卷烟烟气中4-N-亚硝基甲基氨-1-(3-吡啶基)-1-丁酮的量化健康风险评估

目的：对卷烟烟气中4-N-亚硝基甲基氨-1-（3-吡啶基）-1-丁酮（NNK）进行量化健康风险评估,为化合物的风险评估提供新的思路和方法。方法：运用健康风险评估基本框架,采用模拟与风险分析方法,对暴露参数进行概率分布模拟,并采用不同风险分析方法对NNK的风险进行评估。结果：采用二维和一维模拟得到NNK的风险评估终生癌症风险增量（ILCR）值分别为6.66×10^4和1.29×10^4,其致癌风险需引起关注,并给予管控,灵敏度分析表明NNK释放量对风险影响较大。结论：NNK的释放量对致癌风险贡献较高,需引起高度关注。

烟碱对4-(N-甲基-亚硝胺)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮和N′-亚硝基去甲烟碱体外细胞色素P4502A13酶促代谢反应的抑制作用

目的研究烟碱对4-(N-甲基-亚硝胺)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)和N-亚硝基去甲烟碱(NNN)的体外代谢激活是否产生抑制作用。方法分别以NNK和NNN为底物,采用体外重组酶细胞色素P450酶(CYP450)2A13体系进行孵育,以HPLC-MS-MS检测NNK和NNN及其代谢产物,建立体外孵育NNK和NNN的酶促反应动力学曲线,分析烟碱对其酶促动力学参数的影响。结果 CYP4502A13酶催化NNK生成4-羰基-4-(3-吡啶基)-丁醛(OPB),4-羟基-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(HPB)和4-羰基-4-(3-吡啶基)-氧代丁酸(OPBA),该酶催化NNN生成HPB,OPB和4-羟基-4-(3-吡啶基)-氧代丁酸(HA)。烟碱加入NNK反应液中,生成OPB,HPB和OPBA的Km值分别增加到7.4,13.1和11.0μmol·L^(-1),Vmax值保持不变。烟碱加入NNN反应液中,生成HPB,HA和OPB的Km值分别增加到35.46,16.51和28.19μmol·L^(-1),Vmax值保持不变。结论烟碱对CYP4502A13酶催化NNK和NNN的代谢反应具有竞争性抑制作用。

卷烟烟气中4-N-亚硝基甲基氨-1-(3-吡啶基)-1-丁酮的健康风险评估

为了解卷烟烟气中4-N-亚硝基甲基氨-1-（3-吡啶基）-1-丁酮（NNK）对人体健康的影响，运用化合物的健康风险评估理论，采用健康危害识别、剂量-反应关系评价、暴露评价和健康风险特征分析四个步骤，对卷烟烟气有害成分NNK进行健康风险评估。对于致癌化合物，一般认为终生暴露该化合物所导致的风险在10^-6或以下时为可接受风险，高于10^-6-10^-4。范围则认为化合物的风险需要管控。通过评估，卷烟烟气中NNK的风险度（ILCR）为1．4×10^-4，属于高度关注化合物。虽然风险评估方法本身存在一定的不确定性，但其综合了毒理学数据、暴露人群特征和人群暴露情况等资料，可为化合物的监管控制提供定性定量的科学依据。

