药物控制释放体系.

鹰嘴豆中三种异黄酮酯化反应研究

目的:改善鹰嘴豆中3种异黄酮的药物活性。方法:以鹰嘴豆芽素A、刺芒柄花素、染料木素为原料,对其进行4-溴丁酰酯化反应、EDC缩合反应、正丁酰酯化反应。结果:合成了12个异黄酮类衍生物,方法简单、条件易控、产率较高。结论:产物结构通过1H-NMR、13C-NMR、ESI-MS分析确认,为进一步对其药物活性研究奠定结构基础。

6-甲基-4-(3-三氟甲基苯基)-3(2H)-哒嗪酮的合成与生物活性研究

在对3-三氟甲基-1,1'-联苯类衍生物类化合物进行CoMFA计算的基础上,设计合成了化合物6-甲基-4-(3-三氟甲基苯基)-3(2H)-哒嗪酮(T-1),分别采用小杯法、浮萍法和盆栽法对其除草活性进行了较详细的研究,发现化合物T-1具有很好的白化活性和除草效果.研究了T-1的合成路线,实施了三条完全不同的路线进行合成,比较了三条路线的优缺点.

三白脂B：三白草中1个新的木脂素成分

目的研究三白草Saururus chinensis全草的化学成分。方法采用多种柱色谱法分离,通过理化鉴别及波谱分析技术鉴定化合物的结构。结果从三白草全草95%乙醇提取物中分离得到了7个化合物,分别鉴定为反式-7,8-二氢-7-（3,4-亚甲二氧基）苯基-1′-（2-氧丙基）-3′-甲氧基-8-甲基苯并呋喃（1）、4-（3-甲氧基-4-羟基）苯基-3-甲基-3-丁烯-2-酮（2）、（＋）-愈创木素（3）、（＋）-反式-1,2-二氢脱氢愈创木脂酸（4）、异落叶松脂素-4-O-β-D-葡萄糖苷（5）、异甘密树脂B（6）和perseal F（7）。结论化合物1为新化合物,命名为三白脂B,化合物2-7均为首次从该植物中分离得到。

基于UFLC-IT-TOF-MS技术的牡荆子中2个木脂素在大鼠体内代谢研究

目的对牡荆子中2个木脂素单体化合物6-羟基-4-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-3-羟甲基-7-甲氧基-3,4-二氢-2-萘醛(VB-1)和vitedoin A(VB-2)在大鼠体内的代谢情况进行研究。方法采用超快速液相色谱-离子阱飞行时间质谱(UFLC-IT-TOF-MS)技术,鉴定大鼠分别ig给予2个木脂素单体化合物后,粪便、尿液、胆汁、血浆中的代谢产物。结果发现并确证了2个木脂素原型及其11个代谢产物在大鼠体内的存在。通过代谢产物鉴定分析了其主要代谢途径,发现在大鼠体内这2个木脂素成分发生了葡萄糖醛酸化、硫酸化、羟化、羟化硫酸化、还原葡萄糖醛酸化和还原硫酸化等代谢反应。结论通过对2个木脂素单体化合物代谢产物的分析,基本阐明了其在体内的代谢过程,为进一步的药理活性及其机制研究提供了依据。

黑老虎果实中1个新的联苯环辛烯型木脂素

目的对黑老虎Kadsura coccinea果实中的化学成分及抗炎活性进行研究。方法通过硅胶、ODS、Sephadex LH20、MCI等多种柱色谱技术进行分离、纯化,根据波谱数据和理化性质鉴定化合物的结构。构建脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7释放NO的模型评价化合物的抗炎活性。结果从黑老虎果实75%乙醇提取物中分离得到11个化合物,分别鉴定为(aS,7R,8R,8'S,7'R)-7-苄酰氧基-7,7',8,8'-四氢-4,5-亚甲二氧基-3,3',4',5',7'-五甲氧基-8,8'-二甲基-二苯并[a,c]环辛烯(1)、3,4-二羟基-3',4'-二甲氧基-6,7'-环木脂素(2)、kadsuralignan H(3)、(+)-(8S,8'R)-4,4'-二羟基-3,3',5'-三甲氧基木脂烷(4)、前戈米辛(5)、松脂醇(6)、aromadendrane-4β,10β-diol(7)、nephthediol(8)、oplodiol(9)、1β,11-dihydroxy5-eudesmene(10)、pubinernoid A(11)。结论化合物1为1个新的联苯环辛烯型木脂素类化合物,命名为血藤果素A;化合物2、4、7~11为首次从该属中分离得到。在50μmol/L的浓度下,化合物4可以有效的抑制LPS诱导RAW264.7细胞NO的释放,抑制率为64.45%。

三尖杉茎叶的木脂素类化合物研究

目的研究三尖杉Cephalotaxus fortunei的化学成分。方法采用薄层色谱、正相硅胶柱色谱、ODS反相柱色谱、HP20大孔树脂及Sephadex LH-20凝胶柱色谱、高效液相制备色谱等分离技术进行分离,运用1H-NMR、13C-NMR、ESI-MS等多种波谱技术鉴定化合物的结构。结果从三尖杉的乙醇提取物中分离得到了17个木脂素类化合物,分别鉴定为shonanin(1)、牛蒡子苷元(2)、α-铁杉脂素(3)、罗汉松脂酚(4)、去甲络石苷元(5)、表去甲络石苷元(6)、(7′S)-羟罗汉脂素(7)、(7′R)-羟罗汉脂素(8)、(7′S)-hydroxyarctigenin(9)、开环异落叶松树脂酚(10)、4,4′-di-O-methylcephafortin A(11)、5-(3″,4″-二甲氧基苯基)-3-羟基-3-(4′-羟基-3′-甲氧基苄基)-4-羟甲基二氢呋喃-2-酮(12)、cephafortin B(13)、二氢去氢二愈创木基醇(14)、7R,8S-4,7,9,9′-四羟基-3,3′-二甲氧基-8-O-4′-新木脂素(15)、7R,8R-4,7,9,9′-四羟基-3,3′-二甲氧基-8-O-4′-新木脂素(16)、threo-1,2-双(4-羟基-3-甲氧基苯基)-1,3-丙二醇(17)。结论化合物3、6、10、17为首次从三尖杉属植物中分离得到,4、5、7~9、12、14为首次从三尖杉中分离得到。

八角莲愈伤组织中木脂素类化学成分研究

目的对八角莲(Dysosma versipellis)愈伤组织中木脂素类化学成分进行研究。方法以体积分数95%乙醇对八角莲愈伤组织进行提取,提取物经三氯甲烷、乙酸乙酯萃取,采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶色谱、制备薄层色谱等色谱技术进行分离,利用NMR、MS等光谱学方法进行结构鉴定。结果从八角莲愈伤组织中共分离鉴定了9个木脂素类化合物,分别为4'-去甲基鬼臼毒酮(1),β-足叶草脂素(2),4'-去甲基异鬼臼苦酮(3),(+)-松脂酚(4),α-足叶草脂素(5),鬼臼毒素(6),NC 370(7),4'-去甲基鬼臼毒素(8),去氧鬼臼毒素(9)。结论除化合物6外,其他化合物均为首次从八角莲愈伤组织中分离得到,化合物3,4,7为首次从该属植物中分离得到。