猪源和犬源ELF4蛋白的亚细胞定位比较研究

本研究旨在对比分析猪E74样因子4(sELF4)和犬E74样因子4(cELF4)的亚细胞定位,为深入开展二者功能研究提供依据。利用PCR截短扩增sELF4和cELF4,分别克隆至真核表达载体pEGFP-C1中,构建17个sELF4重组真核表达载体和13个cELF4重组真核表达质粒,转染HeLa细胞、Hoechst33342染色,荧光倒置显微镜观察亚细胞定位,运用生物信息学软件分析其编码氨基酸序列特征。结果表明,sELF4和cELF4蛋白全长均定位在细胞核中,sELF4 196~291 aa(586~873 bp)之间有可能存在两个细胞质核定位信号肽,cELF4的核定位信号肽分布在203~291 aa(607~873 bp),cELF4 292~663 aa(874~1 992 bp)、sELF4 292~662 aa(874~1 989 bp)在细胞中发生聚集现象。cELF4与sELF4氨基酸序列在第169~303位氨基酸之间均高度保守,其他区段均存在不同程度的差异。综上,sELF4蛋白全长和cELF4蛋白全长均定位在细胞核中,截短表达的羧基端功能区有聚集现象,二者的核定位信号肽分布有一定差异。

免疫共沉淀联合质谱技术筛选蓝舌病病毒NS4蛋白的互作蛋白

[目的]筛选蓝舌病病毒(Bluetongue virus, BTV)NS4蛋白颉颃干扰素(interferon, IFN)信号通路的内源性互作蛋白,以便进一步研究NS4抑制IFN信号转导的作用机制。[方法]在前期仙台病毒(Sendai virus, SeV)诱导IFN信号通路基因表达研究基础上,利用免疫共沉淀方法从转染NS4融合eGFP标签表达载体pcDNA3.1-NS4-eGFP和pcDNA3.1-eGFP空载体的HEK-293T细胞中钓取NS4互作蛋白,对免疫沉淀物进行SDS-PAGE分析,免疫共沉淀洗脱液进行质谱鉴定及生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR检测候选蛋白的编码基因表达特征。[结果]通过免疫共沉淀及质谱鉴定分析和数据库比对,共获得189个差异表达蛋白。生物信息学分析结果显示,候选蛋白主要参与蛋白转录、翻译、病毒感染及免疫调控。亚细胞定位分析结果显示,差异表达蛋白主要定位于细胞核、细胞质以及胞质-胞核,筛选出4个与BTV NS4蛋白存在互作的候选蛋白:多聚嘧啶束结合蛋白1(PTBP1)、细胞周期依赖性蛋白激酶9(CDK9)、N-端豆蔻酰化酶1(NMT1)和Y盒结合蛋白1(YBX1)。实时荧光定量PCR结果显示,与对照组相比,SeV刺激72 h后,试验组PTBP1、NMT1、YBX1、CDK9基因mRNA表达量均显著或极显著上调(P<0.05;P<0.01)。[结论]BTV NS4蛋白颉颃IFN信号通路与PTBP1、NMT1、YBX1、CDK9蛋白表达上调有关,本试验结果为进一步研究BTV NS4蛋白颉颃宿主天然免疫应答的分子机制提供靶标参考。

木薯花叶病毒AC4蛋白与AtPARN互作研究

木薯(Manihot esculenta Crantz)作为重要的热带作物,是全球六大粮食作物之一,并为全球近七亿人口提供主粮,然而病毒侵染引起的病害在全球范围内严重威胁木薯产业的发展。木薯花叶病毒病(cassava mosaic disease,CMD)是最有威胁的病害之一,造成严重的经济损失。斯里兰卡木薯花叶病毒(SriLankancassavamosaicvirus,SLCMV)是引发木薯花叶病的病原物之一,SLCMV是典型的双组分双生病毒,其基因组由DNA-A和DNA-B两个环状组分组成。无义介导的mRNA降解(nonsense-mediatedmRNAdecay,NMD)是真核细胞mRNA降解的主要途径之一,也是真核生物普遍存在的抗病毒防御机制。越来越多的研究显示,NMD不仅是真核生物重要的mRNA数量、质量调控机制,还与转录后基因沉默(post transcriptional gene silencing,PTGS)同样能降解病毒RNA,是真核生物普遍存在的抗病毒防御机制。NMD的mRNA衰减过程包括PTC的识别、脱腺苷酸、脱帽和最后的核酸外切酶降解4个过程,UPF1、PARN、DCP2和XRN4分别是上述4个过程中的关键蛋白。病毒是专性寄生生物,必须逃避或耐受寄主细胞的降解,才能成功感染。聚腺苷酸特异性核糖核酸酶[poly(A)-specific ribonuclease,PARN]是NMD信号通路的一个关键因子。目前,关于SLCMV抵御寄主NMD的分子机制尚不明确。本研究采用酵母双杂交(yeast two-hybrid system)和荧光双分子互补(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)试验证明斯里兰卡木薯花叶病毒(SLCMV)编码的沉默抑制子AC4与拟南芥PARN相互作用。据此推测SLCMV AC4蛋白可能通过与AtPARN相互作用而抑制寄主NMD的病毒防御功能帮助病毒逃避或耐受寄主细胞的降解。研究结果为阐明木薯花叶病毒调控寄主NMD抗病毒防御功能的分子机理奠定基础。

