4℃冷藏保存血小板输注对大鼠失血性休克/复苏致急性肾损伤的影响研究

目的研究4℃冷藏保存血小板(cold storage platelets,CSP)对大鼠失血性休克/复苏(HS/R)导致急性肾损伤的影响。方法健康雄性SD大鼠40只,随机选取20只用以制备血小板制剂,剩余大鼠随机分为4组:假手术组(空白组)、HS/R模型组(模型组)、CSP输注组、22℃±2℃振荡保存血小板输注组(RTP输注组)。容量复苏后24 h处死动物,采集血和肾组织标本。检测各组血清中血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、血清胱抑素C(CysC)及肾组织中白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素18(IL-18)含量。Western Blot法检测各组大鼠肾组织中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、肾损伤因分子1(KIM-1)表达量,HE染色观察肾组织病理学改变。结果①四组大鼠基线状态体质量、MAP、SCr、BUN等指标无明显差异(P>0.05)。②复苏后24 h,模型组大鼠SCr(P<0.05)、BUN(P<0.01)、CysC(P<0.01)水平均高于其他三组;CSP输注组BUN(P<0.01)、SCr(P=0.037)、CysC(P=0.020)水平低于RTP输注组。③与模型组比较,CSP输注组和RTP输注组血清IL-1β和IL-18水平均显著降低。较于RTP输注组,CSP输注组血清IL-1β水平有所降低(P=0.041)。④与模型组相比,CSP输注组NGAL蛋白表达明显下降(P<0.01),CSP输注组和RTP输注组KIM-1蛋白表达均显著下降(P<0.01)。肾组织病理学结果示,CSP输注可减轻肾细胞变性、坏死及炎性细胞浸润程度。结论较于RTP,CSP输注可减轻SD大鼠HS/R急性肾损伤。

即食海参4℃贮藏过程中品质变化规律

即食海参冷藏过程中极易产生品质劣变,该研究以即食海参为对象,测定4℃贮藏过程中质量损失率、水分含量、pH、菌落总数、组织蛋白酶L活力、胶原蛋白含量、氨基酸含量、质构和挥发性成分以及微观结构变化等指标。结果表明,贮藏6 d后,即食海参体积缩小明显,质量损失率达21.85%;贮藏期间水分含量不断下降但始终在93%以上;菌落总数前2 d约为6×105 CFU/g,14 d时增加到3.7×10^(6) CFU/g;pH值从初始的8.73降到6.88;组织蛋白酶L活力缓慢降低且始终低于150 U/mg;硬度、胶黏性和咀嚼性与贮藏时间总体呈负相关,弹性和内聚性则呈正相关;即食海参在贮藏前6 d的主要挥发性物质为无机硫化物,而后含甲基类化合物、无机硫化物和醇类、酮类物质逐渐增多,氮氧化合物则相应减少;胶原蛋白含量在27.27%~31.15%,贮藏时间对胶原蛋白含量的影响不显著;氨基酸总量变化不大;游离氨基酸种类前6 d有7~9种,12 d后达到16种;扫描电镜结果显示,即食海参的纤维主要以凝胶状和片状结构为主,变化不显著。即食海参在4℃贮藏6 d后理化性质发生改变,品质下降明显。即食海参体壁品质劣变的主要因素是微生物作用,其次是水分流失。

维生素C对藏猪精液4℃保存及其精子全基因组DNA甲基化的影响

旨在研究维生素C对藏猪精液4℃保存效果及其精子全基因组DNA甲基化的影响。用手握法采集健康藏猪精液,在改进的猪精液低温稀释液中添加不同浓度的维生素C(0.0、2.5、5.0、7.5、10.0g·L^(-1)),4℃保存到第5天时,以藏猪精子活力、精子畸形率、精子顶体完整率和质膜完整率为评价指标,探讨维生素C对藏猪精液4℃保存的效果;用甲基化荧光定量法检测藏猪新鲜精液组、保存到第5天时未添加维生素C组、添加维生素C组(添加维生素C最佳效果组5.0g·L^(-1))精液DNA甲基化的水平,以探讨维生素C对藏猪精液4℃保存所造成的精子全基因组DNA甲基化的影响。结果显示:添加5.0g·L^(-1)维生素C组其精子活力、畸形率、顶体完整率和质膜完整率均显著好于其它组(P<0.05);鲜精组、未添加维生素C组、添加维生素C组的DNA甲基化水平分别为(0.604 7±0.040 3)、(0.920 2±0.016 9)、(0.656 9±0.048 3)ng,鲜精组与添加组均显著低于未添加组(P<0.05),而鲜精组与添加组间差异不显著(P>0.05)。综上表明,在改进的猪精液稀释液中添加5.0g·L^(-1)维生素C可以明显改善藏猪精液4℃保存的效果,并且可以明显降低4℃保存对藏猪精液精子全基因组DNA甲基化的影响,这将为藏猪精液低温保存的生产应用奠定基础。