4-N-亚硝基甲基氨-1-（3-吡啶基）丁酮对肺腺癌A549细胞增殖、凋亡的影响

目的研究4-N-亚硝基甲基氨-1-（3-吡啶基）丁酮对3_549细胞增殖、凋亡的影响。方法用含3％4-N-亚硝基甲基氨-1-（3-吡啶基）丁酮的培养基处理肺腺癌A549细胞，分别收集培养1周、2周、3周的细胞，采用四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖特性，Hoeehst33258荧光染色法观察细胞凋亡。结果对照组A549细胞培养3周后吸光度差异未见统计学意义（F=0．554，P=0．650），经4-N-亚硝基甲基氨．1．（3-吡啶基）丁酮处理1周、2周、3周后A549细胞吸光度分别为（0．516±0．007）、（0．485±0．005）、（0．432±0．013），差异有统计学意义（F=171．804，P〈0．001），各处理组与对照组吸光度比较差异有统计学意义（P均〈0．001）。随着4-N．亚硝基甲基氨-1-（3-吡啶基）丁酮对A549细胞作用时间的增加，增殖抑制率逐渐增加，分别为（22．28±1．58）％、（27．06±0．70）％、（34．60±2．18）％，差异有统计学意义（F=169．77，P〈0．001）。4．N．亚硝基甲基氨．1-（3-吡啶基）丁酮可诱导A549细胞的凋亡，随着作用时间的延长，各处理组细胞凋亡率逐渐增加，分别为（16．32±0．93）％、（22．92±1．11）％、（29．88±0．81）％，与对照组[（10．22±1．29）％]相比，差异有统计学意义（F=387．171，P〈0．001）。结论4-N-亚硝基甲基氨-1-（3-吡啶基）丁酮可抑制A549细胞的增殖，并促进其凋亡。

DNA甲基转移酶活性对NNK α-亚甲基羟基化代谢的影响

为准确评价DNA甲基转移酶(DNMT)的活性对4-(甲基亚硝氨基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)通过α-亚甲基羟基化代谢途径产生O^6-甲基鸟嘌呤(O^6-mG)的影响,采用超高效液相色谱-高分辨质谱(UPLC-HRMS)方法,分别对100 mg/kg NNK染毒后的生理盐水处理组、地西他滨处理组小鼠肝脏和肺中DNMT的活性、DNA甲基化程度,以及4-(3-吡啶基)-4-氧代丁酸(OPBA)、4-(3-吡啶基)-4-羟基丁酸(HPBA)和O^6-mG的质量分数进行了测定。结果表明:(1)地西他滨能够抑制DNA甲基转移酶活性,降低DNA甲基化水平。(2)地西他滨对NNK通过α-亚甲基羟基化代谢产生OPBA和HPBA的途径无显著影响。(3)抑制DNA甲基转移酶的活性,能减少NNK通过α-亚甲基羟基化代谢产生O^6-mG的量。

气相色谱-串联质谱法同时检测卷烟主流烟气中的苯并[a]芘和NNK

建立了同时测定卷烟主流烟气中苯并[a]芘（Ba P）和4-（N-甲基-N-亚硝氨基）-1-（3-吡啶基）-1-丁酮（NNK）的气相色谱-串联质谱（GC-MS/MS）方法。用剑桥滤片捕集卷烟主流烟气粒相物后再用甲苯进行振荡萃取,萃取液经过基质分散固相萃取净化及氮吹浓缩后采用DB-35MS色谱柱分离、多反应监测（MRM）模式分析,内标法定量。结果表明：1NNK和Ba P的定量限、加标回收率、相对标准偏差（RSD）分别为0.36和0.29 ng/支,78.8%~95.5%和101.6%~106.6%,2.3%~15.4%和2.9%~14.4%。2与标准方法相比,该方法前处理简单,可实现两种目标物的同时测定。3采用该方法与现有标准方法对27个卷烟的检测结果显示两组数据的一致性较好,无显著性差异。该方法操作简单、结果准确,适用于同时分析卷烟主流烟气中NNK和Ba P的释放量。

液相色谱-串联质谱法测定卷烟主流烟气中的四种致癌物

N-亚硝基降烟碱(NNN)、4-(亚硝基甲氨基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)、N-亚硝基新烟草碱(NAT)和N-亚硝基假木贼碱(NAB)是4种广泛存在于烟草和烟气中的致癌物,准确测定其含量对评估其对人体健康的影响有着重要的作用。采用液相色谱-电喷雾串联质谱(LC-ESIMS/MS)技术建立了卷烟主流烟气中NNN、NNK、NAT和NAB的测定方法,并将其用于中国烤烟和混合型卷烟主流烟气的分析。卷烟主流烟气通过剑桥滤片捕集,捕集烟气后的滤片在加入100μL氘代混合内标后用10mL100mmol/L醋酸铵水溶液萃取,萃取液过水相滤膜后直接进行LC-ESIMS/MS检测。选用AgilentZorbaxEclipseXDB-C18色谱柱,以流动相0.1%(v/v)乙酸水溶液和0.1%(v/v)乙酸甲醇溶液梯度洗脱,质谱检测采用正离子扫描,多反应监测模式。NNN、NNK、NAT和NAB的检出限分别为0.019、0.002、0.008和0.007μg/L,回收率为84.9%～104.5%,相对标准偏差(n=8)为2.96%～6.65%。该方法的检出限低,特异性好,适用于卷烟主流烟气中NNN、NNK、NAT和NAB释放量的检测。

