5,4′-二-正辛烷氧基-7-二氟甲基金雀异黄素抑制人乳腺癌细胞生长

目的:观察金雀异黄素(genistein,GEN)衍生物即5,4′-二-正辛烷氧基-7-二氟甲基金雀异黄素(5,4′-Di-n-octox-yl-7-gem-difluoromethylene-genistein,DodFMG)抑制人乳腺癌MCF-7细胞生长作用。方法:体外培养人乳腺癌MCF-7细胞和人乳腺HBL-100细胞,MTT法测定细胞活性;集落形成法检测细胞的平皿集落形成能力。结果:DodFMG对MCF-7细胞活性有明显的抑制作用,呈剂量依赖性,IC50值为11μmol/L;对HBL-100细胞的抑制作用较弱,IC50值为65μmol/L,其对MCF-7细胞的细胞毒选择指数为5.9(65/11)。DodFMG以浓度依赖方式抑制MCF-7细胞集落形成。结论:DodFMG是一种具有相对选择性的新型抗乳腺癌活性新化学实体。

7-二氟甲氧基-5,4′-二-正辛烷氧基金雀异黄素诱导肺癌A549细胞凋亡

目的研究7二氟甲氧基-5,4'二正辛烷氧基金雀异黄素(7-difluorom+hoxyl-5,4'-di-n-octylgenistein,DFOG)诱导人肺癌A549细胞凋亡作用。方法体外培养A549细胞。二氟甲基化或烷基化得到一系列金雀异黄素衍生物。MTT法测定细胞活力;碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率;琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯形条带;Western blot分析Bcl-2和Bax蛋白表达。结果 9个金雀异黄素衍生物较先导化合物GEN具有更强的抗肿瘤活性。其中DFOG对A549细胞活性显示最强的抑制作用,IC50为3.9μmol·L-1。DFOG(2.0、4.0和8.0μmol·L-1)作用48h的细胞凋亡率依次增高。8.0μmol·L-1DFOG处理A549细胞48h导致典型DNA梯形条带形成。8.0μmol·L1DFOG处理A549细胞6h、12h和24h,Bcl-2蛋白表达水平下降,而Bax蛋白表达上升。结论 DFOG诱导A549细胞凋亡作用与其增高Bax/Bcl-2比值有关。

5,4’-二-正辛烷氧基-7-二氟亚甲基异黄酮抑制人乳腺癌细胞生长和诱导凋亡的作用

目的探讨金雀异黄素(Genistein,Gen)衍生物5,4’-二-正辛烷氧基-7-二氟亚甲基异黄酮(5,4’-Di-n-octoxyl-7-gem-difluoromethylene-genistein,DOdFMG)体外抑制人乳腺癌细胞系MCF-7细胞生长和诱导凋亡作用及机制,以寻找具有开发前景的肿瘤治疗新候选药物.方法体外培养人乳腺癌细胞系(MCF-7)细胞,分别应用不同浓度的DOdFMG处理人乳腺癌细胞系(MCF-7)细胞,软琼脂克隆形成法测定DOdFMG对体外培养MCF-7细胞的锚定非依赖性增殖及生长作用的影响;PI染色流式细胞计分析(FCM)法检测DOdFMG对MCF-7细胞诱导凋亡影响.western blotting法检测蛋白激酶CK2,NF-KB蛋白表达和活性的变化,初步探讨DOdFMG抗乳腺癌作用的分子机制.结果DOdFMG对体外培养MCF-7细胞具有抑制增殖及生长作用,呈剂量依赖性.DOdFMG诱导人MCF-7细胞凋亡.WesternBlot分析结果显示:DOdFMG3.0,10.0,30.0μmol/L处理人乳腺癌MCF-7细胞24h后,比较于空白对照组,蛋白激酶CK2的表达下调12.50%,41.50%,67.30%,NF-KB的表达下调20.50%,51.47%,71.93%.DOdFMG30.0μmol/L分别处理6,12,24h后,比较于空白对照组,蛋白激酶CK2的表达下调27.73%,44.8%,65.2%,NF-KB的表达下调20.50%,49.83%,69.93%.这表明DOdFMG以时间-剂量依赖方式引起蛋白激酶CK2、NF-KB下调,与先导化合物Gen比较,DOdFMG更为有效(P<0.05).结论DOdFMG显著抑制人乳腺癌细胞系(MCF-7)细胞增殖及生长;DOdFMG可诱导人乳腺癌细胞系(MCF-7)细胞凋亡;抑制蛋白激酶CK2,下调NF-κB的表达可能是DOdFMG诱导凋亡的分子机制之一.

