血浆MIP-1α、FIB、LTB4联合检测预测ICU大量输血患者预后的价值

目的探讨血浆纤维蛋白原(FIB)、趋化因子巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)、白三烯B4(LTB4)联合检测对重症监护室(ICU)大量输血患者预后的预测价值。方法回顾性分析2022年1月至2024年1月驻马店市中心医院收治的141例ICU大量输血患者的临床资料,根据3个月预后分为预后不良组(n=46)和预后良好组(n=95)。比较两组患者的一般资料和血浆MIP-1α、FIB、LTB4表达水平,采用Pearson相关系数分析血浆各指标与急性生理与慢性健康状况Ⅱ(APACHEⅡ)评分、创伤严重度评分(ISS)评分的相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线及曲线下面积(AUC)分析血浆各指标预测ICU大量输血患者预后的效能,Delong检验AUC大小,相对危险度(RR)分析不同血浆MIP-1α、FIB、LTB4表达水平患者的预后情况。结果预后不良组患者的APACHEⅡ评分和ISS评分分别为(19.18±1.56)分、(18.20±1.33)分,明显高于预后良好组的(15.52±1.30)分、(15.11±1.24)分,差异均有统计学意义(P<0.05);预后不良组患者的MIP-1α、LTB4分别为(90.94±18.18)pg/mL、(22.24±6.68)pg/mL,明显高于预后良好组的(75.52±13.21)pg/mL、(15.26±4.58)pg/mL,FIB为(1.40±0.42)g/L,明显低于预后良好组的(1.85±0.55)g/L,差异均有统计学意义(P<0.05);Pearson相关系数分析结果显示,预后不良组患者的MIP-1α、LTB4表达水平与APACHEⅡ、ISS评分呈正相关(r=0.602、0.598、0.623、0.617,P<0.05),FIB表达水平与APACHEⅡ、ISS评分呈负相关(r=-0.576、-0.605,P<0.05);ROC曲线分析结果显示,MIP-1α、FIB、LTB4联合检测预测ICU大量输血患者预后不良的价值优于MIP-1α、FIB、LTB4单一预测(P<0.05);RR分析结果显示,MIP-1α、LTB4高值患者预后不良发生率是低值的3.166、5.385倍,FIB低值患者预后不良发生率是高值的4.188倍。结论血浆MIP-1α、FIB、LTB4异常表达与ICU大量输血患者病情程度、预后密切相关,且MIP-1α、FIB、LTB4联合检测可用于辅助预测ICU大量输血患者预后不良。

尿液高迁移率族蛋白B1、胰岛素样生长因子结合蛋白-7在原发性IgA肾病表达及与病情严重程度和预后的关系

目的分析原发性免疫球蛋白A(IgA)肾病病人尿高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、胰岛素样生长因子结合蛋白-7(IGFBP7)表达及其与病情严重程度和预后的关系。方法选取2018年1月至2020年12月在恩施土家族苗族自治州中心医院诊治的原发性IgA肾病病人104例作为研究对象,根据疾病严重程度分为轻度组(33例)、中度组(44例)和重度组(27例)。对病人进行预后随访,分为预后良好组(78例)和预后不良组(26例)。采用Pearson和Spearman法分别分析尿HMGB1、IGFBP7水平以及二者与血肌酐、24 h尿蛋白定量和病情严重程度、预后不良的相关性;采用logistic回归分析重度原发性IgA肾病以及原发性IgA肾病病人预后不良的影响因素;采用受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析尿HMGB1、IGFBP7对重度原发性IgA肾病以及原发性IgA肾病病人预后不良的评估价值。结果轻度、中度和重度组血肌酐、24 h尿蛋白定量、C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)和白细胞计数(WBC)、尿HMGB1[(6.72±1.02)μg/L、(9.61±2.17)μg/L、(12.51±3.14)μg/L]、IGFBP7[(2.25±0.58)μg/L、(5.32±1.26)μg/L、(15.72±3.65)μg/L]水平依次显著增加。预后不良组尿HMGB1[(14.92±4.45)μg/L比(7.62±1.26)μg/L]、IGFBP7[(18.73±3.57)μg/L比(3.15±1.03)μg/L]水平显著高于预后良好组(P<0.05)。根据相关性分析得知,尿HMGB1、IGFBP7水平呈正相关(P<0.05),二者均与血肌酐、24 h尿蛋白定量、CRP、PCT和WBC、疾病严重程度和预后不良呈正相关(P<0.05)。根据logistic回归分析得知,HMGB1、IGFBP7是影响重度原发性IgA肾病的危险因素(P<0.05),HMGB1、IGFBP7也是原发性IgA肾病病人预后不良的危险因素(P<0.05)。根据ROC曲线得知,尿HMGB1、IGFBP7二者联合优于各自单独诊断重度原发性IgA肾病(Z_(联合比HMGB1)=2.41、Z_(联合比IGFBP7)=2.32,均P<0.05)。尿HMGB1、IGFBP7二者联合优于各自单独预测原发性IgA肾病病人预后不良(Z_(联合比HMGB1)=2.33、Z_(联合比IGFBP7)=2.12,均P<0.05)。结论原发性IgA肾病病人尿HMGB1、IGFBP7表达水平显著升高,二者与病情严重程度和预后密切相关,二者联合可以更好地评估病人病情严重程度和预后。