4℃长期保存洗涤红细胞体外质量研究

目的探讨延长洗涤红细胞(WRC)的保存期限.方法将悬浮红细胞均分为3份:1份不洗涤(对照组),其余2份分别用生理盐水(盐水组)和红细胞添加剂(MAP组)洗涤,终产品用MAP液悬浮,4℃保存,分6个时间段取样检测红细胞活性、功能.结果上清游离K+、Na+、Hb:盐水组0～35d,MAP组0～28d均符合标准[1];pH:MAP组＜盐水组＜对照组(P＜0.01);ATP:盐水组与对照组下降趋势基本一致(P＞0.05),35d时分别保留70.8%和66.9%,而MAP组自保存7d起低于盐水组、14d起低于对照组(P＜0.01),至35d时仅保留27.8%;2-3-DPG:MAP组下降速度明显大于盐水组和对照组(P＜0.01),7d时下降了92.5%;洗涤效果:盐水组红细胞回收率83.1%,白细胞清除率84.5%,血浆蛋白清除率98.9%,细菌试验阴性.结论盐水、MAP对红细胞膜基本无损伤;但较之盐水洗涤,MAP洗涤不适于WRC持续保存;盐水洗涤后WRC可在4℃继续保存21d.

4℃保存的绵羊皮肤成纤维细胞的培养及冷冻

为了探讨利用死亡珍稀动物皮肤建立成纤维细胞库的方法,本研究采集幼龄绵羊耳廓皮肤,在4℃条件下保存0 h(对照组)、24 h、48 h和72 h后进行原代培养,达到85%汇合后再进行了继代培养或者经冷冻-复苏后继代培养。结果:(1)与对照组相比,各保存组皮肤成纤维细胞经原代培养后达到85%汇合时间滞后(分别为4 d和8d^15 d);(2)各保存组成纤维细胞经4代培养后,与对照组继代培养达到85%汇合时间相同(对照组继代培养第1~4代均为4 d);(3)原代培养成纤维细胞通过冷冻-复苏后经第2代培养,即可在4 d内均达到85%汇合。表明动物死亡后立即采取其耳廓皮肤并在4℃下保存一段时间后,经原代培养和继代培养,或经原代培养、冷冻-复苏和继代培养,可获得具有正常继代能力的成纤维细胞。

全血放置4℃制备24h冰冻血浆的质量研究

目的探讨24h冰冻血浆(FP24)质量及其制备程序。方法 24份(400ml/份)全血于采后<6h用无菌接驳机一分为二:1份6h内过滤去除白细胞(简称滤白),在其中设对照组[12份滤白后立即制备血浆(FFP)]、实验组1[12份滤白后置4℃过夜(18～24h)后制备血浆(Ⅰ-FP24)];另1份作为实验组2,置4℃过夜后滤白并立即制备血浆(Ⅱ-FP24)。所有血浆分别制备好后立即保存至-30℃冰箱,并于采血后d337℃解冻后做体外质量评估:观察外观、检测FⅤ、FⅦ、FⅧ及Fib,以及主要生化指标含量。结果对照组FFPFib、FⅤ、FⅦ及FⅧ依次为(2.08±0.16)g/L、(86.57±18.73)%、(91.71±25.53)%和(97.65±25.99)%,与之相比,实验组1依次下降22.6%、29.38%、32.89%和40.71%,实验组2相应下降1.9%、-2.09%、14.91%和32.86%。实验组2与对照组的FⅧ分别为(65.56±13.93)%和(97.65±25.99)%(P<0.05),实验组2与实验组1的FⅤ分别为(88.38±15.97)%和(61.14±13.76)%(P<0.05);实验组2的K+、LDH、FHb分别为(4.33±0.28)mmol/L、(145.70±26.00)mmol/L和(129.96±34.33)mg/L,较对照组和实验组1明显增高(P<0.05)。结论全血采后<6h滤白并置4℃过夜再制备的冰冻血浆,凝血因子损失较多;全血采后置4℃过夜(18～24h)后滤白并随后制备的冰冻血浆,则能很大程度地保持凝血因子的效果。

