Bhas 42细胞转化试验高通量检测方法的建立及应用

目的:建立Bhas 42细胞转化试验高通量检测方法,并应用于染料木黄酮(GEN)潜在致癌性的检测中。方法:建立Bhas42细胞转化试验方法,比较细胞灶法和H2O2法对结果判定的影响。细胞灶法试验组在第21天直接固定染色。H2O2法试验组在细胞接种后第19天采用H2O2处理,染色并测定D(450)以确定细胞转化率。计算转化率以验证两种方法的相关性。并通过细胞生长试验选择适宜的GEN浓度进行细胞转化试验,H2O2法判定转化试验结果。结果:在细胞灶法中,启动试验3-甲基胆蒽(3-MCA)组、促癌试验佛波醇酯(TPA)组的转化灶个数分别与启动、促癌试验DMSO组相比明显升高(P<0.01)。在H2O2法中,启动试验3-MCA组、促癌试验TPA组的转化灶个数、D(450)分别与启动、促癌试验DMSO组相比均明显升高(P<0.01)。启动试验中,GEN各浓度组(0.03、0.1、0.3、1、3μg/m L)相对于阴性组差异均无统计学意义,而在促癌试验中GEN浓度为0.03、1、3μg/m L时的D(450)相对于阴性组有显著差异(P<0.01)。结论:成功建立了Bhas 42细胞转化试验的H2O2法并实现了高通量检测,该法进一步缩短了实验周期并提高了结果的客观性,适用于非遗传毒性致癌物的体外早期筛选。GEN在促癌试验中呈阳性,但在启动试验中呈阴性,提示其可能是非遗传毒性致癌物。

Mes42细胞及细胞因子对中脑和纹状体神经前体细胞的分化作用

了解中脑神经前体细胞和纹状体神经前体细胞在Mes4 2细胞及细胞因子作用下的体外诱导分化情况。采用含细胞因子或 /和Mes4 2细胞条件培养基和细胞膜碎片的分化培养基培养中脑神经前体细胞和纹状体神经前体细胞 ,孵育 7d后行免疫细胞化学染色了解其体外诱导分化情况。IL 1α(10 0pg/ml) ,IL 11(1ng/ml) ,GDNF(1μg/ml)和LIF(1ng/ml)可诱导中脑神经前体细胞分化成TH阳性神经元 ,增加分化的TH阳性细胞数目。Mes4 2细胞条件培养基和其细胞膜裂解碎片以及细胞因子IL 11,LIF ,GDNF ,IL 1α共同培养神经前体细胞 ,诱导分化的TH阳性细胞数目无明显增加 ,但TH阳性细胞的形态更趋成熟。而纹状体神经前体细胞在上述分化培养基内鲜见TH阳性细胞。中脑神经前体细胞可在体外被诱导分化成TH阳性神经元 。

应用Bhas 42细胞转化实验检测环磷酰胺、丝裂霉素C和氨苄西林钠致癌作用

目的采用Bhas 42细胞转化实验检测已知有遗传毒性的化学品在化学致癌中的引发和促生长作用,评价Bhas 42细胞转化实验检测化学品致癌作用的可靠性。方法①通过细胞毒性实验确定环磷酰胺、丝裂霉素C和氨苄西林钠进行Bhas 42细胞转化实验的浓度。②引发实验:细胞接种当日为第0天,第1天换成含有相应最终浓度的受试物或0.5%DMSO的DF5F培养基,培养72 h,第4天换成不含药物的DF5F培养基,培养至第21天。第22天将细胞固定、染色、并计数细胞数大于50的集落数。③促生长实验:接种当日为第0天,第4天换成含有相应受试物或0.5%DMSO的DF5F培养基并连续培养至第14天,期间第7天,第11天更换同样培养基,每15天换成不含药物的DF5F培养基,培养至第21天。第22天固定、染色细胞、计数细胞数大于50的集落数。结果按照70%的细胞存活率以及前期文献结果确定最终浓度为:氨苄西林钠1750 mg·L-1;环磷酰胺1300 mg·L-1;丝裂霉素C 0.01 mg·L-1;3-甲基胆蒽1 mg·L-1,佛波酯0.05 mg·L-1。引发实验结果显示,3-甲基胆蒽,丝裂霉素C和环磷酰胺集落数显著多于空白对照、并且两者比值>2,判定为有引发作用的致癌化学品。促生长实验结果显示,佛波酯集落数显著多于空白对照、并且两者比值大于2,因此判定为有促生长作用的致癌化学品。结论 Bhas42细胞转化实验不仅可以检测出遗传实验可检测出的致癌阳性化学品和非致癌化学品,还可检测出遗传实验结果为假阴性的致癌阳性化学品,可以作为一种快速易操作的致癌物预测体外模型。