4′,5-二羟基-7-哌嗪甲氧基-8-甲氧基黄酮通过Bclaf1诱导肝癌细胞线粒体凋亡的作用机制研究

目的探讨4′,5-二羟基-7-哌嗪甲氧基-8-甲氧基黄酮(4′,5-dihydroxy-7-piperazine methoxy-8-methoxy flavone,DMF)通过Bclaf1诱导肝癌细胞线粒体凋亡的作用机制。方法利用CCK-8法检测DMF对人肝癌细胞增殖的影响;Annexin-V/FITC双染流式细胞仪检测DMF作用后人肝癌细胞凋亡率的变化;JC-1荧光探针探究DMF对肝癌细胞线粒体膜电位的作用;免疫荧光检测DMF对人肝癌细胞中Bclaf1表达情况和定位;CRISPR-Cas9技术敲除Bclaf1基因;Western blot检测DMF作用后人肝癌细胞线粒体凋亡相关蛋白的表达以及Bclaf1表达情况。结果DMF对人肝癌细胞的增殖有抑制作用,并具有浓度-时间依赖性,DMF作用后肝癌细胞凋亡率增加,线粒体膜电位下降,线粒体凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax比值降低,Cleaved caspase 3、Cyt-c表达量增多。Bclaf1主要定位于细胞核内,在细胞质中有少量分布;DMF作用后Bclaf1的表达量降低,将Bclaf1敲除后,与空白对照组比较,DMF+sgRNA组线粒体凋亡现象明显,Bcl-2/Bax比值更低。结论DMF抑制Bclaf1的表达,诱导肝癌细胞线粒体凋亡。

HMGB1基因敲除通过抑制TLR4/NF-κB通路减轻脓毒症小鼠急性肺损伤

目的 研究高迁移率族蛋白B1(HMGB1)基因敲除减轻脓毒症小鼠急性肺损伤及抑制Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)通路的作用。方法 野生型(WT)小鼠分为WT-Sham组和WT-模型组,HMGB1基因敲除(KO)小鼠分为KO-Sham组和KO-模型组。WT-模型组和KO-模型组采用盲肠结扎穿孔术制备脓毒症ALI模型,WT-Sham组和KO-Sham组进行假手术操作。造模后24 h,检测动脉血氧分压(PaO_(2)),计算氧合指数(OI),检测肺组织病理改变,计算肺损伤评分,检测血清及肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、活性氧簇(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的浓度,肺组织中HMGB1、TLR4、核NF-κB的表达。结果 WT-模型组的PaO_(2)、OI、血清及肺组织SOD的浓度低于WT-Sham组,肺损伤评分、血清及肺组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、ROS、MDA的浓度、肺组织中HMGB1、TLR4、核NF-κB的表达水平高于WT-Sham组(P<0.05);KO-模型组肺组织中不表达HMGB1,PaO_(2)、OI、血清及肺组织SOD的浓度高于WT-模型组,肺损伤评分、血清及肺组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、ROS、MDA的浓度、肺组织中TLR4、核NF-κB的表达水平低于WT-模型组(P<0.05)。结论敲除HMGB1减轻脓毒症小鼠ALI,相关的分子机制可能是抑制TLR4/NF-κB通路介导的炎症反应和氧化应激反应。