5,4'-二-正辛烷氧基-7-二氟亚甲基异黄酮对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨金雀异黄素(gen)衍生物5,4'-二-正辛烷氧基-7-二氟亚甲基异黄酮(5,4'-Di-n-octoxyl-7-gem-difluoromethylenegenisteinDOdFMG)体外选择性抑制人乳腺癌细胞增殖和诱导凋亡作用。方法:MTT法检测DOdFMG对MCF-7和HBL-100细胞生长的影响;流式细胞术和AO/EB荧光双染法测定DOdFMG诱导MCF-7细胞凋亡作用及对细胞周期的影响。结果:DOdFMG抑制MCF-7细胞生长,呈时间剂量依赖,比gen具有更强选择性和抗肿瘤活性;DOdFMG能诱导MCF-7细胞凋亡,DOdFMG40.0μM组比gen100μM组诱导凋亡的活性更强,DOdFMGMCF-7将MCF-7细胞阻滞于S期和G2期,呈浓度依赖。结论:DOdFMG能抑制人乳腺癌细胞系(MCF-7)细胞生长和诱导凋亡,是一种高效、毒副作用小的新型治疗乳腺癌候选药物。

7-二氟亚甲基-5,4’-二甲烷氧基异黄酮对高糖损伤的猴视网膜血管内皮细胞的保护作用

目的探讨7-二氟亚甲基-5,4’-二甲烷氧基异黄酮(G-10)对高糖作用的猴视网膜血管内皮细胞的影响。方法体外高糖环境(80mmol·L-1)下通过在猴视网膜血管内皮细胞损伤模型中分别加入G-10(10μmol·L-1)以及其先导化合物金雀异黄素(100μmol·L-1)、阳性对照物维生素B1(100μmol·L-1)与空白对照组、高糖(80mmol·L-1)及溶酶组相互进行比较。应用MTT比色法、PI染色流式细胞计数分析,观察3种物质对高糖损伤的视网膜血管内皮细胞的保护作用。结果高浓度葡萄糖对视网膜血管内皮细胞有显著的损伤作用,在80mmol·L-1的高糖环境下3种物质对视网膜血管内皮细胞的保护作用均有统计学意义(P<0.01),其中G-10组的作用强于对照的2组。结论G-10是一种新型的有效保护视网膜血管内皮细胞的活性化合物。

7-二氟亚甲基-5,4′-二甲烷氧基异黄酮抗兔动脉粥样硬化机制的实验研究

目的研究7-二氟亚甲基-5,4’-二甲烷氧基异黄酮(dFMGEN)抗动脉粥样硬化(AS)的可能机制。方法♂新西兰兔40只,随机抽取32只制作AS模型,余8只为正常对照组;造模60天后,32只分为模型对照组、dFMGE组、洛伐他汀组、金雀异黄素组,分别给予安慰剂及相应药物5mg·kg-1·d-1,治疗30天,测定治疗前后血清相关指标。结果与模型对照组相比,dFMGEN组一氧化氮(NO)水平升高(P<0.01);内皮素(ET-1)、氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)水平降低(P<0.01);同型半胱氨酸(HCY)水平无统计学差异。结论增加NO合成、减少ET-1释放及抗LDL-C氧化,可能与dFMGEN抗AS机制有关。

金雀异黄素4′-二氟甲醚化衍生物的合成

目的合成金雀异黄素4′-二氟甲醚化衍生物。方法金雀异黄素与HCF2Cl、NaOH在水和二氧六环的混合液中发生二氟甲醚化反应,生成7,4′-二-二氟甲氧基-5-羟基异黄酮(2)、7-二氟甲氧-基5,4′-二羟基异黄酮(3)和4′-二氟甲氧基-5,7-二羟基异黄酮(4),再经甲醚化反应得到7-二氟甲氧基-5,4′-二甲氧基异黄酮(5)和4′-二氟甲氧基-5,7-二甲氧基异黄酮(6)。结果化合物的结构经MS1、H-NMR1、3C-NMR1、9F-NMR等进行了确证,化合物(4)和(6)为首次合成的新化合物。结论为金雀异黄素4′-二氟甲醚化衍生物的合成提供了实验基础。

