4-甲基伞形酮类显色底物的合成及在微生物检测中的应用研究

以简单原料葡醛内酯,经过3步反应,对伞形酮类显色底物4-甲基-7-氧香豆素-β-D-葡萄糖苷酸进行了合成,目标产物中涉及的各步中间体,均通过核磁(^(1)H-NMR、^(13)C-NMR)等方法进行了分析表征,确定了合成工艺的可靠性。同时,通过病原微生物的荧光显色实验显示,4-甲基-7-氧香豆素-β-D-葡萄糖苷酸与大肠杆菌代谢酶结合反应后,显色效果较好,能够快速精准的检测出大肠杆菌。

应用4-甲基伞形酮-β-D-半乳糖苷快速检测食品中的大肠菌群

依据ISO 9308-1:2000有关大肠菌群具有产生β-半乳糖苷酶的特性,研制了4-甲基伞形酮-β-D半乳糖苷,并以此制成4-甲基伞形酮-β-D半乳糖苷肉汤(MUGal肉汤):将MUGal肉汤与SN0169指定的月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤对比检测13种标准菌株,所得结果完全一致;对比检验48份食物样品,本法检出大肠菌群的阳性率高出标准法47%。从上述标准法未检出而本法判定为阳性的样品培养液中,分离可疑菌,经乳糖发酵、氧化酶和硝酸盐还原试验以及API 20E鉴定,证明95．1%为大肠菌群。实验结果表明,用4-甲基伞形酮-β-D半乳糖苷肉汤检验食品中大肠菌群,快速、简便、准确、可靠,可作为一种任选的标准方法加以应用。

4-甲基伞形酮荧光猝灭法测定苦味酸

本文利用苦味酸对4-甲基伞形酮荧光的猝灭效应，提出了一种新的测定苦味酸的方法，线性范围为1×10－4～1×10－6mol／L，以3σ衡量，检出限为8×10－7mol／L，用于药品奎宁的间接测定和水样中苦味酸的直接测定，结果令人满意。

相转移催化法合成4-甲基伞形酮衍生物的研究

报道了用乙腈为溶剂,利用聚乙二醇-400为相转移催化剂合成了三种4-甲基伞形酮衍生物b、c、d,考察了诸因素对产率的影响,找出了最佳的反应条件。最佳的反应温度为65～70°C。产物b、c、d的产率分别为:91.1%,78.2%,62.3%。

4-甲基伞形酮对瘢痕疙瘩成纤维细胞的抗炎作用及机制研究

目的:探讨4-甲基伞形酮(4-methylumbelliferone,4MU)对瘢痕疙瘩成纤维细胞的作用及机制研究。方法:体外培养的原代瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFs)分别用浓度为0、0.2、0.4、0.8mM的4MU处理,采用CCK-8法和细胞划痕实验检测4MU对KFs细胞增殖和迁移能力的影响,通过ELISA、qPCR、免疫荧光染色和Western-bloting技术检测4MU对KFs炎症相关因子表达的影响。结果:4MU不仅抑制KFs细胞增殖迁移,而且可减少KFs对IL-6和IL-8的分泌,同时抑制HAS2和HAS3 mRNA的表达及α-SMA、TLR4、CD44、NF-κB1、P65蛋白的合成。结论:4MU可以抑制KFs增殖和迁移,并可通过抑制NF-κB通路相关基因的表达,减少KFs炎症因子分泌,因此,4MU有可能成为治疗瘢痕疙瘩的新药物。

4-甲基伞形酮衍生物的合成研究(II)

在乙腈溶剂中用聚乙二醇-400为相转移催化剂合成了8种4-甲基伞形酮衍生物,产率72%～89%.产物结构经IR、^1H NMR、^13C NMR及MS-EI进行表征.研究了影响反应的条件,温度为70～80℃,相转移催化剂为聚乙二醇-400,溶剂为乙腈.

大肠杆菌快速检测原料4-甲基伞形酮葡糖酸苷在食品检测中应用效果研究

比较自制的4-甲基伞形酮葡糖酸苷(MUG)与国际品牌的MUG在检测食品中大肠杆菌活菌数的应用效果,研究结果表明,利用自制的MUG与品牌的MUG检测食品中的大肠杆菌活菌数所得结果,对评价产品是否合格的具有相同效果,表明自制的MUG完全能够替代国际品牌的MUG应用于检测食品中的大肠杆菌活菌数。

大肠埃希氏菌平板计数法存在的技术性问题探讨

本文综述了大肠埃希氏菌结晶紫中性红胆盐-4-甲基伞形酮葡萄糖醛酸苷琼脂平板计数法的建立背景、原理、优缺点,以期对该方法有更全面深入的认识,在此基础上对该方法存在的技术性问题进行了探讨,并提出了改进策略,以期为方法修订提供参考,从而更准确地进行食品中大肠埃希氏菌的计数。

