W3D通过调控TLR4/MD2-NF-κB p65信号通路改善LPS诱导的小鼠急性肺损伤

目的研究4-(5′-二甲氨基)-萘磺酰氧基苯并噁唑酮(W3D)这一新型结构化合物对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的保护作用及其作用机制。方法ICR小鼠随机分为对照组、模型组、氯唑沙宗组(12.5 mg·kg^(-1))、W3D组(12.5、6.25和3.125 mg·kg^(-1)),气道滴入LPS造模。于造模4 h后给药,12 h后处死小鼠并取肺脏,计算肺湿干比(wwt/dw),HE染色观察肺组织病理变化,试剂盒检测MPO活性、iNOS和炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的水平,Western blot检测肺组织TLR4、MD2、p-IRAK4、p65蛋白的表达。结果W3D可显著改善小鼠肺水肿状态,降低肺组织湿干比;减少炎性细胞浸润,减轻血管损伤及局部出血等现象;可剂量依赖性抑制MPO活性,降低iNOS、IL-1β、IL-6、TNF-α的表达水平,抑制TLR4、MD2、p-IRAK4、p65蛋白的表达。结论化合物W3D可通过调控TLR4/MD2-NF-κB p65信号通路改善LPS诱导的小鼠急性肺损伤。

新型苯并噁唑酮衍生物W3D的含量测定及体内抗炎活性研究

目的建立全新结构化合物4-(5'-二甲氨基)-萘磺酰氧基苯并噁唑酮(W3D)的含量测定方法,并对其进行体内抗炎活性评价。方法采用Diamonsil C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-水(75∶25)为流动相,体积流量1.0 mL·min^(-1),检测波长257 nm,柱温28℃,测定W3D的峰面积,建立其含量测定方法;采用二甲苯致小鼠耳肿胀模型评价化合物W3D(25.000、12.500、6.250、3.125 mg·kg^(-1))体内抗炎活性。结果供试品主峰专属性良好,在1~100μg·mL^(-1)线性关系良好(R2=0.9999),精密度、重复性、稳定性的RSD分别为0.61%、0.19%、0.84%,回收率为99.55%(RSD=0.81%);与对照组比较,W3D各剂量组耳肿胀率均显著下降(P<0.05、0.01),12.5 mg·kg^(-1)组抑制率可达53.88%,优于阳性药塞来昔布。结论建立的HPLC法简便、准确,且专属性好,可用于W3D的含量检测;W3D具有较好的体内抗炎活性,作为新结构抗炎小分子化合物具有深入研究的价值。

W3D固体分散体的制备及其抗对乙酰氨基酚诱导的急性肝损伤的保护作用

目的 将4-(5’-二甲氨基)-萘磺酰氧基苯并噁唑酮(W3D)制成固体分散体,并研究其对对乙酰氨基酚(N-acetyl-para-aminophenol,APAP)诱导的急性肝损伤(acute liver injury,ALI)的保护作用。方法 采用溶剂法将原料药W3D及辅料PVP K30按1∶7反应得W3D固体分散体。采用差示扫描量热法(differential scanning calorimetry,DSC)和X-粉末射线衍射(X-ray diffraction,XRD)手段表征固体分散体的物相变化,同时对其饱和溶解度、溶出重现性进行考察。建立对乙酰氨基酚诱导的ALI模型,分别灌胃给予阳性药N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC,12.5 mg·kg^(-1))、W3D原料药(12.5 mg·kg^(-1))、W3D固体分散体(12.5,6.25和3.125 mg·kg^(-1)),24 h后处死小鼠,取出肝脏,计算肝脏指数;HE染色观察肝组织病理变化,微孔板法检测血清中ALT、AST的含量及肝组织中SOD活力、微量GSH含量,TBA法检测MDA的含量,ELISA法检测血清中TNF-α、IL-6的含量,免疫组化检测肝组织MD2蛋白的表达。结果 W3D固体分散体为无定形形态,10 min的溶出度即可达70%;W3D可降低APAP诱导的ALI小鼠肝脏指数,减少肝组织血管周围细胞胞核固缩、碎裂或溶解等现象,剂量依赖性地减少血清中ALT、AST、TNF-α、IL-6的含量,升高肝组织中GSH含量及SOD活力,降低MDA含量而呈现出优于临床用药NAC的肝保护活性;W3D亦可降低ALI小鼠肝组织中MD2蛋白的含量。结论 W3D固体分散体可通过抑制氧化应激和炎症而发挥抗APAP诱导的ALI作用,其作用机制可能与降低MD2蛋白表达有关。