应用Bhas42细胞实验检测佛波酯对22个肿瘤促长基因表达的影响

目的探索目标基因与Bhas42细胞转化试验结合成为检测化合物致癌促长活性新的筛选方法的可能性。方法取促癌化合物佛波酯(TPA)作为阳性物,采用Bhas42转化细胞作为实验体系。接种当日为第0天(d 0),d 4将培养基换成含有TPA 0.05 mg·L-1或0.5%DMSO的DF5F培养基,在加入相应受试化合物的24,48及72 h后取样。样品经过预处理后对抽提的RNA进行质量评价,采用RT-PCR方法检测Ccnb1,Rif1,Mcm3,Chek1,Jun,Fosl1,Hells,Vegfa,Stmn1,Prl2c3,Scarb1,Phex,Orm1,Orm2,Nup54,Slc2a1,Il1rl1,Rad51ap1,Tfrc,Ab1,Car13和Pik3r5在不同时间点的表达。结果与阴性对照组相比,TPA组加样后24 h有3个基因出现上调,分别为Vegfa,Il1rl1和Pik3r5;加样后48 h有11个基因出现上调,分别为Chek1,Hells,Mcm3,Rad51ap1,Vegfa,Il1rl1,Prl2c3,Slc2a1,Tfrc,Stmn1和Rif1;加样后72 h有10个基因出现上调,分别是Chek1,Hells,Rad51ap1,Vegfa,Il1rl1,Prl2c3,Slc2a1,Tfrc,Stmn1和Ccnb1。结论 TPA处理后所选取的22个促长阶段相关基因的表达在不同时间点呈现出不同的敏感性,说明22个肿瘤促长基因与Bhas42细胞体系结合,有望成为一种更快捷高速的致癌性筛选方法。

细胞分裂周期蛋白42基因在肿瘤中的研究进展

细胞分裂周期蛋白42(cell division cycle 42,Cdc42)是小G蛋白Rho亚家族中的核心成员,最初在酿酒酵母中被发现。研究表明Cdc42可通过调控上皮形态和极性的发生,调节肌动球蛋白和微管细胞骨架的蛋白质的极化输送和脂质组成的变化,在细胞黏附、囊泡运输、凋亡、吞噬作用、细胞迁移和胞质分裂等细胞生理过程中发挥着关键作用[1]。