动脉灌注化疗联合细胞因子诱导杀伤细胞治疗晚期卵巢癌疗效及对患者血清癌胚抗原、糖类抗原125、可溶性B7-H4蛋白水平的影响

目的:探讨卵巢癌动脉灌注化疗联合细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)治疗晚期卵巢癌疗效及对患者血清癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)、可溶性B7-H4蛋白(sB7-H4)水平的影响。方法:选择103例晚期卵巢癌患者,随机分为两组,对照组(n=52)行动脉灌注化疗,观察组(n=51)行动脉灌注化疗联合CIK治疗。评价两组患者治疗效果,比较治疗前后卵巢血流参数指标搏动指数(PI)、阻力指数(RI)、收缩期峰值流速(PSV)变化及血清癌胚抗原CEA、CA125、sB7-H4水平变化,随访3年,记录两组患者3年生存率。结果:观察组总有效率88.23%高于对照组的61.54%(P<0.05)。治疗后观察组PI、RI值较对照组升高,RSV值较对照组降低(均P<0.05)。治疗后观察组血清CEA、CA125、sB7-H4水平低于对照组(均P<0.05)。观察组3年生存率为78.43%高于对照组3年生存率为57.69%(P<0.05)。结论:卵巢癌患者行髂内动脉灌注化疗联合CIK治疗是一种安全、有效的治疗手段,但对于化疗中药物的使用及剂量大小仍需进一步研究,以确定选择最优药物和制定最佳治疗方案。

PRRSV GP4蛋白的原核表达及单克隆抗体的制备

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)给养猪业带来巨大经济损失,尽快建立该病毒的快速诊断方法尤为重要。PRRSV ORF4基因编码的结构蛋白GP4为病毒感染所必须。本研究为制备GP4单克隆抗体,选取ORF4优势序列优化合成,连入pET-32a原核表达载体,构建重组质粒pET-32a-ORF4;经双酶切验证后,转化至BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达并纯化;经SDS-PAGE及Westernblot鉴定成功后免疫小鼠,制备筛选单克隆抗体,对制备的单克隆抗体进行验证。结果表明,GP4蛋白以可溶形式表达,大小为30 kDa;纯化蛋白免疫小鼠后,共筛选4株IgG亚型阳性杂交瘤细胞株;所制备单克隆抗体可与抗原特异性结合。本研究为PRRSV诊断方法的建立及后续研究奠定了基础。

嗜吞噬细胞无浆体MSP4蛋白的原核表达及其多克隆抗体制备

【目的】利用原核表达系统表达嗜吞噬细胞无浆体(Anaplasma phagocytophilum,AP)MSP4蛋白,并制备抗MSP4蛋白的多克隆抗体,为嗜吞噬细胞无浆体检测方法的建立提供试验材料和理论依据。【方法】根据GenBank公布的MSP 4基因优化并合成MSP 4基因,将其插入pET-30a载体,构建pET-30a-MSP4重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,对影响表达效果的因素(温度和IPTG)进行优化,选择最佳诱导表达条件,经SDS-PAGE分析蛋白表达情况,重组蛋白经Ni-IDA亲和层析纯化,并进行SDS-PAGE和Western blotting鉴定。用纯化后的重组蛋白MSP4免疫新西兰大白兔制备兔源多克隆抗体,利用间接ELISA和Western blotting检测多克隆抗体效价及特异性。【结果】本研究成功构建pET-30a-MSP4重组质粒,在37℃、0.8 mmol/L IPTG诱导条件下蛋白表达量较高,表达的重组蛋白分子质量约为28 ku,以包涵体形式存在。Western blotting鉴定结果显示,其免疫原性较好。获得的多克隆抗体效价分别为1∶64000(家兔1)和1∶128000(家兔2),且能与表达的重组蛋白MSP4发生特异性反应,具有较好的免疫原性。【结论】本研究成功表达纯化了嗜吞噬细胞无浆体MSP4蛋白,并制备了其多克隆抗体,可为嗜吞噬细胞无浆体抗原抗体检测方法的建立及疫苗效果评估提供参考,也为MSP4蛋白功能研究奠定基础。