共刺激分子4-1BBL和B7-1在人脑胶质瘤细胞中的表达

背景与目的:4-1BBL和B7-1为诱导和维持T细胞活化提供了重要的共刺激信号,目前被认为是提高抗肿瘤免疫的治疗靶点。本研究探讨4-BBL和B7-1在7株胶质瘤细胞系表面的表达情况。方法:用流式细胞仪检测7株胶质瘤细胞株表面的共刺激分子4-1BBL和B7-1的表达,同时用MTT法分析胶质瘤细胞系对抗癌药物长春新碱(VCR)敏感性,并分析4-1BBL的表达与耐药性的相关性。结果:发现在所检测的胶质瘤细胞表面有不同程度的表达4-1BBL,但均不表达B7-1。其中T98G和MGR1细胞表面的4-1BBL表达>30%,对VCR不敏感,UW28、SKMG1、MGR2、SF767、SKMG4细胞表面的4-1BBL表达<10%,对VCR敏感。结论:本研究所检测的胶质瘤细胞均不表达共刺激分子B7-1,但有不同程度的表达4-1BBL,并且4-1BBL高表达的胶质瘤细胞对长春新碱敏感性差。

4-1BBL联合Hsp70-肿瘤抗原肽抑制小鼠黑色素瘤肺转移

背景与目的正调节性共刺激分子表达偏低是肿瘤逃避机体免疫系统攻击的重要原因之一,增加这些分子的表达是促进抗肿瘤免疫的研究热点。小鼠黑色素瘤B16-F1细胞株是弱免疫原性癌细胞株。本研究旨在观察4-1BBL联合Hsp70-抗原肽对小鼠黑色素瘤肺转移的抑制作用,并探讨其机制。方法建立小鼠黑色素瘤肺转移模型,Hsp70-B16抗原肽小鼠皮下免疫,同时从尾静脉注射4-1BBL表达质粒p4-1BBL。于接种后第17天,解剖小鼠取肺组织,解剖显微镜下计数黑色素瘤肺转移结节的数目,并检测小鼠部分免疫学指标及肝、肾功能。结果4-1BBL联合Hsp70-B16抗原肽治疗组小鼠黑色素瘤肺转移结节数降至50±8,明显少于二者单独治疗组的500±80和450±40;联合治疗组小鼠血清IL-2和IFN-γ的分泌水平分别增加了4倍和3倍,与对照组相比均存在显著性差异(P<0.01);单独应用4-1BBL基因或与Hsp70-B16抗原肽联合应用对小鼠肝、肾的功能均无明显影响。结论表达4-1BBL联合应用Hsp70-B16抗原肽主要通过增强外周T淋巴细胞功能活性而有效抑制小鼠黑色素瘤肺转移。

同时表达4-1BBL B7.1及B7.2三个共刺激分子基因小鼠肝癌细胞系的建立和意义

目的:建立同时表达4-1BBL、B7.1及B7.2三个共刺激分子基因小鼠原发性肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)细胞系。方法:将B7.1和B7.2全长cDNA的质粒酶切,构建pcDNA3.1-B7.1-IRES-B7.2重组子,酶切法鉴定。用阳离子脂质体(LipofectamineReagent)将重组子转染H22,经均霉素(Hygromycin,300!g/ml)筛选,阳性克隆命名为H22-CD80/CD86+细胞。逆转录-聚合酶链反应(reversetranscription-polymerasechainreaction,RT-PCR)检测目的基因在H22-CD80/CD86+变异株的表达。采用同样方法将pCI-neo-4-1BBL质粒转入H22-CD80/CD86+细胞,G418筛选,阳性克隆命名为H22-CD80/CD86/CD137L+细胞。流式细胞仪检测三种基因在细胞克隆中的表达。结果:pcDNA3.1-B7.1-IRES-B7.2重组子经酶切鉴定,同时获得B7.1(862bp)和B7.2(984bp)目的基因片段和5.6kbp线性化pcDNA3.1载体片段;重组子测序结果与Genebank中B7.1和B7.2序列相符,证实构建成功。RT-PCR及FCM检测结果显示B7.1、B7.2及4-1BBL基因分别在H22-CD80/CD86+细胞及H22-CD80/CD86/CD137L+细胞中获得稳定、高效联合表达。结论:pcDNA3.1-B7.1-IRES-B7.2重组子构建正确,H22-CD80/CD86/CD137L+变异株可同时稳定表达B7.1、B7.2和4-1BBL三个共刺激分子基因。