缺血性脑卒中后抑郁患者外周血CDC42、Th17细胞表达及与抑郁程度的相关性分析

目的观察缺血性脑卒中患者外周血细胞分裂周期蛋白42(CDC42)、辅助性T细胞17(Th17)表达并探究其表达与患者抑郁程度的相关性。方法选取2022年1月—2023年1月河北北方学院附属第一医院收治的200例缺血性脑卒中患者为观察组,另选取同期该院200例体检健康者为对照组。患者入院后均接受常规抗血小板聚集、降脂等对症支持治疗,并采用多感官刺激方案对患者进行干预。采用蒙哥马利抑郁评定量表评估患者的抑郁状态,并将患者分为无抑郁组116例、轻度抑郁组38例、中度抑郁组31例、重度抑郁组15例。比较各组医院焦虑抑郁量表(HADS)和简易精神状态评价量表(MMSE)评分,比较观察组干预前后日常生活活动能力(ADL)评分;检测各组外周血CDC42 mRNA、Th17细胞、调节性T细胞(Treg)、Th17/Treg表达。以Pearson相关系数分析HADS评分与患者外周血CDC42 mRNA、Th17细胞、Treg细胞、Th17/Treg表达水平的相关性。结果观察组HADS-A评分、HADS-D评分均高于对照组(P<0.05),MMSE评分低于对照组(P<0.05)。重度抑郁组HADS-A评分、HADS-D评分高于其他组(P<0.05),MMSE评分低于其他组(P<0.05);中度抑郁组HADS-A评分、HADS-D评分高于轻度抑郁组和无抑郁组(P<0.05),MMSE评分低于轻度抑郁组和无抑郁组(P<0.05);轻度抑郁组HADS-A评分、HADS-D评分高于无抑郁组(P<0.05),MMSE评分低于无抑郁组(P<0.05)。观察组外周血CDC42 mRNA、Treg细胞的表达水平低于对照组(P<0.05),外周血Th17细胞、Th17/Treg的表达水平高于对照组(P<0.05)。重度抑郁组Th17细胞、Th17/Treg表达水平高于其他组(P<0.05),Treg细胞表达水平低于另外组(P<0.05),中度抑郁组Th17细胞、Th17/Treg表达水平高于轻度抑郁组、无抑郁组(P<0.05),Treg细胞表达水平低于轻度抑郁组、无抑郁组(P<0.05),轻度抑郁组Th17细胞、Th17/Treg表达水平高于无抑郁组(P<0.05),Treg细胞表达水平低于无抑郁组(P<0.05)。观察组干预后HADS-A评分、HADS-D评分低于干预前(P<0.05),MMSE评分、ADL评分高于干预前(P<0.05)。观察组干预前后外周血CDC42 mRNA表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。观察组干预后外周血Th17细胞、Th17/Treg表达水平低于干预前(P<0.05),外周血Treg细胞表达水平高于干预前(P<0.05)。观察组患者外周血Th17细胞、Th17/Treg表达与HADS评分呈正相关(r=0.673、0.603,均P<0.05),外周血Treg细胞表达与HADS评分呈负相关(r=-0.586,P<0.05),外周血CDC42 mRNA与HADS评分无相关性(r=-0.375,P>0.05)。结论缺血性脑卒中患者外周血CDC42mRNA表达明显降低、Th17细胞表达明显升高,随着患者抑郁程度加重,Th17细胞表达逐渐升高,而CDC42mRNA表达与患者的抑郁程度无相关性,可通过合理的干预措施减轻抑郁情绪,防止病情加重。

维持性血液透析患者血清细胞分裂周期蛋白42、β_(2)微球蛋白、腓骨蛋白1水平与腹主动脉钙化的相关性

目的 探讨维持性血液透析(MHD)患者血清细胞分裂周期蛋白42(CDC-42)、β_(2)微球蛋白(β_(2)-MG)、腓骨蛋白1(FBLN1)水平与腹主动脉钙化(AAC)的相关性。方法 收集74例MHD患者的一般资料和生化指标,根据腹主动脉钙化评分(AACs)将患者分为无和轻度AAC组36例和中重度AAC组38例。比较2组血清CDC-42、β_(2)-MG、FBLN1水平,采用多因素Logistic回归分析探讨MHD患者发生AAC的危险因素。结果 中重度AAC组透析龄、血磷、全段甲状旁腺激素(iPTH)、CDC-42、β_(2)-MG、FBLN1水平高于无和轻度AAC组,差异有统计学意义(P<0.05)。MHD患者AAC与血磷、iPTH、CDC-42、β_(2)-MG、FBLN1、透析龄呈正相关(P<0.05)。高CDC-42、β_(2)-MG、FBLN1水平及长透析龄是MHD患者发生AAC的独立危险因素(P<0.05)。结论 血清CDC-42、β_(2)-MG、FBLN1水平与MHD患者AAC呈正相关,高CDC-42、β_(2)-MG、FBLN1水平及长透析龄是MHD患者发生AAC的独立危险因素。

肺鳞癌LC-42及腺癌SELS细胞中PDHA1及GBP1表达的测定

目的:探索肺鳞癌LC-42及肺腺癌SELS细胞中PDHA1及GBP1基因活性的相互关系。方法:肺鳞癌LC-42及肺腺癌SELS细胞分别分为CT组、siRNA CT组、PDHA1 siRNA组及GBP1 siRNA组。其中CT组为空白对照组,siRNA CT组为siRNA对照组,PDHA1 siRNA组及GBP1 siRNA组为siRNA转染试剂分别沉默PDHA1或GBP1基因,转染48 h后收取细胞。采用RT-PCR检测各组细胞PDHA1及GBP1 mRNA的表达,再用免疫细胞化学染色及Western blot分析各组细胞PDHA1及GBP1蛋白的表达。结果:RT-PCR结果显示,与CT组相比,PDHA1 siRNA组的GBP1 mRNA表达水平上调(P<0.05)。免疫细胞化学染色及Western blot结果显示,与CT组相比,PDHA1 siRNA组的GBP1蛋白表达水平上调(P<0.05)。结论:肺鳞癌LC-42及肺腺癌SELS细胞中,GBP1可能是PDHA1的下游基因,PDHA1直接或间接参与了GBP1基因的负调控。

