负性共刺激分子B7-H3和B7-H4在子宫内膜癌发生发展中的作用机制研究

目的:探究负性共刺激分子B7-H3和B7-H4在子宫内膜癌发生发展中的作用机制。方法:选择我院2020年1月—2022年1月收治的60例子宫内膜癌患者开展研究,作为A组。另取同期收治的50例不典型增生子宫内膜患者作为B组。再取40例因子宫内膜病变切取正常子宫内膜组织患者作为C组。分别进行三组组织芯片的制作,并以免疫组织化学法检测B7-H3、B7-H4及白细胞介素-10(IL-10)、转化生长因子-β1(TGF-β1)表达情况。通过Spearman相关性分析明确B7-H3、B7-H4与IL-10、TGF-β1水平的相关性。此外,分析B7-H3、B7-H4表达与子宫内膜癌患者临床病理特征的关系。结果:A组B7-H3、B7-H4与IL-10、TGF-β1阳性率高于B组及C组(均P<0.05)。经Spearman相关性分析发现:B7-H3、B7-H4与IL-10、TGF-β1表达均呈正相关(均P<0.05)。病理分级G2+G3、临床分期Ⅲ~Ⅳ期及淋巴结转移子宫内膜癌患者B7-H3阳性率高于病理分级G1、临床分期Ⅰ~Ⅱ期及无淋巴结转移患者(均P<0.05)。病理分级G2+G3、临床分期Ⅲ~Ⅳ期及淋巴结转移子宫内膜癌患者B7-H4阳性率高于病理分级G1、临床分期Ⅰ~Ⅱ期及无淋巴结转移患者(均P<0.05)。结论:负性共刺激分子B7-H3和B7-H4在子宫内膜癌发生、发展过程中起着促进作用,其作用机制可能和调控IL-10、TGF-β1表达有关。

4-1BBL-B7-H3基因对免疫重建重症联合免疫缺陷荷瘤鼠的抑瘤作用

目的通过建立人免疫重建重症联合免疫缺陷(SCID)荷瘤鼠嵌合模型来探讨4-1BBL-B7-H3基因在非特异性抗肿瘤免疫中的作用。方法将40只SCID鼠随机分为5组,A组(对照组)行免疫重建加注射Tca8113细胞;B组(Ad4-1BBL-B7-H3组)行免疫重建加注射含有人4-1BBL-B7-H3基因腺病毒转染的Tca8113细胞;C组(空载组)行免疫重建加注射含有空载体腺病毒转染的Tca8113细胞;D组(非免疫重建组)不给予小鼠免疫重建,注射Tca8113细胞;E组(非肿瘤组)行免疫重建加注射PBS。每周定期测量肿瘤体积;酶联免疫吸附法检测人IgG蛋白含量;流式细胞仪检测外周血中人CD3+、CD56+淋巴细胞比例;免疫组织化学法观察自然杀伤细胞2族成员D(NKG2D)和Toll样受体2(TLR2)在肿瘤中的表达;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测4-1BBL-B7-H3 mRNA的表达,实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测主要组织相容性复合体1类相关分子(M1C)A、B及TLR2的表达。结果 1)B组小鼠肿瘤体积最小(P<0.05);2)A、B、C、E组小鼠外周血中检测到人IgG、CD3+、CD56+淋巴细胞,B组淋巴细胞比例高于A、C和E组(P<0.05);3)B组NKG2D和TLR2的表达较其余各组明显增强;4)人4-1BBL-B7-H3基因在B组小鼠肿瘤中稳定表达;5)B组M1CA、M1CB和TLR2的表达高于A、C、D组(P<0.05)。结论 4-1BBL-B7-H3基因在肿瘤组织中的高表达能成功诱导人CD3+、CD56+细胞增殖,直接或间接活化TLR2,上调NKG2D及其配体M1CA、M1CB的表达,从而产生有效的抗肿瘤免疫应答。

转人4-1BBL-B7-H3基因口腔鳞癌细胞体外诱导抗肿瘤免疫的研究

目的通过构建转人4-1BBL-B7-H3基因肿瘤细胞株,探讨4-1BBL-B7-H3体外诱导抗肿瘤免疫的能力。方法通过脂质体法将真核表达载体pEGFP-4-1BBL-B7H3转染人口腔鳞癌Tca8113细胞,经G418筛选及有限稀释后获得稳定高表达克隆,用流式细胞仪分析表型,RT-PCR检测转染细胞中4-1BBL-B7-H3 m RNA的表达。用淋巴细胞分离液分离纯化人外周血T淋巴细胞,分别与转染4-1BBL、B7-H3、4-1BBL-B7-H3的Tca8113细胞混合培养。用CCK-8法检测细胞毒性T细胞(CTL)杀伤活性;ELISA法检测培养上清液中IFN-γ水平。结果转基因Tca8113细胞能够稳定高表达4-1BBL-B7-H3。与Tca8113细胞相比较,转染4-1BBL-B7-H3的Tca8113细胞能够显著增强T细胞增殖,促进IFN-γ分泌,并有效地诱导CTL产生对Tca8113细胞的特异性杀伤作用。结论转染人4-1BBL-B7-H3基因既能增强口腔鳞癌Tca8113细胞的免疫原性,亦能诱导T细胞产生有效的抗肿瘤免疫应答。

重型肝炎患者T淋巴细胞PD-1/B_7-H_1通路的表达及意义

目的研究重型肝炎(SH)患者T淋巴细胞程序性死亡因子-1(PD-1)及其配体B7-H1的表达以及对疾病预后的影响。方法用流式细胞术检测SH患者、慢性乙型肝炎(CHB)患者、体检健康者外周血T淋巴细胞PD-1/B7-H1的表达水平及T细胞亚群计数。分析存活及死亡SH患者PD-1/B7-H1的阳性率。结果 SH患者T淋巴细胞PD-1、B7-H1阳性表达率[(5.16±0.72)%、(7.73±0.89)%]与CHB患者[(10.26±1.24)%、(16.86±2.32)%)]均高于健康对照组[(1.72±0.23)%、(1.96±0.30)%],P均<0.05;SH患者CD4+、CD8+细胞数为(44±8.3)%、(12±5.4)%明显低于健康对照组的(54±10.5)%、(25±8.3)%,P均<0.01;CD4+/CD8+为(3.67±0.26)高于健康对照组的(2.18±0.18),P<0.01。与死亡的SH患者PD-1/B7-H1(6.75±0.84)%和(9.24±0.95)%相比,存活SH患者为(3.86±0.58)%和(5.94±0.79)%,差异有统计学意义(t=10.16、t=9.43,P均<0.01)。结论 SH患者外周血T淋巴细胞PD-1/B7-H1表达水平显著升高,与疾病预后密切相关。