共刺激分子4-1BBL和B7-1对人T淋巴细胞的协同激发作用

目的 :探讨 4 1BBL和B7 1这 2种共刺激分子在人外周血T淋巴细胞活化、增殖中的作用和机制。方法 :采用免疫磁珠阴性选择方法分离纯化人外周血T淋巴细胞 ;单向混合淋巴细胞反应 (MLR)分析共刺激分子对T细胞的激发作用 ;3H TdR掺入法测定细胞增殖 ;免疫荧光标记和流式细胞仪表型分析 ;ELISA检测细胞因子。结果 :经免疫磁珠阴性选择分离获外周血单个核细胞中的T细胞纯度 >90 %;人多发性骨髓瘤细胞株 (XG细胞 )转染 4 1BBL和B7 1cDNA后 ,细胞膜表面能稳定高表达这 2个分子 ,4 1BBL和B7 1转基因细胞也均能使同种异体T细胞发生活化、增殖、存活时间延长和介导细胞因子IL 2的分泌 ,且 2种共刺激分子具有一定的协同效应。结论 :4 1BBL和B7 1分子具有赋予XG细胞对T细胞的体外激发、促增殖和分泌IL 2的作用 ,4 1BBL和B7 1分子能产生协同效应。

4-1BBL分子在人急性单核细胞白血病细胞系U937和SHI-1的表达及促生长作用

目的研究4-1BBL分子在人急性单核细胞白血病细胞系U937和SHI-1的表达及促生长作用。方法用流式细胞术(FCM)和RT-PCR法检测4-1BBL分子在U937、SHI-1细胞系的表达;将激发型4-1BBL单抗(1F1)与U937、SHI-1细胞系分别进行培养,细胞计数分析2个细胞系的生长情况;收集U937细胞的培养上清,ELISA法检测细胞因子。结果FCM测得U937和SHI-1细胞有4-1BBL分子表达,RT-PCR法测得4-1BBLmRNA;细胞计数表明,1F1明显促U937、SHI-1细胞系生长(P<0·01);ELISA示1F1与U937细胞共培养48h,其上清液中IL-6含量(55·91±10·23)pg/ml,显著高于IgG1同型对照组的(12·14±3·8)pg/ml(P<0·01)。结论U937和SHI-1细胞系组成性表达4-1BBL分子;1F1与U937、SHI-1细胞的4-1BBL分子交联后,可促进U937、SHI-1细胞系生长,诱导U937细胞分泌细胞因子IL-6。

4-1BBL-B7-H3基因对免疫重建重症联合免疫缺陷荷瘤鼠的抑瘤作用

目的通过建立人免疫重建重症联合免疫缺陷(SCID)荷瘤鼠嵌合模型来探讨4-1BBL-B7-H3基因在非特异性抗肿瘤免疫中的作用。方法将40只SCID鼠随机分为5组,A组(对照组)行免疫重建加注射Tca8113细胞;B组(Ad4-1BBL-B7-H3组)行免疫重建加注射含有人4-1BBL-B7-H3基因腺病毒转染的Tca8113细胞;C组(空载组)行免疫重建加注射含有空载体腺病毒转染的Tca8113细胞;D组(非免疫重建组)不给予小鼠免疫重建,注射Tca8113细胞;E组(非肿瘤组)行免疫重建加注射PBS。每周定期测量肿瘤体积;酶联免疫吸附法检测人IgG蛋白含量;流式细胞仪检测外周血中人CD3+、CD56+淋巴细胞比例;免疫组织化学法观察自然杀伤细胞2族成员D(NKG2D)和Toll样受体2(TLR2)在肿瘤中的表达;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测4-1BBL-B7-H3 mRNA的表达,实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测主要组织相容性复合体1类相关分子(M1C)A、B及TLR2的表达。结果 1)B组小鼠肿瘤体积最小(P<0.05);2)A、B、C、E组小鼠外周血中检测到人IgG、CD3+、CD56+淋巴细胞,B组淋巴细胞比例高于A、C和E组(P<0.05);3)B组NKG2D和TLR2的表达较其余各组明显增强;4)人4-1BBL-B7-H3基因在B组小鼠肿瘤中稳定表达;5)B组M1CA、M1CB和TLR2的表达高于A、C、D组(P<0.05)。结论 4-1BBL-B7-H3基因在肿瘤组织中的高表达能成功诱导人CD3+、CD56+细胞增殖,直接或间接活化TLR2,上调NKG2D及其配体M1CA、M1CB的表达,从而产生有效的抗肿瘤免疫应答。

