小鼠4-细胞胚胎OPS法冷冻保存技术

在25℃室温和37℃恒温台条件下，利用玻璃化冷冻溶液EFS30、EFS40、EDFS30或EDFS40，对小鼠4-细胞胚胎进行玻璃化冷冻保存．以解冻后培养72h的囊胚发育率为其体外发育能力的考核指标，同时对解冻后培养1～3h的胚胎进行移植以判定其体内发育潜力。开放式拉长塑料细管（OPS）二步法冷冻保存，即胚胎首先移入预处理液（10％EG或10％EG＋10％DMSO）中平衡30s，再移入玻璃化溶液中洗涤后吸入OPS管中，分别经35、30或25s后直接投入液氮中冷冻保存。一步法冷冻保存则无需预处理液处理。结果表明，小鼠胚胎4-细胞一步法和二步法冷冻后囊胚最高发育率分别为87．7％和88.6％，与对照组（93.0％）差异不显著（P〉0．05）。利用最佳冷冻组获得的143枚胚胎移植于12只假妊娠50～60h的受体母鼠，结果有4只妊娠产仔17只，妊娠产仔率为42．5％（17／40），与对照组59．4％（19／32）差并不显著（P〉0.05）。

猪孤雌激活4-细胞胚胎玻璃化冷冻保存效果的研究

本实验旨在研究猪孤雌激活4-细胞胚胎的冷冻保存效果。胚胎采用Cryotop法进行玻璃化冷冻保存,解冻后分析其存活率、胞内活性氧(ROS)和谷胱甘肽(GSH)水平、囊胚发育率及囊胚质量。结果表明:冷冻胚胎体外恢复2 h的存活率与新鲜胚胎无明显差异(100%vs.96.8%,P>0.05),但当其培养时间达到24 h时,存活率显著下降至88.3%(P<0.05)。另外,玻璃化冷冻导致胚胎内ROS水平显著升高(P<0.05),GSH水平显著下降(P<0.05)。与新鲜胚胎相比,冷冻胚胎获得的囊胚发育率明显降低(59.8%vs.26.4%,P<0.05),但囊胚的凋亡细胞率、内细胞团数、滋养层细胞数及总细胞数均无明显差异(P>0.05)。结果显示,玻璃化冷冻猪孤雌激活4-细胞胚胎导致其存活、氧化还原能力和囊胚发育下降,但仍能获得较高质量的囊胚。

4-细胞胚胎卵裂球全能性的体外实验研究

目的 对体外培养的 4 细胞人类胚胎卵裂球发育及分化情况进行观察和研究。方法 采用控制性促超排卵获取人类卵子 ,体外受精获得早期胚胎 ,待发育到 4 细胞阶段时将透明带去除 ,分散成为单个卵裂球进行培养 ,观察卵裂球发育及分化的情况。结果 2 0个 4 细胞、2个 3 细胞人类早期胚胎分散后获得单个卵裂球 83个 ,经体外培养后有 35个发育成为扩张囊胚。结论 4

阶段性胚胎抗原-1,OCT-4,颗粒酶B在脂肪成体干细胞中的表达

目的:探索脂肪成体干细胞中是否表达胚胎时期标志蛋白SSEA-1,OCT-4,GRB.方法:先将C57小鼠脂肪用I型胶原酶消化,然后采用直接贴壁法,培养获得的细胞.取第3代生长状态稳定、形态均一的细胞进行成脂、成骨诱导分化,同时观察所培养的第3代细胞表达胚胎时期标志蛋白SSEA-1,OCT-4,GRB的情况.结果:通过该培养方法,可以获得稳定的细胞群体,并能成功进行成骨、成脂诱导分化;免疫荧光化学检测显示三种胚胎时期出现的特殊蛋白均有不同程度的表达.结论:脂肪来源的成体干细胞中表达胚胎时期的产物,这种特性可能与干细胞的多向分化特性有关系.