非4℃条件保存血液的临床输注

目的 :研究非 4℃条件下保存血液进行临床输注的可行性 ,为野战条件下血液保存及临床应用提供依据。方法 :采集 9名健康志愿者的全血 ,用CPDA保存液 2 8℃保存 3d ,经检测符合输注质量要求后回输 ,观察输注效果和对志愿者有无不良影响。结果 :志愿者临床输注达到提高血红蛋白 (P <0 0 1)的目的 ,并且没有不良反应。结论 :非

4℃保存的小鼠屠体卵巢GV卵的发育能力

为了探明雌性动物死亡后GV期卵的可利用性,本研究将ICR系雌性小鼠处死,尸体在4～6℃下分别保存16h、24h和48h,取其卵巢GV期卵,体外成熟后,应用常规法进行体外受精或透明带切割法体外受精,获得2细胞期胚,通过体外培养或胚胎移植观察其发育能力。结果显示,4～6℃下保存16h和24h处理组的体外受精率(分别为31%、33%和21%、24%)与来自新鲜的带有颗粒细胞卵的体外受精率(33%)相比无显著差异。与其相比,保存48h处理组的GV卵已丧失发育能力。此外,体外受精中获得的2细胞胚经体外培养,16h处理组和24h处理组的囊胚率(60%、61%和72%、83%)与新鲜GV期卵处理组的囊胚率(72%)相比差异不显著。获得的2细胞胚经胚胎移植可得到正常幼鼠。上述结果表明,如果雌性小鼠死亡后立即在冷藏温度下(4～6℃)保存,其体内的GV卵在24h以内仍保持发育能力。

猪精液4℃低温保存技术研究

为丰富猪鲜精保存技术、改善与提高精液保存质量,本研究以市场占有率高、性能稳定和可耐受4℃低温的长效稀释剂为对照,探讨本课题组研制的4℃稀释剂(低温Ⅰ号、低温Ⅱ号)对猪精液低温保存效果的影响。结果表明:低温Ⅰ号和低温Ⅱ号稀释剂对猪精液的有效保存时间和总存活时间均显著高于对照组(P<0.05)。保存至第6天时,对照组精子活力显著降低(P<0.05),保存至第10天时,低温Ⅰ号、低温Ⅱ号、对照组精子活力分别为74.6、76.0、0;保存第10天时,对照组pH显著低于2个实验组(P<0.05);保存从第5天开始,实验组质膜完整性显著高于对照组(P<0.05)。综上,本课题组研制的稀释剂对猪精液4℃低温保存效果较好,而且低温Ⅱ号对精子活力和质膜完整性保存效果更优。

CMIP5对东北地区气温评估和2℃/4℃升温阈值出现时间研究

利用全球气候模式、多模式集合和东北三省观测数据,评估了不同典型浓度路径下全球气候模式和多模式集合对东北区域气温变化模拟能力和可信度,结果发现最优模式模拟结果优于多模式集合,具有较高的可信度。2℃升温阈值结果分析表明:大部分地区首次稳定到达2℃阈值开始年份分别出现在2025年之前(RCP2.6),在2015年之前(RCP4.5)和在2033年(RCP8.5)之前;其中RCP2.6情景下出现最早,RCP8.5情景下最晚,各情景下大体呈西晚-东早分布形势。4℃升温阈值结果分析表明:随着情景增加,首次达到4℃阈值的年份呈提前趋势,其中RCP4.5下出现最早,大部分站点出现在2048年之前,RCP8.5下出现最晚,大部分站点出现在2073年之前。东北三省气温预估结果分析表明:东北三省未来气温呈同步一致变化特征,随着情景增加,各省升温速率均呈上升趋势。