香豆素类荧光底物的合成及其在微生物检测中的应用进展

香豆素类荧光底物主要是由作为荧光团的羟基香豆素和7-氨基-4-甲基香豆素或者它们的取代物的各类衍生物,包括糖苷类、羧酸酯类、磷酸酯类、肽类等。本文介绍了这些底物的合成方法。荧光团一般通过Pechmann缩合法合成,然后再与乙酰溴代糖、酰氯、亚磷酸酯、叔丁氧基保护的氨基酸等缩合生成相应的荧光底物,像4-甲基伞形酮基-β-D-吡喃半乳糖苷、4-甲基伞形酮辛酸酯和L-丙氨酰-7-氨基-4-甲基伞形酮等。将荧光底物加入到培养基中,可以实现对微生物的快速检测。荧光底物应用于微生物检测的依据是特异性酶反应,不同的荧光底物对应的酶和所检测的微生物不同。当单一底物不能有效检测和鉴定目标微生物时,采用复合底物能明显提高检测效果。此外,本文还指出了现有荧光底物存在的缺点,并对未来发展进行了展望。

LED激发光源的荧光物质快速检测系统设计

针对食品和生化检测中常见的荧光物质4—甲基伞形酮(4-MU)的检测问题,提出了一种基于荧光分析法的荧光物质快速检测方法,并以LED作为激发光源,设计了便携式高灵敏度的荧光物质快速检测系统,并给出电路实现。对系统与多功能酶标仪进行了对比标定和测试,结果表明:所设计的系统线性度为0.997,检测误差小于1.5%,响应时间小于0.5 s,这对于食品和生化荧光物质检测设备的开发,具有一定的参考意义。

辛酸酯类化合物的合成

报道了新的快速检出沙门氏菌的底物辛酸酯类化合物的合成方法

慢性压迫性神经损伤大鼠中透明质酸合成变化及其在神经源性疼痛中的作用

慢性神经源性疼痛由于其发病机制尚不完全明确,目前还没有十分有效的治疗手段;神经损伤后炎症反应和免疫调节机制在疼痛的发生中发挥着重要作用,透明质酸(HA)近来被认为是炎症和免疫调节中一个重要的调节分子。为了进一步研究HA是否参与到神经损伤后的病理过程中,我们检测了慢性压迫性神经损伤(CC I)大鼠损伤神经的HA含量。结果显示:与正常神经比较,HA的含量在损伤后7 d明显增加,HA合成酶(HAS)的表达也明显上调。4-甲基伞形酮(4-MU)是HAS的一种抑制剂,我们通过给予4-MU抑制HA的合成,研究HA在慢性神经源性疼痛中的作用,发现给药组CC I大鼠损伤足对热痛刺激的敏感性低于未给药组,同时IL-1β的表达量低于未给药组。以上结果提示HA可能通过对炎症因子的调控参与到损伤后的疼痛机制中,这一结果将有助于慢性神经源性疼痛的治疗。

牛奶中三聚氰胺的检测研究

应用响应面分析法,对4-甲基伞形酮和三聚氰胺的显色条件进行了研究,并建立数学模型。结果表明:4-甲基伞形酮与三聚氰胺的配合物在紫外248nm处有峰值,显色时间为10min,确定了最佳显色条件:氨水添加量为0.5mL,4-甲基伞形酮的添加量为1mL,显色温度为60℃。绘制三聚氰胺标准曲线,建立了回归方程,其相关系数为0.9966。对牛奶中三聚氰胺检测的预处理方法进行了研究,并进行回收率试验,结果表明:该方法的准确度及精密度均良好。与传统方法相比,4-甲基伞形酮显色法更简便快速,低毒低成本,检测结果稳定可靠,可以满足现场快速检测的要求。

大肠菌群特异性检测荧光底物MUGal的合成及应用

4-甲基伞形酮基-β-D-吡喃半乳糖苷(MUGal)是食品安全中重要指示菌大肠菌群的特异性快速检测荧光底物。本文采用相转移催化方法使4-甲基伞形酮(4-MU)和四乙酰基-α-D-吡喃溴代半乳糖缩合生成保护的糖苷,再在碳酸钠的水/甲醇溶液中去保护生成4-甲基伞形酮基-β-D-吡喃半乳糖苷。通过对温度、时间和催化剂用量对糖苷化一步产率的研究发现,当温度为30℃,反应时间为16 h时,产率最高可达73.12%。醇解反应一步以碳酸钠为碱产率可达91.01%。在对产物进行IR和1HNMR结构表征后,进一步将产物应用于大肠菌群显色培养基,并和进口底物比较,其产荧光管数经X2检验无显著性差异(P>0.05),在实际样品检测中,采用GB4789.3-2010(48 h)和MUGal方法(24 h)的阳性检出率均为80%,MUGal方法的检出时间明显缩短。因此,本研究制备的荧光底物能和进口产品相媲美,可以作为进口底物的替代品。