结膜黑色素瘤组织中S100A4蛋白表达及其预后预测价值

目的探究结膜黑色素瘤组织中S100A4蛋白表达及其预后预测价值。方法选取2021年1月至2023年1月于灵宝市福寿堂眼科医院、郑州大学第一附属医院接受手术治疗的56例结膜黑色素瘤患者为研究对象。采用免疫组化法S-P法检测S100A4蛋白在结膜黑色素瘤组织中的表达,根据检测结果将入组患者分为S100A4蛋白高表达组(n=35)和S100A4蛋白低表达组(n=21),比较S100A4表达与总生存时间的关系。依据结膜黑色素瘤患者的预后情况将入组患者分为预后良好组(n=18)、预后不良组(n=38),分析可能影响结膜黑色素瘤患者预后不良的危险因素,根据危险因素构建Logistic回归预测模型,采用受试者工作特征曲线评估该预测模型效能。结果结膜黑色素瘤患者中位总生存时间为10个月,术后1 a存活率为80.36%(45/56)。S100A4蛋白高表达组患者中位生存时间、术后1 a生存率(9个月,74.58%)均低于S100A4蛋白低表达组(10个月,90.47%;Log-rankχ^(2)=3.485,P=0.001)。预后不良组患者肿瘤低分化、淋巴结转移、S100A4蛋白高表达比例分别为68.42%、73.68%、71.05%,均高于预后良好组的22.22%、27.78%、22.22%(χ^(2)=10.481,P=0.001;χ^(2)=10.635,P=0.001;χ^(2)=11.785,P=0.001)。多因素Logistic回归分析结果显示,肿瘤低分化(OR=2.042,95%CI:1.350~2.734)、淋巴结转移(OR=1.876,95%CI:1.225~2.526)、S100A4蛋白高表达(OR=1.828,95%CI:1.354~2.301)是影响黑色素瘤患者预后的危险因素。S100A4蛋白表达Logistic回归预测模型预测结膜黑色素瘤患者预后的敏感性、准确性、阳性预测值、曲线下面积分别为92.16%、90.02%、89.34%、0.914。结论肿瘤低分化、淋巴结转移、S100A4蛋白高表达是影响结膜黑色素瘤患者预后不良的危险因素,基于上述因素构建的模型预测结膜黑色素瘤患者预后不良的效能良好。

HepG2细胞Six4蛋白表达对细胞增殖、迁移和上皮-间充质转化的影响

目的体外观察敲除HepG2细胞Six同源盒蛋白4(Six4)对细胞增殖、迁移和上皮-间充质转化的影响。方法采用Six4慢病毒shRNA感染HepG2细胞,筛选基因敲除细胞和正常对照细胞,采用CCK-8和5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶核苷(EDU)染色检测细胞增殖,采用Transwell小室实验检测细胞迁移,采用Western blot法检测蛋白表达。结果基因敲除细胞吸光度、EdU染色阳性率和侵袭细胞数分别为(1.19±0.22)、(31.63±7.43)%和(65.71±10.02)个,均显著低于正常对照细胞【分别为(2.18±0.30)、(76.51±8.84)%和(120.14±11.85)个,P<0.05】;基因敲除细胞E-cadherin表达显著强于,而N-cadherin、Vimentin和Six4蛋白表达显著弱于正常对照组细胞,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论HepG2细胞SIX4对细胞活力和上皮-间充质转化有重要影响,可能成为潜在的治疗靶点需要进一步研究。