红景天多糖对藏猪精液4℃保存效果的研究

试验旨在研究红景天多糖对4℃藏猪精液品质和抗氧化保护作用影响,采用电刺激法采集健康藏猪精液,在改进的猪精液低温稀释液为基础液中,每1 000 m L添加红景天多糖0、3.0、5.0、7.0、9.0、11.0 g,将藏猪种公猪新鲜精液做4倍稀释后于4℃环境保存至第5天,以藏猪精子活力、精子畸形率、精子顶体完整率和质膜完整率为评价精液品质指标,以超氧化物歧化酶(Superoxidas dismutase,SOD)活力和丙二醛(Maleic dialdehyde,MDA)含量为评价抗氧化保护作用指标,探讨红景天多糖对4℃藏猪精液品质影响。结果显示:藏猪精液4℃保存到第5天时,9.0 mg/L红景天多糖添加组的精子活力、精子畸形率、精子顶体完整率和质膜完整率这4个指标均极显著好于其他组(P<0.01)。7.0 mg/L和11.0 mg/L添加组除精子活力差异显著外,其他指标差异不显著(P>0.05)。同时发现,9.0 mg/L红景天多糖添加组精子超氧化物歧化酶活力最高,5.0 mg/L、7.0 mg/L和11.0 mg/L组间无差异;精子MDA含量以9.0 mg/L红景天多糖添加组为最高,较7.0 mg/L和11.0 mg/L、5.0 mg/L、3.0 mg/L和对照组差异极显著(P<0.01),7.0 mg/L和11.0 mg/L添加组无差异。总之,在改进的猪精液稀释液中添加9.0 mg/L的红景天多糖可明显改善4℃环境保存藏猪精液品质和抗氧化保护作用,该试验研究为今后藏猪精液低温保存的生产应用奠定了基础。

4℃下不同放置时间对标本血凝四项检测结果的影响

目的观察4℃下不同的放置时间对标本凝血酶原时间（PT）、纤维蛋白原（FIB）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶时间（TT）血凝四项测定结果的影响，以评估标本保留时间对检验质量的影响。方法将111例血凝检测标本按照PT正常或者异常分成A、B两组。检测A、B两组标本即刻检测及放人4℃冰箱下1、2、3、4、5、6、7、8及24h的血凝四项的值。将1～8h，24h的血凝四项检测结果与即刻的检测结果进行分析。结果A组标本PT、APTT与TT在多次测量的时间点与即刻结果比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。B组标本PT在4～8h的时间点相对即刻结果差异有统计学意义（P〈0．05）；而FIB在A、B组各时间点上差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论在4℃条件下，PT正常的标本放置24h仍有临床参考价值，PT异常的标本放置时间不应超过6h，APTT标本放置时间不应超过4h，而TT检测标本宜在采血后1h内完成。

卷丹百合提取物对4℃有氧冷藏草鱼肉片中优势腐败菌的抑菌效果

首先采用传统的分离方法从4℃有氧冷藏草鱼去皮肉片货架期终点中分离出3株优势菌株,并对其进行鉴定。随后将这3株优势菌分别回接到4℃有氧冷藏草鱼肉片上,判断其致腐能力。最后,采用滤纸片法测定卷丹百合(Lilium lancifolium Thunb.)花叶、花蕾提取物对3株优势腐败菌的抑菌活性。结果表明,4℃有氧冷藏草鱼去皮肉片货架期终点优势腐败菌为腐败希瓦氏菌(Shewanella putrefaciens)、草莓假单胞菌(Pseudomonas fragi)和中间气单胞菌(Aeromonas media),其中腐败希瓦氏菌的致腐能力最强。抑菌实验表明,当加量为20μL时,卷丹百合花叶水提物对腐败希瓦氏菌的抑菌圈直径为32 mm,花蕾60%乙醇提取物对草莓假单胞菌和中间气单胞菌的抑菌圈直径分别达到10 mm和26 mm。因此,可以判断卷丹百合提取物对4℃有氧冷藏草鱼去皮肉片中货架期终点优势腐败菌具有抑菌效果。

普通冰箱4℃短期保存小鼠骨髓单个核细胞的研究

目的:建立小鼠骨髓单个核细胞短期保存简便有效的方法。方法:采用密度梯度离心法获得小鼠骨髓单个核细胞,DMEM培养液为小鼠骨髓单个核细胞冷藏营养液,直接置骨髓单个核细胞于4℃冰箱中保存,分别在当天至60 h选择性观察细胞形态,测其细胞回收率、活力及细胞周期。结果:小鼠骨髓单个核细胞置4℃冰箱保存2 d,活细胞率达80%以上;细胞回收率达70%以上;细胞周期与对照组相比无明显差别。结论:4℃冰箱能在2 d内保存小鼠骨髓单个核细胞,是一种简便易行的短期保存方法。

