T(4-AP)P的合成及与镉反应的分光光度法研究

合成了非水溶性显色剂ｍｅｓｏ－四（４－氨基苯基）卟啉（简称Ｔ（４－ＡＰ）Ｐ），研究了Ｃｄ（Ⅱ）－Ｔ（４－ＡＰ）Ｐ－Ｔｗｅｅｎ－８０－８－羟基喹啉体系的最佳形成条件，在ｐＨ１２．５～１２．８的强碱性介质中，沸水浴加热２０ｍｉｎ反应进行完全．Ｃｄ（Ⅱ）与Ｔ（４－ＡＰ）Ｐ的摩尔比为１２，在配合物最大吸收波长４４６ｎｍ处的表观摩尔吸光系数是３．０８×１０５Ｌｍｏｌ－１ｃｍ－１，镉量在０～６．０μｇ／２５ｍＬ范围内遵守比尔定律．方法应用于废水和黑米试样中痕量Ｃｄ（Ⅱ）的直接测定，结果满意．

4-戊基苯酚单克隆抗体的制备及其可变区的同源建模

目的制备4-戊基苯酚(4-AP)单克隆抗体(mAb),通过分子生物学方法对其可变区cDNA克隆和同源建模,为4-AP单链抗体制备及抗体分子层面改造奠定基础,同时为4-AP的免疫学检测提供一种新方法。方法将免疫小鼠脾脏细胞与Sp2/0细胞融合,筛选出F10阳性单抗细胞株。通过其mRNA的抽提,克隆出可变区cDNA序列,利用生物软件进行同源建模和分子对接。结果在最适条件下,其间接竞争ELISA(ic-ELISA)公式为y=A_2+(A_1-A_2)/(1+(x/x_0)~p)(A_1=1.28;A_2=-0.07;x_0=12 560.75;p=0.74),相关系数(R^2)为0.997,其最低检测限为0.65μg/mL。mAb重链和轻链分别属于IgG1型和Kappa型,其与4-AP的结合力为氢键和疏水作用。结论成功制备出1株稳定分泌的4-AP mAb的杂交瘤细胞株。通过同源建模对抗体可变区空间结构进行深入研究,为单链抗体及抗体改造提供参考,同时为4-AP含量检测提供新方法。

β-APRIA检测中的一些影响因素探讨

目的:探讨血清标本的保存、标本溶血、脂浊血清、细菌污染等对β-AP检测结果的影响。方法:取9例血清标本置4℃保存,观察β-AP含量与保存期的关系;人为造成标本溶血观察β-AP含量;脂浊血清与脱脂血清β-AP含量比较;细菌污染血清标本后观察β-AP含量变化。结果:血清标本4℃贮存4dβ-AP结果无显著变化(P>0.05);溶血标本β-AP值明显增高(P<0.01);脂浊血清β-AP含量较脱脂血清高(P<0.05);细菌污染标本后对β-AP含量检测有影响。结论:β-AP在4℃保存4d含量稳定,在室温中迅速降解。标本溶血、脂浊、细菌污染均可致β-AP检测结果造成异常变化,在实际工作中必须予以重视。

BK_(Ca)通道激动剂NS1619和Kv通道拮抗剂4-AP对眶下神经慢性缩窄环术大鼠面部机械痛阈的影响

三叉神经痛(trigeminal neuralgia)是临床上的顽疾,长期以来为医学界所重视,但其发病机制尚不清晰,临床上也无有效的治疗方法。本研究首先通过免疫荧光化学法和动物行为学测定,对经眶下孔达三叉神经节目标注射给药法的效果进行了评价,然后行眶下神经慢性缩窄环术(chronic constriction injury of the infraorbital nerve,ION-CCI)建立三叉神经病理性痛大鼠模型,用经眶下孔达三叉神经节目标注射法分别注射BKCa通道激动剂NS1619和Kv通道拮抗剂4-AP,观察药物对大鼠面部机械痛阈的影响。结果显示,通过经眶下孔达三叉神经节目标注射法,药物可以准确到达三叉神经节,并产生了比一般眶下孔注射给药法更为持久的注射效果。ION-CCI术后第6天大鼠术侧面部触须垫部产生了显著的异常性疼痛(allodynia),并可以维持到至少术后第42天。在ION-CCI术后第15天大鼠,运用经眶下孔达三叉神经节目标注射法注射BKCa通道激动剂NS1619可以剂量依赖性地显著提高ION-CCI组大鼠的面部机械痛阈,逆转面部痛觉过敏;而在ION-CCI术后第35天痛阈部分恢复的大鼠,同样方法注射Kv通道拮抗剂4-AP又可以显著降低面部痛阈。以上结果表明,BKCa通道激动剂NS1619和Kv通道拮抗剂4-AP可以显著影响ION-CCI大鼠的面部机械痛阈,提示激活BKCa通道可以抑制由ION-CCI引起的三叉神经病理性痛,而激活Kv通道可能对ION-CCI引起的三叉神经病理痛有紧张性的抑制作用。

甘草总黄酮止痒作用的实验研究

目的研究甘草总黄酮的止痒作用,初探其可能的作用机制,为将其开发为治疗皮肤瘙痒的药物提供一定的药理学依据。方法采用右旋糖酐所致的小鼠皮肤瘙痒模型和4-氨基吡啶(4-AP)诱发的小鼠瘙痒模型,观察甘草总黄酮对两种皮肤瘙痒模型的影响。另分别在不同模型中观察其对皮肤组胺含量、皮肤毛细血管通透性、肥大细胞脱颗粒、迟发型超敏反应等的影响,综合评价甘草总黄酮的止痒作用。结果甘草总黄酮对药物所诱发的小鼠皮肤瘙痒有明显的抑制作用,可抑制4-AP所诱发的小鼠皮肤组胺释放;对抗组胺所致的小鼠皮肤毛细血管通透性的增加;对大鼠颅骨骨膜肥大细胞脱颗粒反应和2,4-二硝基氯苯(DNCB)所致的迟发型超敏反应都有显著的抑制作用。结论甘草总黄酮具有较好的止痒作用,可能与抗组胺及抑制肥大细胞脱颗粒有关。