基于B7-1/2/CD28/CTLA-4通路探讨扶正祛毒汤干预急性髓系白血病完全缓解患者CD34~+细胞诱导成树突细胞激发T细胞的影响

目的探讨扶正祛毒汤治疗急性髓系白血病完全缓解的可能作用机制。方法12只新西兰大白兔随机分为正常组以及扶正祛毒汤低、中、高剂量组,每组3只。扶正祛毒汤低、中、高剂量组兔分别给予扶正祛毒汤浓缩煎剂5、10、20g/(kg·d)灌胃3d,正常组兔给予等体积蒸馏水灌胃,末次灌胃后心脏取血获得正常血清和扶正祛毒汤低、中、高剂量血清。将急性髓系白血病完全缓解患者骨髓稀释后分离提纯CD34~+细胞,将扩增后的CD34^(+)细胞分为空白组、细胞因子组、正常血清组和扶正祛毒汤低、中、高剂量血清组。除空白组外,其余各组均添加细胞因子诱导9d成为树突细胞。流式细胞术(FCM)检测各组树突细胞表面抗原分子CD83、CD1a、HLA-DR的表达,以及共刺激分子B7-1、B7-2的表达。诱导成熟后的树突细胞分别激发自体和异体T细胞,免疫印迹试验(WB)和RT-qPCR法检测T细胞中特异性表面糖蛋白CD28(CD28)和细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)蛋白和mRNA的表达。MTT比色法检测激发后的T细胞在不同效靶比时对人髓系白血病细胞株K562的杀伤作用。结果与空白组相比较,细胞因子组、正常血清组和扶正祛毒汤低、中、高剂量血清组树突细胞表面抗原分子CD83、CD1a、HLA-DR的表达明显升高(P<0.05),共刺激分子B7-1、B7-2的表达明显升高(P<0.05);与细胞因子组和正常血清组相比较,扶正祛毒汤低、中、高剂量血清组树突细胞表面抗原分子CD83、CD1a、HLA-DR的表达明显升高(P<0.05),共刺激分子B7-1、B7-2的表达明显升高(P<0.05)。与空白组、细胞因子组和正常血清组相比较,扶正祛毒汤低、中、高剂量血清组CD28蛋白及mRNA表达均明显增加(P<0.05),CTLA-4蛋白及mRNA表达均明显降低(P<0.05),T细胞对K562细胞的杀伤率明显增加(P<0.05),且杀伤作用随效靶比的增加而增强,但正常人T细胞与患者T细胞对K562细胞的杀伤作用无明显差异(P>0.05)。结论扶正祛毒汤治疗急性髓系白血病完全缓解的机制可能与该方能够有效促进急性髓系白血病完全缓解患者骨髓CD34^(+)细胞源树突细胞的成熟,从而抑制共刺激分子B7-1、B7-2与CTLA-4结合,且促进B7-1、B7-2与CD28结合,调控B7-1/2/CD28/CTLA-4信号通路有关。

血清转化生长因子β1、白细胞介素-6、Toll样受体-4、核转录因子κB联合评估非小细胞肺癌放射性肺炎病情严重程度的价值

目的探讨血清转化生长因子β1(TGF-β1)、白细胞介素-6(IL-6)、Toll样受体-4(TLR-4)和核转录因子κB(NF-κB)联合评估非小细胞肺癌(NSCLC)放射性肺炎(RP)病情严重程度的价值。方法选取104例NSCLC放疗后继发RP患者作为研究组,另选取52例NSCLC放疗后未继发RP患者作为对照组。比较2组患者放疗前后血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB水平。比较研究组不同程度RP患者放疗前后血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB水平,分析各血清指标单独及联合评估NSCLC放疗后RP病情程度的价值。结果放疗结束后,研究组患者血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);放疗结束后,随着RP病情程度的增加,研究组患者血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB水平呈升高趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线分析结果显示,放疗结束后血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB水平评估1级RP的曲线下面积(AUC)分别为0.787、0.718、0.783、0.801,评估≥2级RP的AUC分别为0.729、0.740、0.793、0.825;血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB阳性表达患者发生≥2级RP的风险分别是阴性表达患者的2.473、2.275、2.610、5.267倍(P<0.05);血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB联合评估≥2级RP的AUC为0.939,敏感度为76.00%,特异度为97.47%。结论NSCLC患者放疗结束后血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB水平均与RP病情严重程度呈正相关,四者联合评估≥2级RP的价值显著,可为临床控制RP病情提供参考依据。