维生素E对4℃保存藏猪精液品质和抗氧化保护作用的影响

试验旨在研究维生素E对4℃藏猪精液品质和抗氧化保护作用影响,采用电刺激法采集健康藏猪精液,在改进的猪精液低温稀释液为基础液中,每1 000 m L添加维生素E 0、3.0、4.0、5.0、6.0 g,将藏猪种公猪新鲜精液做4倍稀释后于4℃环境保存至第5天,以藏猪精子活力、精子畸形率、精子顶体完整率和质膜完整率为评价精液品质指标,以超氧化物歧化酶(Superoxidas dismutase,SOD)活力和丙二醛(Maleic dialdehyde,MDA)含量为评价抗氧化保护作用指标,探讨维生素E对4℃藏猪精液品质影响。结果显示:维生素E 5.0 g/L添加组藏猪精子活力、精子畸形率、精子顶体完整率和质膜完整率均极显著好于其他试验组(P<0.01)。精浆超氧化物歧化酶活力和丙二醛含量以5.0 g/L维生素E添加组为最高;同时发现,5.0 g/L维生素E添加组精子超氧化物歧化酶活力与其他各组间差异不显著。总之,在改进的猪精液稀释液中添加5.0 g/L的维生素E可明显改善4℃环境保存藏猪精液品质和抗氧化保护作用,此试验研究为今后藏猪精液低温保存的生产应用奠定了基础。

半胱胺对4℃保存藏猪精液指标的影响

试验旨在研究半胱氨酸对4℃藏猪精液品质和抗氧化保护作用影响,采用电刺激法采集健康藏猪精液,在改进的猪精液低温稀释液为基础液中,每1 000 m L添加半胱氨酸0、0.02、0.04、0.06、0.08 g,将藏猪种公猪新鲜精液做4倍稀释后于4℃环境保存至第5天,以藏猪精子活力、精子畸形率、精子顶体完整率和质膜完整率为评价精液品质指标,以超氧化物歧化酶(Superoxidas dismutase,SOD)活力和丙二醛(Maleic dialdehyde,MDA)含量为评价抗氧化保护作用指标,探讨半胱氨酸对4℃藏猪精液品质影响。结果显示:半胱氨酸0.06 g/L添加组藏猪精子活力、精子畸形率、精子顶体完整率和质膜完整率均极显著好于其他试验组(P<0.01),0.06 g/L半胱氨酸添加组的精浆超氧化物歧化酶活力含量均显著好于其他试验组(P<0.05),0.08 g/L半胱氨酸添加组的精浆丙二醛含量均显著好于其他试验组(P<0.05);同时发现,0.08 g/L半胱氨酸添加组精子超氧化物歧化酶活力最高,各组间差异不显著,精子丙二醛含量0.06 g/L半胱氨酸含量最高。总之,在改进的猪精液稀释液中添加0.06 g/L半胱氨酸后将藏猪种公猪精液做4倍稀释,可明显改善4℃环境保存藏猪精液品质和抗氧化保护作用,该试验研究为今后藏猪精液低温保存的生产应用奠定了基础。

新鲜蒜液与4℃存放72小时蒜液对10种常见细菌体外抑菌效能的比较

目的探讨新鲜蒜液与4℃存放72 h蒜液对10种常见细菌体外抑菌效果。方法采用葡萄糖酚红肉汤递倍稀释法,分别测定新鲜蒜液与4℃存放72 h蒜液对10种常见细菌的最低抑菌浓度(MIC)。结果新鲜蒜液与4℃存放72 h蒜液对10种常见细菌的抑菌作用无显著差异。结论大蒜液可作为常温下的防腐剂和保鲜剂,用于食品的保鲜。

4℃高渗盐对心搏骤停大鼠S100蛋白及GFAP的影响

目的探讨4℃高渗盐对心搏骤停大鼠血清S100蛋白及脑海马组织胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的影响。方法将30只雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组(A组)、生理盐水复苏即刻给药组(B组)、4℃高渗盐复苏即刻给药组(C组)、4℃高渗盐自主循环恢复后30 min给药组(D组)、4℃高渗盐自主循环恢复后60 min给药组(E组),每组6只。制作窒息致大鼠心搏骤停模型,自主循环恢复后24 h采静脉血检测各组血清S100蛋白质量浓度,处死大鼠取脑组织检测海马组织GFAP的表达。结果血清S100蛋白质量浓度、脑海马组织GFAP阳性细胞数A组较各组均明显升高(P<0.01或P<0.05),C、D、E组较B组升高(P<0.05),C、D、E组组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论心搏骤停后复苏即刻、自主循环恢复后30 min和60 min给予4℃高渗盐能降低血清S100蛋白质量浓度,抑制脑海马组织GFAP表达,且作用无差别。