lnc85通过调节CDC42的表达促进肝癌细胞增殖

目的:探讨长链非编码RNA RP11-85G21.1(lnc85)对肝癌细胞增殖的作用及可能机制。方法:RNA全转录组测序结合实时荧光定量PCR(RT-qPCR)筛选验证肝癌中差异高表达的lnc85;利用lnc85过表达/空载慢病毒感染细胞,构建lnc85过表达肝癌细胞株(OE)和对照细胞(control);RNA下拉实验(RNA pull-down)联合质谱筛选lnc85互作蛋白并进行蛋白免疫印迹(western blotting)验证;MTT实验、细胞克隆形成实验分析lnc85过表达对细胞增殖的影响;生物信息学分析lnc85互作蛋白表达水平及对生存的影响。结果:RNA全转录组测序发现,与对照相比,lnc85在肝癌患者血浆外泌体中明显高表达(P<0.001),RT-qPCR验证lnc85在3种肝癌细胞中显著升高(P<0.01,P<0.001);RNA pull-down联合质谱分析发现CDC42为lnc85的互作蛋白,RT-qPCR证实CDC42水平在肝癌细胞显著升高(P<0.001);且lnc85过表达的肝癌细胞中,CDC42蛋白水平显著上调(P<0.001),细胞增殖能力显著增强(P<0.01);生物信息学分析发现,肝癌患者CDC42的表达水平显著高于健康对照(P<0.001),并随着肿瘤等级的增高而增高;高表达CDC42的肝癌患者预后不良(P<0.001)。结论:lnc85在肝癌中高表达,可能通过靶向调节CDC42的表达促进肝癌细胞的增殖。

佛波酯及3-甲基胆蒽对Bhas 42细胞系的诱癌和促癌作用

根据化学致癌物在肿瘤形成过程中作用的不同阶段,可将化学致癌物分为诱癌化合物和促癌化合物,化学致癌物可使得Bhas细胞系产生突变从而形成集落。本研究通过考察促癌化合物佛波酯(TPA)及诱癌化合物3-甲基胆蒽(MCA)对Bhas 42细胞系的转化作用,验证Bhas 42细胞转化试验检验诱癌物及促癌物的准确性。

p38MAPK信号通路在雨蛙素诱导的胰腺AR42J细胞炎症反应中的作用

目的:探讨p38 MAPK信号通路在急性胰腺炎体外模型中的作用。方法:AR42J细胞随机分为3组:正常对照组、雨蛙素组(10-8mol/L雨蛙素)和SB203580组(10μmol/L SB203580+10-8mol/L雨蛙素)。于3h收集细胞,检测淀粉酶分泌率;免疫荧光染色观察p-p38 MAPK核移位;Western blotting印迹检测p-p38 MAPK和TNF-α蛋白表达;EMSA检测NF-κB活性。结果:与正常对照组比较,雨蛙素组淀粉酶分泌率和TNF-α蛋白水平增高(P<0.01),p-p38 MAPK表达及NF-κB活性表达增加(P<0.01);免疫荧光示雨蛙素组p-p38MAPK发生了核移位。而与雨蛙素组相比,SB203580组明显降低淀粉酶分泌率和TNF-α蛋白表达(P<0.01),p-p38 MAPK和NF-κB的活性表达也下降(P<0.05);SB203580还抑制了p-p38 MAPK核移位。结论:p38MAPK通路参与了胰腺细胞内的炎症反应,其机制可能涉及NF-κB通路的活化。