7-二氟甲氧基-5,4'-二正辛烷氧基金雀异黄素对卵巢癌干细胞样细胞自我更新和FoxM1表达的影响

目的:研究7-二氟甲氧基-5,4'-二正辛烷氧基金雀异黄素(DFOG)抑制人卵巢癌SKOV3细胞系球形成细胞自我更新作用。方法:体外培养SKOV3细胞,干细胞条件培养基悬浮培养扩增球形成细胞(SFCs)。Western blot分析SFCs的CD133及CD44蛋白及FoxM1表达水平;MTT法测定SFCs增殖活性;肿瘤球形成试验检测SFCs自我更新能力。结果:在干细胞条件培养基中,SKOV3细胞生长为非粘附三维克隆性球体。与亲本细胞相比,SKOV3细胞系SFCs高表达CD133及CD44与FoxM1蛋白。DFOG(0.1,1.0,10.0μmol/L)作用72 h,优先抑制源自SKOV3细胞SFCs增殖与自我更新,并以浓度依赖的方式下调SFCs中FoxM1表达。结论:DFOG抑制卵巢癌干细胞样细胞自我更新与其抑制FoxM1蛋白表达相关。

7-二氟甲氧基-5,4'-二正辛烷氧基金雀异黄素对人卵巢癌裸鼠移植瘤生长的影响

目的:研究7-二氟甲氧基-5,4'-二正辛烷氧基金雀异黄素(7-difluoromethoxyl-5,4'-di-n-octylygenistein,DFOG)对人卵巢癌裸鼠移植瘤生长的影响。方法:建立人卵巢癌HO-8910细胞裸鼠皮下移植瘤,随机分为5组,每组5只,即生理盐水组(Saline),紫杉醇组(TAX),DFOG此处为3组(5、10、20 mg/kg)组,观察各组移植瘤的体积和重量变化,观察各组荷瘤裸鼠重量及其血清乳酸脱氢酶(LDH)、谷丙转氨酶(ALT)、肌酐值(Cr)、外周血白细胞计数(WBC)的变化。FCM检测移植瘤组织细胞的凋亡率,Western blot检测移植瘤组织细胞cortactin蛋白的表达变化。结果:DFOG各组显著抑制人卵巢癌HO-8910细胞裸鼠移植瘤生长,与Saline组比较,移植瘤体积明显减小(P均<0.05),其中DFOG10mg/kg组对移植瘤抑制率与TAX组相当(P>0.05);与Saline组比较,DFOG各组移植瘤重量明显减轻(P均<0.05),其中DFOG10mg/kg组对移植瘤重量减少率与TAX组相当(P>0.05)。与Saline组及DFOG各组比较,TAX组荷瘤裸鼠重量显著降低(P均<0.05),而Saline组和DFOG各组之间荷瘤裸鼠重量比较差异无统计学意义(P>0.05);与Saline组及DFOG各组比较,TAX组荷瘤裸鼠血清LDH、ALT、Cr值和外周血WBC计数显著降低(P均>0.05),而Saline组与DFOG各组比较,荷瘤裸鼠血清LDH、ALT、Cr值和外周血WBC计数无明显差异(P>0.05)。DFOG各组作用HO-8910细胞移植瘤16 d后,HO-8910细胞发生凋亡,与Saline组比较(P均<0.05),其中DFOG10 mg/kg组凋亡率与TAX组相当(P>0.05);同时cortactin蛋白表达降低,与Saline组比较(P均<0.05),其中DFOG10 mg/kg组凋亡率与TAX组相当(P>0.05)。结论:DFOG能抑制卵巢癌HO-8910细胞裸鼠移植瘤生长,下调cortactin蛋白表达和诱导HO-8910细胞凋亡。