小鼠4-1BBLcDNA的克隆及其在COS-7细胞中的表达

目的 :克隆小鼠 4 1BBL基因 ,构建其真核表达载体 ,并观察其在哺乳动物细胞中的表达 .方法 :取C5 7BL/ 6小鼠脾细胞 ,经PHA诱导后 ,以RT PCR克隆 4 1BBLcDNA ,测序 ,构建 pCDNA3.1 (+) m4 1BBL真核表达质粒 ,转染COS 7细胞 ,RT PCR检测m4 1BBLmRNA表达 ,间接免疫荧光法和流式细胞仪检测 4 1BBL蛋白的表达 .结果 :从小鼠脾细胞中克隆到m4 1BBLcDNA ,经测序完全正确 ,所构建的m4 1BBL质粒在COS 7细胞中获得高效表达 .结论 :小鼠 4 1BBLcDNA基因克隆、真核表达载体构建及其在COS 7中的表达均获成功 。

小鼠4-1BBL基因真核表达载体构建及其在COS-7细胞中的表达

目的 :构建含小鼠 4 - 1BBL编码区cDNA序列的真核表达载体 ,并检测其在COS - 7细胞中的表达。方法 :将目的基因 4- 1BBL克隆入pUC19载体中并进行酶切鉴定和DNA序列测定。亚克隆入真核质粒pIRES2 -EGFP ,构建真核表达载体pIRES2-EGFP -m4 - 1BBL。用脂质体法将重组质粒转入COS - 7细胞 ,以RT -PCR和观察细胞内荧光的方法检测m4 - 1BBL的表达。结果 :酶切鉴定和序列分析证实 ,重组质粒含有人 4 - 1BBL全长cDNA编码序列 ,转染实验表明 4 - 1BBL基因能在COS - 7细胞中表达。结论 :鼠 4 - 1BBL全长cDNA基因真核表达载体构建及其在COS - 7中的表达均获成功 ,为进一步研究奠定了基础。

转人4-1BBL-B7-H3基因口腔鳞癌细胞体外诱导抗肿瘤免疫的研究

目的通过构建转人4-1BBL-B7-H3基因肿瘤细胞株,探讨4-1BBL-B7-H3体外诱导抗肿瘤免疫的能力。方法通过脂质体法将真核表达载体pEGFP-4-1BBL-B7H3转染人口腔鳞癌Tca8113细胞,经G418筛选及有限稀释后获得稳定高表达克隆,用流式细胞仪分析表型,RT-PCR检测转染细胞中4-1BBL-B7-H3 m RNA的表达。用淋巴细胞分离液分离纯化人外周血T淋巴细胞,分别与转染4-1BBL、B7-H3、4-1BBL-B7-H3的Tca8113细胞混合培养。用CCK-8法检测细胞毒性T细胞(CTL)杀伤活性;ELISA法检测培养上清液中IFN-γ水平。结果转基因Tca8113细胞能够稳定高表达4-1BBL-B7-H3。与Tca8113细胞相比较,转染4-1BBL-B7-H3的Tca8113细胞能够显著增强T细胞增殖,促进IFN-γ分泌,并有效地诱导CTL产生对Tca8113细胞的特异性杀伤作用。结论转染人4-1BBL-B7-H3基因既能增强口腔鳞癌Tca8113细胞的免疫原性,亦能诱导T细胞产生有效的抗肿瘤免疫应答。

血必净注射液联合乌司他丁注射液治疗脓毒症并发急性肺损伤的效果及对HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的 探讨血必净注射液联合乌司他丁注射液治疗脓毒症合并急性肺损伤的临床效果及对高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法 采用随机数字表法将2022年1—12月接受治疗的140例脓毒症并发急性肺损伤患者分为研究组70例和对照组70例。2组均按指南给予基础治疗,在此基础上研究组给予血必净注射液联合乌司他丁注射液治疗,对照组给予血必净注射液治疗,2组疗程均为2周。比较2组临床疗效,治疗前后血清HMGB1、TLR4及NF-κB水平,血清炎性因子水平,并记录2组不良反应。结果 治疗后研究组总有效率为91.43%(64/70)优于对照组的75.71%(53/70)(P<0.05)。治疗后2组血清HMGB1、TLR4、NF-κB、超敏C反应蛋白、肿瘤坏死因子-α、降钙素原水平均降低,且研究组低于对照组(P<0.05,P<0.01)。2组不良反应总发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 血必净注射液联合乌司他丁注射液治疗脓毒症并发急性肺损伤患者临床效果较好,可有效降低血清HMGB1、TLR4、NF-κB和炎性因子水平,且安全性较高。