Ang 1-7对雨蛙素刺激的胰腺腺泡AR42J细胞p38 MAPK/NF-κB信号通路的影响

目的探讨血管紧张素1-7(Ang 1-7)干预雨蛙素(caerulein,CAE)刺激的胰腺腺泡细胞AR42J后,p38MAPK/NF-κB信号蛋白的表达变化。方法将AR42J细胞随机分为3组:对照组、雨蛙素组(10 nmol/L,CAE组)、Ang1-7组(10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L Ang 1-7+10 nmol/L雨蛙素)。对照组为正常生长的AR42J细胞,CAE组用10 nmol/L的雨蛙素刺激AR42J于2 h、6 h、12 h、24 h及48 h收集细胞,Ang 1-7组为不同浓度Ang 1-7作用30 min后再用雨蛙素刺激24 h收集细胞,Western blot技术检测各组细胞中ACE2、Mas受体、p38 MAPK、p-p38 MAPK及NF-κB的蛋白表达。结果 AR42J细胞中可见ACE2-Ang 1-7-Mas受体轴表达;与对照组相比,CAE组ACE2和Mas受体的表达呈先增多后减少的趋势,均于24 h达高峰(P<0.05);p38 MAPK、p-p38 MAPK及NF-κB的表达亦是24 h达峰值(P<0.05);Ang 1-7(10-7mol/L、10-6mol/L及10-5mol/L)上调Mas受体的表达,下调p38 MAPK、p-p38MAPK、NF-κB蛋白的表达,Ang 1-7的浓度为10-5mol/L时,后三者的表达水平与CAE组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论雨蛙素刺激的AR42J细胞中,Ang 1-7可通过Mas受体抑制p38MAPK/NF-κB信号通路的活性。

miR-29a对胶质瘤细胞CDC42表达及迁移和侵袭的影响

目的:探讨胶质瘤miR-29a与CDC42表达的相互关系及其对肿瘤细胞侵袭迁移的影响。方法:采用组织微阵列及锁定寡核苷酸原位杂交技术,检测60例不同级别胶质瘤及10例非肿瘤对照脑组织中miR-29a的表达水平,采用qRT-PCR、Westernblot及Transwell培养,分别检测U251及其稳定表达miR-29a和无义对照序列的亚细胞系(U251-miR-29a及U251-scr)miR-29a、CDC42 mRNA及蛋白的表达及其迁移和侵袭能力,并分析其相互关系。结果:各级别胶质瘤miR-29a表达水平均显著低于对照脑组织,并随肿瘤级别升高而减少,差异均有统计学意义(P<0.01)。U251-miR-29a的miR-29a表达量明显高于U251和U251-scr(P<0.001),其CDC42 mRNA和蛋白表达量明显降低(P<0.05);CDC42 mRNA与其蛋白表达量呈正相关(r=0.834,P<0.01),而与miR-29a表达量呈负相关(r=-0.979,P<0.01)。U251-miR-29a的迁移和侵袭能力明显低于U251和U251-scr(P<0.001),并均与CDC42蛋白表达量呈正相关(r=0.828,P<0.01)。结论:miR-29a表达水平是评价胶质瘤良恶性的重要参考指标,胶质瘤细胞miR-29a表达异常减少是CDC42上调及迁移侵袭能力增强的重要因素,补充外源性miR-29a可抑制靶基因CDC42表达,阻止其侵袭迁移,提示恶性胶质瘤基因治疗中具有重要的潜在应用价值。

不同胆汁酸诱导AR42J细胞凋亡与坏死的作用

目的:探讨7种不同胆汁酸对AR42J胰腺腺泡细胞的损伤作用,检测在各种胆汁酸作用下胰腺腺泡细胞的存活率和凋亡/坏死的改变.方法:以大鼠AR42J胰腺腺泡细胞系为研究对象,应用MTT法检测7种不同胆汁酸对细胞存活率的影响和剂量与时间依赖性,采用光学显微镜和荧光显微镜观察细胞形态学改变与凋亡/坏死的变化,流式细胞术AV/PI双染法检测细胞的凋亡/坏死率.结果:CA,GCA和GDCA在0.1-1.0mmol/L内对AR42J细胞不具有损伤作用;而DCACDCA和LCA分别从0.3mmol/L开始,TDCA从0.4mmol/L开始,呈剂量依赖性对AR42J细胞产生损伤作用.0.8mmol/LCA组细胞凋亡率与坏死率同CON组无明显区别(1.2%vs0.9%;1.0%vs1.0%,均P>0.05);0.4mmol/LDCA组细胞凋亡率和坏死率分别为45.2%和8.9%;0.8mmol/LDCA组细胞凋亡率和坏死率分别为18.6%和45.4%.