N-二异丙基磷酰化氨基酸-N-4-氨基吡啶衍生物的合成及对河豚毒素(TTX)解毒生物活性的研究

通过母体化合物4-氨基吡啶(4-AP)与N-二异丙基磷酰化氨基酸(DiPP-AA)在Ph3P和C2Cl6体系下的缩合反应,将具有生物活性的氨基吡啶环引入到磷酸化氨基酸结构中,设计、合成了5个N-二异丙基磷酰化氨基酸-N-4-氨基吡啶衍生物A1～A5.所有目标化合物均经IR,1H NMR,13C NMR,31P NMR,MS的表征.初步生物活性测试结果表明:目标化合物对河豚毒素(TTX)中毒的小鼠均有一定的解毒作用,并不同程度地延长了生存时间,而且毒性比母体化合物降低了.

钾通道阻断剂TEA对大鼠全脑缺血后海马神经元损伤的保护作用

在大鼠四血管夹闭前脑缺血模型上 ,观察了侧脑室给予钾通道阻断剂四乙基铵 (TEA)和 4 氨基吡啶 (4 AP)对脑缺血后海马CA1区锥体神经元迟发性死亡的保护作用。结果发现 :再灌流 30min后给予TEA组CA1区存活的锥体细胞数明显高于生理盐水对照组 ,而再灌流 30min后给予 4 AP组和缺血前 30min给予TEA组的存活细胞数则与生理盐水对照组无明显差别。表明再灌流后给予TEA对脑缺血诱导的海马CA1区锥体神经元死亡具有明显的保护作用 ,提示钾通道可能在缺血后海马CA1区锥体细胞的迟发性死亡中发挥重要的作用。

妇安消疹洗液对小鼠迟发型变态反应的影响

目的:研究妇安消疹洗液抗Ⅳ型(迟发型)变态反应的药理作用。方法:C57BL/6/ICR小鼠分为空白组、模型组、地奈德组和妇安消疹洗液低剂量组、中剂量组、高剂量组,除空白组外采用二硝基氯苯(DNCB)丙酮溶液诱发小鼠Ⅳ型变态反应模型,给药后观察各组耳肿胀度、胸腺指数、脾脏指数;给药7 d后以4-氨基吡啶(4-AP)诱发小鼠皮肤局部瘙痒模型,观察舔体反应次数;用磷酸组织胺的累计剂量为指标测定各组的致痒阈。结果:妇安消疹洗液局部外用能显著抑制DNCB诱发的小鼠Ⅳ型变态反应;对4-AP导致的小鼠皮肤瘙痒具有显著的抑制作用;对小鼠磷酸组织胺致痒阈具有显著的提升效应。结论:妇安消疹洗液局部外用具有良好的抗Ⅳ型变态反应和止痒作用,该制剂适用于临床具有Ⅳ型变态反应特征的皮损治疗。

大鼠三叉神经中脑核神经元放电滞后现象的动力学分析

目的:利用非线性动力学理论的分析手段阐明三叉神经中脑核神经元放电滞后现象的产生机制.方法:应用脑片全细胞膜片钳技术记录大鼠三叉神经中脑核(Mes V)神经元在三角波电流刺激下的放电特征,运用动力学方法对其进行分析.结果:Ⅱ型MesV神经元放电表现出滞后现象,加入4-AP转型后滞后现象消失;非线性动力学分岔理论可以对以上现象做出解释.结论:Ⅱ型神经元的亚临界霍普夫分岔使得其存在滞后现象.

钾电流在甲基苯丙胺引起神经元损伤中的作用

目的探讨甲基苯丙胺（Meth）对外向钾电流的影响及外向型钾通道在Meth引起的海马神经元损伤过程中的作用。方法以分离出的怀孕18dSprague—Dawley大鼠胎鼠的海马神经元作为实验对象，分为对照组和Meth处理组，采用全细胞膜片钳的实验方法，分别记录Meth处理后外向4-AP和TEA敏感型钾电流大小的变化。通过MTT和TUNEL的方法，观察Meth作用后引起的电流变化对海马神经元活力和凋亡的影响。统计分析利用单因素方差分析结合LSD-t检验，以P〈0．05为差异具有统计学意义。结果与对照组（n=10）比较[（87．4±12．5）pA／pF]，Meth处理组（n=7）细胞外向4-AP敏感型钾电流密度明显增大[（120．1±19．6）pA／pF，P〈0．01]，且呈剂量依赖性。MTT结果表明，Meth明显降低细胞的活力（48．72±4．38）％，与对照组（100．07±3．36）％比较，差异具有统计学意义，而钾通道抑制剂4-AP（61．39±3．15）％以及胞外高浓度K^＋溶液（78．25±9．42）％，能有效抑制Meth引起的细胞损伤。TUNEL实验进一步表明，Meth能引起海马神经元的凋亡，而4-AP和胞外高浓度K^＋溶液对Meth引起的细胞凋亡具有保护作用。结论Meth引起外向4-AP敏感型钾电流增大，进而可能导致海马神经元的损伤。