4-氨基-3,7-双(1H-四唑-5-基)-[1,2,4]三唑并[5,1-c][1,2,4]三嗪(DTTA)的晶体结构和热稳定性

为深入研究新型含能材料4-氨基-3,7-双(1H-四唑-5-基)-[1,2,4]三唑并[5,1-c][1,2,4]三嗪(DTTA)的相关性能。采用核磁共振谱(1H NMR、13C NMR)、红外光谱(IR)、高分辨质谱(HRMS)和X-射线单晶衍射仪等分析仪器对化合物的结构进行了表征。通过溶剂挥发的方式,在DMSO溶液中得到了DTTA的溶剂化物DTTA·2DMSO的晶体结构。结果表明:DTTA·2DMSO属于单斜晶系,空间群为P 21/n,a=4.630 2(5)?,b=23.278(3)?,c=17.069(2)?,140 K时晶体密度ρ=1.561 g·cm-3。测得其25℃下的粉末密度ρ=1.811 g·cm-3。采用Hirshfeld表面对晶体中各种近相互作用进行了分析,晶体内占主导地位的是N…H&H…N作用,占比高达52.4%。采用热重及差示扫描量热仪联用(TG-DSC)研究了DTTA的热分解性能,分解峰温为287℃。对DTTA的理论爆轰性能进行了研究,计算爆速为8 419 m·s-1,计算爆压为24.8 GPa。采用BAM感度测试仪测试了其冲击感度为24 J,摩擦感度大于360 N。用Kissinger法与Ozawa法分别计算了其活化能EK为200.25 kJ·mol-1,r为0.99,EO为199.38 kJ·mol-1,r为0.99。DTTA的综合性能较优异,可以作为一种有潜力的高能量密度炸药使用。

LEASO患者血清miR-21、miR-126水平与HMGB1/TLR4信号通路活性和术后复发的关系

目的 探讨股腘型下肢动脉硬化闭塞症(LEASO)患者血清微小核糖核酸(miR)-21、miR-126水平与高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)信号通路活性和术后复发的关系。方法 选取行介入手术的股腘型LEASO患者120例,根据术后是否复发将股腘型LEASO患者分为复发组和未复发组。RF-qPCR剂检测血清miR-21、miR-126表达和外周血单个核细胞HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达。采用Pearson相关性分析法分析股腘型LEASO患者血清miR-21、miR-126与外周血单个核细胞HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达的相关性。多因素Logistic回归分析股腘型LEASO患者介入术后复发的影响因素。结果 120例股腘型LEASO患者随访2年,术后复发率为34.17%。与未复发组比较,复发组血清miR-21和外周血单个核细胞HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达升高,血清miR-126表达降低(P均<0.05)。Pearson相关性分析显示,股腘型LEASO患者血清miR-21与外周血单个核细胞HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达呈正相关(r分别为0.660、0.649,P均<0.05),miR-126与外周血单个核细胞HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达呈负相关(r分别为-0.632、-0.641,P均<0.05),外周血单个核细胞HMGB1mRNA与TLR4 mRNA表达呈正相关(r=0.742,P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,高血压、糖尿病和miR-21、HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA升高为股腘型LEASO患者介入术后复发的独立危险因素,miR-126升高为独立保护因素(P均<0.05)。结论 股腘型LEASO患者血清miR-21高表达和miR-126低表达与HMGB1/TLR4信号通路激活有关,是股腘型LEASO患者术后复发的独立影响因素。

吴茱萸碱调节HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路对脑梗死大鼠神经炎症的影响

目的:探讨吴茱萸碱调节高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路对脑梗死大鼠神经炎症的影响。方法:采用大脑中动脉栓塞法构建脑梗死大鼠模型,随机分为模型组、吴茱萸碱低剂量组、吴茱萸碱高剂量组、吴茱萸碱高剂量+空载质粒组、吴茱萸碱高剂量+HMGB1过表达组,每组15只,另选取15只健康大鼠设为假手术组,以吴茱萸碱和质粒分组处理后,采用改良神经功能缺损评分(mNSS)评估大鼠神经损伤;三苯基氯化四氮唑(TTC)染色检测大鼠脑梗死面积;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)染色检测大鼠海马神经元凋亡率;透射电镜观察大鼠海马神经元超微结构;酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清及脑组织促炎因子环氧化酶-2(COX-2)、白细胞介素-18(IL-18)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平;蛋白免疫印迹法检测大鼠脑组织HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠海马神经元超微结构发生损伤,mNSS评分、脑梗死面积、海马神经元凋亡率、血清与脑组织COX-2、IL-18、iNOS水平、脑组织HMGB1、TLR4蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65明显升高(P<0.05);与模型组比较,吴茱萸碱低剂量组、吴茱萸碱高剂量组、吴茱萸碱高剂量+空载质粒组大鼠海马神经元超微结构损伤均减轻,mNSS评分、脑梗死面积、海马神经元凋亡率、血清与脑组织COX-2、IL-18、iNOS水平、脑组织HMGB1、TLR4蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65均降低(P<0.05);吴茱萸碱高剂量组大鼠海马神经元超微结构损伤较吴茱萸碱低剂量组进一步减轻,mNSS评分、脑梗死面积、海马神经元凋亡率、血清与脑组织COX-2、IL-18、iNOS水平、脑组织HMGB1、TLR4蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65进一步降低(P<0.05)。与吴茱萸碱高剂量组比较,吴茱萸碱高剂量+HMGB1过表达组大鼠海马神经元超微结构损伤加重,mNSS评分、脑梗死面积、海马神经元凋亡率、血清与脑组织COX-2、IL-18、iNOS水平、脑组织HMGB1、TLR4蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65升高(P<0.05)。结论:吴茱萸碱可通过阻止HMGB1/TLR4/NF-κB信号激活而降低促炎因子表达,从而抑制神经炎症,减轻脑梗死大鼠神经功能损伤。