核因子-κB在脂多糖诱导的大鼠胰腺腺泡细胞AR42J炎性效应中的作用

目的探讨核因子-κB(NF-κB)在急性胰腺炎体外模型中的作用。方法以10 mg／L脂多糖刺激AR42J细胞构建急性胰腺炎的体外模型,设2 h、6 h、12 h、18 h和24 h共5个时间点,每时间点设3个复孔,逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)半定量法观察细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和NF-κB p65亚单位mRNA表达的改变;链酶亲和素-生物素-过氧化物酶复合物法(SABC)检测p65蛋白在AR42J细胞中的表达;人工碘比色法观察培养液上清中淀粉酶的改变。结果脂多糖刺激后,AR42J细胞以时间依赖方式上调ICAM-1 mRNA和p65 mRNA的表达,24 h达最高值;二者之间具有直线相关性(P< 0．01),同时p65蛋白亦呈时间依赖方式表达增强,24 h表达最强;各组间淀粉酶无明显改变(P>0．05)。结论在脂多糖诱导的胰腺腺泡细胞AR42J炎性效应中,NF-κB调控致炎细胞因子ICAM-1的表达。

Cdc42基因在表皮生长因子促进HepG2细胞丝状伪足形成中的作用

目的:探讨表皮生长因子(EGF)对HepG2细胞丝状伪足形成和细胞体外侵袭能力的影响以及细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)在其中的作用.方法:将Cdc42siRNA转染HepG2细胞株,RT-PCR和Westernblot检测EGF组、EGF+siRNA干扰组、siRNA干扰组及空白对照组细胞Cdc42mRNA转录以及蛋白的表达水平,微丝绿色荧光探针(actin-trackergreen)染色检测HepG2细胞丝状伪足形成,侵袭小室检测细胞体外侵袭能力.结果:经EGF处理后HepG2细胞可见明显丝状伪足形成,EGF组细胞内Cdc42mRNA及总蛋白(Total-Cdc42)表达量无显著变化,但活性Cdc42(Active-Cdc42)显著增高(0.713±0.021vs0.423±0.015,P<0.05),siRNA干扰组Cdc42表达及活性受到明显抑制(0.118±0.017vs1.128±0.024;0.351±0.021vs0.936±0.024,均P<0.05),并抑制EGF诱导的细胞丝状伪足形成,EGF组细胞体外侵袭能力显著高于其余各组(98.43±3.11vs61.09±3.58,50.53±2.34,62.73±2.64,均P<0.05).结论:EGF通过激活Cdc42诱导HepG2细胞丝状伪足形成并增强其体外侵袭能力.

下调PKR基因对胰腺细胞AR42J增殖、凋亡的影响及机制

目的:探讨下调PKR基因对大鼠胰腺腺泡细胞AR42J增殖、凋亡的影响及机制。方法:利用雨蛙素作用AR42J细胞建立急性胰腺炎细胞模型,在细胞模型中通过慢病毒载体下调PKR基因为实验组,对照病毒转染组为对照组。平板克隆形成和CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,qRT-PCR及流式细胞术分别检测核因子-κB (nuclear factor-κB,NF-κB)通路关键基因表达变化。结果:相较于对照组,实验组中NF-κB通路关键基因NF-κB、肿瘤坏死因了-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、iNOS相对表达量为0.45±0.08、0.26±0.05、0.51±0.25、0.38±0.04,相对表达下降(t=7.64,t=16.41,t=6.67,t=10.15,均P<0.05);实验组细胞克隆数为(275.33±7.02)个,对照组克隆数为(36.00±4.00)个,克隆形成能力明显增强(t=51.29,P=0.00);CCK-8数据:在24 h、48 h、72 h,实验组细胞增殖率为(25.00±3.00)%、(50.33±4.04)%、(62.33±4.51)%,对照组为(12.33±1.53)%、(17.00±1.00)%、(24.00±2.00)%,实验组增殖能力明显增强(t=6.52,t=13.87,t=13.46,均P<0.05)。实验组和对照组中细胞早期凋亡率分别为(6.2±0.6)%和(13.4±0.9)%,实验组凋亡明显减少(t=11.53,P=0.00);晚期凋亡率分别为(4.1±0.2)%和(12.2±0.5)%,实验组凋亡明显减少(t=26.05,P=0.00)。结论:下调PKR基因可以抑制NF-κB通路减缓细胞炎症反应,致AR42J细胞凋亡减少、增殖能力增强。