Fc受体样4蛋白在唾液腺黏膜相关淋巴组织淋巴瘤表达临床研究

目的 探讨Fc受体样4(FCRL4)蛋白在唾液腺黏膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤中的临床表达。方法 选取36例唾液腺MALT淋巴瘤标本为实验组,选取17例小唾液腺BLEL、40例大唾液腺BLEL及21例弥漫性大B细胞淋巴瘤标本为参照组。观察各组FCRL4蛋白的表达情况以及实验组中FCRL4蛋白阳性表达患者情况。结果 实验组中FCRL4的表达率显著高于其他参照组,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组FCRL4阳性表达患者中,年龄≥50岁占67.6%(23/34),极少数见于未成年人;发病部位腮腺占73.5%(25/34),其他部位占26.5%(9/34);29.4%(10/34)的患者确诊时患有Sjogren综合症;Lugano分期IE期的患者占82.4%(28/34)。术后41.2%(14/34)的患者行放化疗。结论 FCRL4蛋白在唾液腺MALT淋巴瘤中呈高表达,可以作为辅助诊断唾液腺MALT淋巴瘤的指标之一。

再生基因4蛋白、特异性蛋白1在卵巢癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨再生基因4(REG4)蛋白、特异性蛋白1(SP1)在卵巢癌组织中的表达及临床意义。方法:选取2019年7月~2022年7月期间收治的卵巢癌(OC)患者60例,术后提取卵巢癌变组织和癌旁组织。采用免疫组织化学染色法检测REG4和SP1蛋白的表达情况,对比卵巢癌变组织和癌旁组织中REG4蛋白和SP1蛋白阳性情况,分析REG4蛋白和SP1蛋白在卵巢癌组织中表达与临床病理参数的相关性。结果:卵巢癌变组织REG4蛋白、SP1蛋白的阳性表达率为86.67%、71.67%高于癌旁正常组织的31.67%、16.67%(P<0.05)。不同年龄的OC患者的REG4和SP1阳性表达率无明显差异(P>0.05);病理分类中REG4阳性表达率从高到低依次为浆液性腺癌、子宫内膜样腺癌、粘液性腺癌、透明细胞癌(P<0.05),SP1阳性表达率从高到低依次为浆液性腺癌、粘液性腺癌、子宫内膜样腺癌、透明细胞癌(P<0.05);FIGOⅢ-Ⅳ期患者REG4和SP1阳性表达率高于FIGOⅠ-Ⅱ期患者阳性表达率(P<0.05);分化程度中REG4和SP1阳性表达率从高到低依次为低分化、中分化、高分化(P<0.05);淋巴转移患者REG4和SP1阳性表达率高于未淋巴转移患者阳性表达率(P<0.05)。结论:OC肿瘤组织中的REG4蛋白、SP1蛋白的阳性表达率均高于正常卵巢组织,并与病理分类、FIGO分期、分化程度、淋巴转移密切相关,对于OC的临床诊断及预后改善具有重要意义。

胃癌组织TRAF4和RSK4蛋白表达与腹腔镜根治术后复发的关系

目的探讨胃癌组织TRAF4、RSK4蛋白表达与腹腔镜胃癌根治术后复发的关系。方法将176例患者分为复发组和未复发组,对比癌组织与癌旁组织、复发组与未复发组胃癌组织中TRAF4和RSK4蛋白表达。分析复发的影响因素及二者预测复发的效能。结果胃癌组织中TRAF4蛋白阳性表达率高于癌旁组织(P<0.05),且复发组高于未复发组(P<0.05);胃癌组织RSK4蛋白阳性表达率低于癌旁组织(P<0.05),且复发组低于未复发组(P<0.05);最大肿瘤直径>5 cm、低分化、TNMⅢ期、浸润深度T3~T4、淋巴结转移、术后未辅助化疗、TRAF4和RSK4蛋白阳性表达、规律饮食均是术后复发的影响因素(均P<0.05);胃癌组织TRAF4、RSK4蛋白联合预测复发的准确度为83.52%。结论胃癌组织TRAF4蛋白高表达、RSK4蛋白低表达,且均与复发有关。