HMGB1、AQP4、8-OHdG、APN水平与癫痫患儿疾病进展及认知功能的关系

目的探讨血清高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、水通道蛋白4(AQP4)、8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)、脂联素(APN)水平与癫痫患儿疾病进展及认知功能的关系。方法选取聊城市第二人民医院2021年1月至2023年12月收治的癫痫患儿142例为研究组,其中男74例,女68例,年龄(9.08±0.80)岁。根据癫痫类型分为全身强直阵挛发作组55例和局灶性发作组87例,并根据认知功能分为认知功能障碍组51例和认知功能正常组91例。另外选取同期接受健康体检的正常儿童145名为对照组。收集所选儿童的临床资料,均行血清HMGB1、AQP4、8-OHdG、APN水平检测,采用独立样本t检验比较研究组和对照组、不同癫痫类型及不同认知功能情况患儿血清HMGB1、AQP4、8-OHdG、APN水平,利用Pearson相关性分析癫痫患儿血清HMGB1、AQP4、8-OHdG、APN水平与认知功能的相关性,并绘制受试者操作特征曲线(ROC),获取曲线下面积(AUC),分析血清HMGB1、AQP4、8-OHdG、APN单独及联合检测对癫痫患儿认知功能障碍的预测价值。结果研究组血清HMGB1[(5.01±1.22)μg/L]、8-OHdG[(0.43±0.10)μg/L]水平高于对照组[(2.91±0.86)μg/L、(0.29±0.08)μg/L](均P<0.05),血清AQP4[(56.79±15.02)μg/L]、APN[(6.77±1.45)mg/L]水平低于对照组[(163.58±31.27)μg/L、(10.13±2.24)mg/L](均P<0.05)。全身强直阵挛发作组血清HMGB1[(6.14±1.98)μg/L]、8-OHdG[(0.53±0.15)μg/L]水平高于局灶性发作组[(3.95±1.10)μg/L、(0.36±0.09)μg/L](均P<0.05),血清AQP4[(41.43±12.07)μg/L]、APN[(4.64±1.40)mg/L]水平低于局灶性发作组[(70.89±21.44)μg/L、(7.98±2.32)mg/L](均P<0.05)。认知功能障碍组血清HMGB1[(6.18±2.04)μg/L]、8-OHdG[(0.57±0.19)μg/L]水平高于认知功能正常组[(3.98±1.25)μg/L、(0.38±0.12)μg/L](均P<0.05),血清AQP4[(46.94±15.15)μg/L]、APN[(4.97±1.55)mg/L]水平低于认知功能正常组[(71.43±23.59)μg/L、(8.01±2.53)mg/L](均P<0.05)。癫痫患儿血清HMGB1、8-OHdG水平与认知功能呈负相关(r=-0.499、-0.504,均P<0.05);血清AQP4、APN水平与认知功能呈正相关(r=0.531、0.527,均P<0.05)。血清HMGB1、AQP4、8-OHdG、APN联合预测癫痫患儿认知功能障碍的AUC为0.920,高于各指标单一检测(0.751、0.833、0.817、0.848)。结论血清HMGB1、8-OHdG在癫痫患儿中呈高表达,而血清AQP4、APN呈低表达,四者均参与疾病进展过程,并与认知功能障碍密切相关,且四者联合检测对癫痫患儿认知功能障碍的预测价值更高。