7-二氟甲氧基-5,4'-二-正辛烷氧基金雀异黄素下调FOXM1抑制卵巢癌细胞生长

目的:研究新型金雀异黄素衍生物7-二氟甲氧基-5,4'-二正辛烷氧基金雀异黄素(DFOG)抑制人卵巢癌SKOV3细胞生长作用及其分子机制。方法:采用MTT法和集落形成法分析金雀异黄素以及DFOG对人卵巢癌SKOV3细胞生长的抑制作用。采用多种分子生物学技术如RT-PCR、Western blot、siRNA以及cDNA转染等探索分子机制。结果:金雀异黄素的9种衍生物抑制SKOV3细胞增殖活性作用均比金雀异黄素强,其中DFOG的抑制作用最强。DFOG和金雀异黄素导致SKOV3细胞生长抑制。DFOG能有效降低FOXM1和它下游基因(CDC25B,cyclin B)表达,上调p27KIP1表达。siRNA下调FOXM1后,再用DFOG处理,增强DFOG的细胞生长抑制作用。cDNA转染上调FOXM1能削弱DFOG诱导细胞生长抑制作用。结论:FOXM1介导金雀异黄素和DFOG抑制卵巢癌细胞生长作用,提示FOXM1可能成为治疗人卵巢癌的一个新靶标。

5,4’-二-正辛烷氧基-7-二氟亚甲基异黄酮体外抗人卵巢癌作用研究

目的:研究5,4’-二-正辛烷氧基-7-二氟亚甲基异黄酮(DOdFMG)体外抗人卵巢癌作用。方法:体外培养CoC1细胞,MTT比色法测定DOdFMG对CoC1细胞增殖的影响;台盼蓝染色细胞计数法评价DodFMG对CoC1细胞的生长抑制作用;AO/EB染色法荧光显微镜观察DOdFMG诱导CoC1凋亡细胞的形态学改变;Western blotting法分析DOdFMG对CoC1细胞NF-κB蛋白表达和活性的影响。结果:MTT比色法结果显示,DOdFMG有效抑制CoC1细胞增殖活性,呈剂量依赖性;其IC50值为11.9μM。DOdFMG显著抑制CoC1细胞的生长,DOdFMG(10.0μM)使CoC1细胞群体倍增时间从37.8 h(溶媒对照组)延长到50.6 h;AO/EB染色荧光显微镜观察DOdFMG处理后,部分CoC1细胞呈现典型凋亡细胞形态特征;Western blotting分析结果表明:DOdFMG抑制NF-κB/p65表达,呈浓度和时间依赖性。结论:DOdFMG具有抑制体外培养人卵巢癌CoC1细胞增殖、生长和诱导细胞凋亡作用;其作用与抑制NF-κB/p65表达有关。

7-二氟亚甲基-5,4,-二甲烷氧基异黄酮对动脉粥样硬化兔血管内皮功能的影响

目的:观察7-二氟亚甲基-5,4'-二甲烷氧基异黄酮(dFMG)对动脉粥样硬化兔血管内皮功能的影响。方法:40只雄性新西兰兔随机抽取32只制作动脉粥样硬化模型,剩余8只作为正常对照组,造模60天后用随机区组法将32只高脂模型兔分为模型对照组、dFMG组、洛伐他汀组、金雀异黄素组,分别给予安慰剂、dFMG、洛伐他汀、金雀异黄素每天5 mg/kg治疗30天。造模60天及治疗30天后分别于耳缘静脉采血测定血浆一氧化氮(NO),内皮素-1(ET-1)水平;同时于治疗30天后处死兔子取离体血管环进行乙酰胆碱(Ach)诱导的血管内皮依赖性舒张功能检测。结果:治疗30天后dFMG组与模型对照组比较,血浆NO水平显著升高(P<0.01),ET-1水平显著降低(P<0.01),Ach诱导的血管内皮依赖性舒张功能显著改善(P<0.01);dFMG组与洛伐他汀组比较无统计学意义(P>0.05)。结论:dFMGEN能影响NO和ET-1的释放,改善Ach诱导的血管内皮依赖性舒张功能。

金雀异黄素衍生物对糖基化终产物损伤猴视网膜血管内皮细胞的保护作用

目的研究7-二氟亚甲基-5,4’-二甲烷氧基异黄酮(dFMGEN)对糖基化终产物损伤的猴视网膜血管内皮细胞的影响。方法制备RF/6A细胞糖基化终产物损伤模型,用不同浓度的dFMGEN(1、3、10、30、100μmol/L)进行干预,MTT法观察dFMGEN对细胞生长增生的影响,流式细胞术检测dFMGEN对细胞凋亡的影响。结果糖基化终产物孵育RF/6A细胞48h,可明显抑制细胞生长、促进凋亡;dFMGEN与糖基化终产物共同孵育RF/6A细胞48h,能有效降低增生抑制率,减少凋亡,并呈浓度依赖性。100μmol/L dFMGEN比相同浓度的先导化合物金雀异黄素(GEN)和阳性药物VitB1作用更强。结论dFMGEN对糖基化终产物引起的视网膜血管内皮细胞的损伤具有保护作用。