PAK4与P54蛋白在乳腺癌中的表达及临床意义

目的:研究p21-activated kinase(pAK)-4和P54蛋白在乳腺癌中的表达和相互作用。方法:选择乳腺癌癌旁正常组织、乳腺纤维瘤、乳腺癌和乳腺癌转移瘤组织各20例,用免疫组织化学S-P法检测pAK-4表达,比较其与不同病理特征的关系。用免疫荧光法体外观察P54亚细胞定位及与PAK4的共定位情况。结果:乳腺癌癌旁正常组织、乳腺纤维瘤、乳腺癌转移瘤组织和乳腺癌中PAK4表达阳性率逐渐增加,阳性产物主要位于胞浆,尤以核周明显,细胞基质未见明显染色,差异有统计学意义(P<0.05)。非浸润性癌、早期浸润癌、晚期浸润癌中PAK4表达阳性率逐渐增加,差异有统计学意义(P<0.05)。通过共聚焦实验证实P54定位在细胞浆,且和PAK4有共定位。结论:PAK4和P54蛋白可能作为诊断和治疗乳腺癌的重要敏感分子标志物。

猪SPACA4蛋白的原核表达与多克隆抗体的制备

本研究旨在制备公猪精子顶体蛋白4(Sperm Acrosome Associated 4,SPACA4)的多克隆抗体(Polyclonal antibody,PAb),以期为揭示猪SPACA4蛋白参与精子受精过程的分子机制提供试验材料。从GeneBank上选取公猪SPACA4基因序列(登录号:NM_001177929.1)编码区,去掉信号肽与终止子,克隆至pET-SUMO表达载体并转化E.coli Rosstta(DE3)感受态细胞,经1 mol/L IPTG诱导表达及亲和层析纯化后获得重组SPACA4蛋白。将重组蛋白免疫小鼠制备SPACA4 PAb,使用间接ELISA检测抗体效价,并利用WesternBlot法验证SPACA4PAb对公猪精子天然蛋白的特异性。重组质粒pET-SUMO-SPACA4能被IPTG诱导表达,主要以包涵体形式存在,SUMO-SPACA4重组蛋白相对分子质量约为25 KDa,鼠源SPACA4PAb能特异性结合重组蛋白,最高效价为1:2048000。经WesternBlot法检测,SPACA4PAb能识别天然SPACA4蛋白。本研究利用原核表达系统成功制备出效价高、特异性好的公猪SPACA4PAb,并能应用于识别天然SPACA4蛋白,为SPACA4基因的功能和应用研究提供素材。

四君子汤对胃癌肿瘤干细胞标志物活性及TFAP4蛋白的作用机制

目的 探讨四君子汤对胃癌肿瘤干细胞标志物活性及转录因子激活增强子结合蛋白(TFAP)4蛋白的作用机制。方法 SGC-7901干细胞分为A组(SGC-7901干细胞)、B组(SGC-7901干细胞在75μl 2.5%大鼠四君子汤含药血清中培养)、C组(SGC-7901干细胞在75μl 5%大鼠四君子汤含药血清中培养)、D组(SGC-7901干细胞在75μl 7.5%大鼠四君子汤含药血清中培养)及E组(SGC-7901干细胞+含有1 mg/ml的5-氟尿嘧啶培养基中培养)。采用倒置显微镜观察SGC-7901干细胞形态;比较SGC-7901细胞及SGC-7901干细胞及集落形成能力;CCK-8检测各组细胞活性;流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;Western印迹检测各组干细胞标志物CD44及CD133蛋白,B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)、Bcl-2及TFAP4蛋白。结果 SGC-7901干细胞随着生长周期的延长,球体逐渐增大,3 d时体积较小结构松散,4 d时细胞呈现椭圆形生长,5 d时细胞结构更致密,形态更加接近球形,且一个球体所包含细胞数目可达到数十个;SGC-7901及SGC-7901干细胞的细胞集落数组间比较存在显著差异(P<0.001);与A组相比,B、C、D及E组24、48、72及96 h时SGC-7901干细胞活性均显著降低(P均<0.05),与B组相比,C、D、E组上述时间细胞活性显著降低(P<0.05),与C组相比,D、E组上述时间细胞活性显著降低(P<0.05),组间比较存在统计学差异(F=112.900,P<0.001);与A组比较,B组、C组、D组及E组干细胞凋亡率、Bax显著增加,CD44、CD133、Bcl-2及TFAP4显著降低(P<0.05)。与B组相比,C、D、E组干细胞凋亡率、Bax显著增加,CD44、CD133、Bcl-2及TFAP4降低(P<0.05),与C组相比D、E组有显著意义(P<0.05)。D组与E组上述指标无统计学意义(P>0.05)。结论 四君子汤含药血清可以显著抑制胃癌肿瘤干细胞标志物活性,通过抑制Bcl-2表达激活Bax加快胃癌干细胞凋亡,研究机制可能与抑制TFAP4活性相关。