微小RNA-924靶向调控Cdc42表达及对肝癌细胞迁移和侵袭的影响

目的探讨微小RNA-924(miR-924)对细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)表达的靶向调控及肝癌SK-Hep-1细胞迁移和侵袭的影响。方法采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测肝癌细胞株SK-Hep-1和正常肝细胞株LO2中miR-924的表达情况。采用Lipofectamine 2000向SK-Hep-1细胞转染miR-924模拟物(mimics组)和阴性对照序列(NC组),以不行任何转染的细胞为对照组。采用QPCR检测各组细胞的miR-924水平以评价转染效率,MTT法检测增殖活性,Transwell小室实验和划痕实验评价侵袭和迁移情况,QPCR和Western blotting法检测Cdc42水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-924对Cdc42的靶向调控作用。结果 QPCR检测显示,SK-Hep-1细胞中miR-924的水平为0.198±0.095,低于LO2细胞的1.025±0.135(P<0.05)。对照组、NC组和mimics组的miR-924水平为1.019±0.109、1.078±0.126和2.235±0.265,mimics组的miR-924水平高于对照组和NC组(P<0.05)。与其余两组相比,mimics组SK-Hep-1细胞增殖活力明显减弱,其中转染48～72 h的差异有统计学意义(P<0.05)。对照组、NC组和mimics组的划痕愈合率分别为(50.2±2.6)%、(52.4±3.7)%和(27.1±2.7)%,穿膜细胞数分别为(165.9±8.4)、(172.0±11.2)和(67.5±7.4)个,mimics组的划痕愈合率和穿膜细胞数均低于其余两组(P<0.05)。双荧光素酶报告基因检测实验证实Cdc42是miR-924的直接作用靶点。与其余两组相比,mimics组的Cdc42 mRNA和蛋白水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论低表达的miR-924参与了肝癌的发生、发展,上调其水平可抑制肝癌细胞的增殖活性及侵袭、迁移能力,可能是通过靶向下调Cdc42水平来完成的。

细胞分裂周期蛋白42在神经系统疾病中机制的研究进展

细胞分裂周期蛋白42(CDC42)是一种小GTP酶,在细胞的生长、存活、黏附、增殖和迁移等生理过程中发挥重要作用,这些功能参与了神经系统疾病的发病机制。CDC42在精神分裂症、阿尔茨海默病、癫痫、脑卒中等神经系统常见疾病的发病机制中发挥了重要作用。在精神分裂症中,CDC42可能与背外侧额叶皮质的第3层椎体细胞棘缺失有关; CDC42在额叶皮质功能下调中有必不可少的作用,这可能与阿尔茨海默病的发病机制有关;CDC42的活性降低可能与慢性复发性癫痫的发作减少相关; CDC42还可能通过神经炎症介导了脑卒中引起的脑损伤,这些可能为各种神经系统疾病的诊疗提供新思路。

Bhas 42细胞转化试验高通量检测方法的建立

目的建立基于96孔板的Bhas 42细胞转化试验高通量检测方法,并探讨此方法用于药物非临床阶段体外致癌性评价的前景。方法建立Bhas 42细胞转化试验96孔板高通量检测方法,使用已知阳性诱癌物苯并芘(Benzoapyrene,BaP)和环磷酰胺(Cyclophosphamide,CP)为对照品,比较转化灶人工计数法和过氧化氢高通量96孔板法对结果判定的影响。进行试验的细胞在接种后第19天以一定浓度的过氧化氢处理细胞24 h。24 h后,洗去含过氧化氢的培养基,加入新鲜培养基并加入CCK-8染色孵育2～4 h后测定450 nm波长吸光度以确定细胞转化率。同时,转化灶人工计数法细胞在第21天经甲醇固定,吉姆萨染液染色后计数每孔克隆数,对比两种方法的差异性。结果转化灶人工计数法中,与阴性对照组比较,BaP和CP在启动试验中均被评价为阳性;过氧化氢高通量法得到与转化灶人工计数法相同的结果。结论成功建立了基于96孔板的Bhas 42细胞转化试验的过氧化氢高通量检测方法,该方法相比于传统方法可简单、快速地检测化合物诱导Bhas42细胞的转化效率,并提高了结果评判的客观性。