DFOG抑制卵巢癌A2780细胞系球形成细胞自我更新与活化FoxO3a相关

目的:研究7-二氟甲氧基-5,4'-二正辛烷氧基金雀异黄素(DFOG)抑制人卵巢癌A2780细胞系球形成细胞自我更新及其作用机制。方法:体外培养A2780细胞,干细胞条件培养基悬浮培养扩增球形成细胞(sphere forming cells,SFCs)。Western blot分析SFCs的CD133和CD44蛋白及磷酸化FoxO3a蛋白表达水平;MTT法测定SFCs增殖活性;肿瘤球形成试验检测SFCs自我更新能力。结果:A2780细胞系SFCs具有自我更新能力。与亲本细胞相比,SFCs高表达CD133及CD44并具有更高的磷酸化FoxO3a蛋白表达水平。DFOG以浓度依赖的方式抑制SFCs增殖与自我更新,并下调SFCs中磷酸化FoxO3a蛋白水平。结论:DFOG抑制人卵巢癌A2780细胞系球形成细胞自我更新与其活化FoxO3a蛋白相关。

DFOG对A549细胞生长及FoxM1表达的影响

目的:研究7-二氟甲氧基-5,4′-二-正辛烷氧基金雀异黄素(DFOG)抑制人肺癌细胞生长作用及机制。方法:用不同浓度DFOG处理体外培养A549细胞后,流式细胞术(FCM)检测细胞周期分布;平皿集落形成法测定细胞生长;Western blot分析FoxM1蛋白表达。结果:DFOG处理24 h导致A549细胞系G2期细胞百分率显著增加(P<0.05);DFOG以剂量依赖方式抑制A549细胞集落形成率(P<0.05)。Western Blot分析发现,2.0μmol/L DFOG以时间依赖方式下调A549细胞FoxM1表达。结论:DFOG抑制A549细胞生长与其降低FoxM1表达有关。

DFOG对卵巢癌OVCAR3源性球细胞迁移和Twist1/FoxM1表达的影响

目的 :检查金雀异黄素(genistein,GEN)及其新型合成类似物7-二氟甲氧基-5,4’-二-正辛烷氧基金雀异黄素(7-difluoromethoxyl-5,4'-di-n-octyl genistein,DFOG)对人卵巢癌OVCAR3源性球细胞迁移和Twist1/Fox M1蛋白表达的作用。方法 :Transwell小室细胞迁移试验检测细胞迁移率。蛋白质印迹分析细胞Twist1和Fox M1蛋白表达水平。结果 :与OVCAR3细胞相比,OVCAR3源性球细胞迁移率更高。GEN(40μM)或DFOG(5μM和10μM)抑制OVCAR3源性球细胞迁移。此外,GEN(40μM)或DFOG(5μM和10μM)平行地下调Twist1和Fox M1蛋白表达。结论 :GEN及其类似物DFOG抑制OVCAR3源性球细胞体外迁移与其抑制Twist1和Fox M1蛋白表达相关。

TWIST1基因敲低对DFOG抑制OVCAR3源性球细胞自我更新和FoxM1表达的影响

目的:探讨7-二氟甲氧基-5,4’-二-正辛烷氧基金雀异黄素通过下调Twist1/FoxM1表达抑制OVCAR3源性球细胞自我更新作用分子机制。方法:表达TWIST1 sh RNA腺病毒感染OVCAR3源性球细胞敲低TWIST1基因表达。肿瘤球形成试验检查细胞自我更新能力。蛋白质印迹法检测细胞Twist1和FoxM1蛋白表达水平。结果:与OVCAR3细胞比较,OVCAR3源性球细胞具有更强自我更新能力以及高水平表达Twist1和FoxM1蛋白。TWIST1 sh RNA有效抑制OVCAR3源性球细胞肿瘤球形成和下调Twist1和FoxM1蛋白表达。TWIST1 sh RNA协作DFOG(5μM)抑制OVCAR3源性球细胞肿瘤球形成和Twist1和FoxM1蛋白表达。结论:DFOG可能通过调控Twist1表达抑制FoxM1表达,进而抑制OVCAR3源性球细胞自我更新。