HPLC-MSn法检测毛白杨CCR酶活及反应产物4-羟基肉桂醛类的制备

为更直观、便捷地研究木质素合成途径中CCR的酶学特性,从产物生成的方向来监测CCR的酶学特性。试题采取化学合成方法制备CCR的产物——4-羟基肉桂醛物质(香豆醛、松柏醛、咖啡醛)并利用HPLC进行纯化,液相色谱质谱联用仪(HPLC-MSn)进行鉴定,合成的4-羟基肉桂醛可作为HPLC-MSn技术研究CCR酶学特性时的标样。建立了一套HPLC-MSn技术检测CCR酶活的新方法,将毛白杨重组CCR蛋白在大肠杆菌中高效表达并利用亲和层析法获得电泳纯CCR蛋白,利用HPLC-MSn技术监测CCR酶对4种底物的酶学特性。结果显示,通过该方法能够监测到CCR底物的减少和产物的增加过程,为木质素合成途径中关键酶的酶学活性研究提供新方法。