胃癌组织MutL同系物1、羧基张力蛋白、跨膜丝氨酸蛋白酶4蛋白表达与患者临床病理特征、上皮间质转化及术后3年预后的关系

目的:探讨胃癌组织MutL同系物1(MLH1)、羧基张力蛋白(CTEN)、跨膜丝氨酸蛋白酶4(TMPRSS4)蛋白表达与患者临床病理特征、上皮间质转化(EMT)及术后3年预后的关系。方法:选择胃癌患者62例,取手术切除的癌组织及癌旁组织,行免疫组织化学法检测MLH1、CTEN、TMPRSS4蛋白表达,分析临床病理特征、EMT标志物和术后3年预后与蛋白表达的相关性。结果:胃癌组织CTEN、TMPRSS4蛋白阳性表达率高于癌旁组织,MLH1阳性表达率低于癌旁组织(均P<0.05)。胃癌组织上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)阳性表达率分别为37.09%、64.52%、75.80%,CTEN、TMPRSS4蛋白阳性表达与E-cadherin呈负相关,与Vimentin和N-cadherin表达呈正相关(均P<0.05);MLH1阳性表达与Vimentin、N-cadherin呈负相关,与E-cadherin呈正相关(均P<0.05)。胃癌组织MLH1、CTEN、TMPRSS4蛋白阳性表达与TNM分期有关(均P<0.05)。术后3年随访结果显示,62例患者中44例存活(存活组),18例病死(病死组),存活组MLH1阳性表达率高于病死组,CTEN、TMPRSS4阳性表达率低于病死组(均P<0.05)。结论:CTEN、TMPRSS4在胃癌中高表达,且与Vimentin和N-cadherin表达呈正相关,与E-cadherin表达呈负相关。MLH1在胃癌中低表达,与Vimentin、N-cadherin表达呈负相关,与E-cadherin表达呈正相关。三者均与TNM分期密切相关。胃癌患者中,MLH1阳性表达率较高者术后3年预后较好。

卵巢癌组织LGR4蛋白表达与临床病理特征、术后复发的关系研究

目的探究卵巢癌组织富含亮氨酸重复序列的G蛋白耦联受体4(LGR4)蛋白表达与临床病理特征、术后复发的关系。方法选取本院2020年8月~2022年1月份收治138例行手术治疗的卵巢癌患者,采用免疫组织化学法检测癌组织和切缘正常组织LGR4蛋白表达率并比较;比较不同临床病理特征患者癌组织LGR4蛋白阳性表达率;随访1年,统计患者复发率,比较复发与未复发患者癌组织LGR4蛋白表达率;采用Cox比例风险回归模型分析卵巢癌患者术后复发的的危险因素,Pearson双变量法分析LGR4蛋白表达与术后复发的相关性。结果卵巢癌患者癌组织LGR4蛋白阳性表达率高于切缘正常组织(P<0.05),且TNM分期Ⅲ期、未/低分化、最大肿瘤直径≥4 cm、有淋巴结转移患者癌组织LGR4蛋白阳性表达率分别高于TNM分期I~II期、中/高分化、最大肿瘤直径<4 cm、无淋巴结转移患者(P<0.05);随访结束时有45例患者复发,复发率为36.59%,未进行靶向治疗、手术效果未达到R0、放化疗不敏感、术中肿瘤破裂、卵巢癌组织LGR4蛋白阳性表达均为卵巢癌患者术后复发的危险因素(RR=4.437、3.961、5.524、4.711、6.476,P<0.05);卵巢癌患者术后复发与LGR4蛋白表达呈正相关(r=0.416,P<0.05),LGR4蛋白阳性表达患者复发率高于LGR4蛋白阴性表达患者(=19.295,P<0.001)。结论卵巢癌患者癌组织LGR4蛋白阳性表达率高于切缘正常组织,TNM分期Ⅲ期、未/低分化、有淋巴结转移及癌组织LGR4蛋白阳性表达均为卵巢癌术后复发的危险因素,且卵巢癌术后复发与LGR4蛋白表达呈正相关。