LC-HRMS法检测C57BL/6小鼠血液中NNK及其7种代谢物

为准确测定小鼠血液中4-（N-甲基-N-亚硝氨基）-1-（3-吡啶基）-1-丁酮（NNK）及其代谢物,了解小鼠体内NNK的代谢途径,利用Q Exactive轨道阱高分辨质谱仪,建立了一种同时检测C57BL/6小鼠血液中NNK及其7种代谢物[4-（N-甲基-N-亚硝氨基）-1-（3-吡啶基）-1-丁醇（NNAL）、NNK-N-氧化物（NNK-N-oxide）、NNAL-N-氧化物（NNAL-N-oxide）、4-羟基-1-（3-吡啶基）-1-丁酮（HPB）、1-（3-吡啶基）-1,4-二醇（PBD）、1-（3-吡啶基）-1-丁酮-4-羧酸（吡啶基丁酮酸）和1-（3-吡啶基）-1-丁醇-4-羧酸（吡啶基羟基酸）]的液相色谱-高分辨质谱（LC-HRMS）方法。以NNK-d4、NNAL-d3和HPB-d4为内标,小鼠血清样品经乙腈沉淀蛋白后,直接进行亲水相互作用色谱（HILIC）柱分离和质谱分析,质谱扫描模式采用一级全扫描和数据依赖二级扫描（Full MS/dd MS2）模式。结果表明：各目标物的定量限在0.042-0.263 ng/m之间,线性相关系数为0.999 1-1.000 0,加标回收率在89.2%-116.5%之间,日内精密度在1.54%-8.06%之间。该方法选择性好,分析效率高,目标物线性范围大,适合于小鼠血液中NNK及其代谢物检测与分析。

烟草特有亚硝胺的致癌作用及其抑制

该文综述了烟草特有亚硝胺4-(N-亚硝基甲氨基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)的致癌作用及其抑制方面的研究进展,羰基还原和α-羟基化是NNK代谢活化的主要途径,NNK致癌主要作用器官是肺,致癌可能性与个体有关。有机异硫氰酸盐是NNK致癌的强抑制剂。多食用十字花科蔬菜、多吃水果、多饮用绿茶和黑茶对吸烟者和被动吸烟者是有益的。

NNK腹腔注射对小鼠免疫功能的影响

为研究4-（甲基亚硝氨基）-1-（3-吡啶基）-1-丁酮（NNK）对小鼠免疫功能的影响，将小鼠随机分为正常对照组、阳性对照组（环磷酰胺，200mg／kg）及NNK低、中和高剂量组（150，300，600gmol／kg），腹腔注射染毒7d后，测定小鼠血常规，取胸腺、脾脏称量并计算胸腺指数、脾脏指数，采用荧光显微镜计数法检测腹腔巨噬细胞吞噬功能，定量溶血分光光度法测定抗体生成细胞（PFC）功能，足趾厚度增加法检测迟发型变态反应（DTH），流式细胞术检测T淋巴细胞亚群。结果表明：与正常对照组相比，①NNK低剂量组可使小鼠DTH降低28．97％（P〈0．05）；②中、高剂量组可使小鼠血小板数、胸腺质量、胸腺指数、DTH、PFC、巨噬细胞吞噬率和吞噬指数分别降低17．50％～18．15％，44．82％～50．00％，44．50％～44．93％，38．91％～55．79％．18．84％～27．53％，23．79％～29．75％和26-35％一28．14％（P〈0．05）；③高剂量组还可使脾脏质量和CD3^＋CD8^＋T淋巴细胞的比率分别降低19．67％和23．63％（P〈0．05）。