草鱼呼肠孤病毒HZ08株VP4蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

为了建立针对草鱼呼肠孤病毒(GCRV)流行株的血清学检测方法,实验构建了能高效表达GCRV HZ08株主要衣壳蛋白VP4的重组表达载体pET32a-S6,利用纯化的VP4重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合,经过克隆和筛选,获得3株能稳定分泌抗VP4重组蛋白单克隆抗体(monoclonal antibody,MAb)的杂交瘤细胞,分别命名为2C2、2F3和5E5。抗体经亚型鉴定均为IgG1,轻链为κ链;间接ELISA试验证明,3株杂交瘤细胞分泌的MAb可特异性识别GCRV-HZ08,与GSRV,ISKNV,IHNV均无交叉反应。选择2C2作为腹水生产细胞株,免疫小鼠后腹水ELISA效价为1∶720 000;IFA和Western-blotting结果显示,这株杂交瘤细胞分泌的MAb能够特异性识别GCRV-HZ08病毒粒子。本实验制备的MAb具有良好的生物学特性,为GCRV流行株血清学检测方法的建立及VP4蛋白相关功能研究奠定了基础。

牛膝多糖体外诱导人T细胞表达IFN-γ和IL-4蛋白的机制探讨

目的 :探讨牛膝多糖免疫调节作用的机制。方法 :使用牛膝多糖在不同浓度或在不同时间内对人T细胞进行体外诱导培养 ,用ELISA方法测定培养上清液的IFN γ及IL 4的蛋白表达情况。结果 :①人T细胞受不同浓度ABPS刺激时 ,IFN γ分泌水平随ABPS浓度递增 ,在 4 0 0 μg ml时 ,IFN γ表达量最高 (P <0 0 5 ) ,而IL 4的分泌始终处于低水平 (P >0 0 5 )。②人T细胞在ABPS刺激不同时间后 ,IFN γ分泌水平逐步增高 ,在 4 8小时时与其他各时间点比较 ,有非常显著的差异 (P <0 0 0 1) ,而IL 4的分泌始终处于低水平 (P >0 0 5 )。结论 :①ABPS能诱导人T细胞分泌IFN γ ,该作用呈时间、剂量依赖性变化 ,而抑制IL 4的分泌。②在蛋白表达水平上证实ABPS能够促进Th1类细胞因子的分泌 ,而抑制Th2类细胞因子的分泌。

SEPT4蛋白在特发性弱精子症患者精子中的表达

目的:探讨SEPT4蛋白在特发性弱精子症发生机制中的作用。方法:采用非连续密度梯度离心分离和纯化精子,免疫细胞化学技术检测SEPT4在特发性弱精子症患者和正常男性精子中的定位及表达变化,同时用RT-PCR和W estern印迹技术,从基因和蛋白水平检测SEPT4的表达及差异。结果:免疫细胞化学表明,SEPT4定位于精子环并且在特发性弱精子症患者精子中的表达显著低于正常男性(94.75±19.95vs111.51±17.57,t=3.452,P<0.01);RT-PCR显示,特发性弱精子症患者精子中SEPT4 mRNA的表达水平与正常男性相比显著降低(0.56±0.15vs0.71±0.16,t=3.521,P<0.05);W estern印迹结果与RT-PCR结果一致,SEPT4蛋白在特发性弱精子症患者精子中的表达亦显著低于正常男性(0.48±0.20vs0.77±0.18,t=5.872,P<0.05)。结论:SEPT4在特发性弱精子症患者精子中的表达水平显著降低,可能是导致弱精子症发生的原因之一。

鼻咽癌MKK4蛋白表达与-1044A/T多态性的相关性分析

目的:探讨鼻咽癌组织中MKK4蛋白的表达与-1044A/T多态性的相关性。方法:90例鼻咽癌患者,运用免疫组化法测定MKK4蛋白的表达,以聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法(PCR-RFLP)检测其基因-1044A/T位点单核苷酸多态性。结果:鼻咽癌组织中MKK4蛋白表达(-)为24.4%(22/90),(+)为15.6%(14/90),(++)为34.4%(31/90),(+++)为25.6%(23/90)。低表达(-/+)患者共36例,-1044AA基因型占22例(61.11%),AT基因型占12例(33.33%),TT基因型占2例(5.56%),AT+TT基因型共占14例(38.89%);高表达患者共54例,其中AA基因型占38例(70.37%),AT基因型占15例(27.78%),TT基因型占1例(1.85%),AT+TT基因型共占16例(29.63%)。低表达与高表达发生T基因变异无统计学意义(Z=0.323,P=0.747)。结论:MKK4蛋白表达的高低与-1044A/T启动子基因多态性无明显相关性。