缝隙连接蛋白43经典与非经典作用在疾病治疗中的潜在价值

背景:缝隙连接蛋白43在维持组织代谢稳态平衡中发挥着重要作用,传统观点认为它参与了缝隙连接过程,为细胞与细胞之间建立直接的物质信号交换通道奠定结构基础。而近年来研究对于其独特的半通道作用提出了新的看法,并发现了其亚细胞定位、自身片段等对于细胞生理活动及病理过程的重要意义。目的:综述数据库中相关文献,系统性总结缝隙连接蛋白43分子特征及在多种细胞表达的研究进展,重点阐述通道依赖性与非通道依赖性缝隙连接蛋白43的生理与病理作用,并探讨其在疾病治疗中的潜在价值。方法:分别设置“gap junction,connexin 43(Cx43),hemichannel,channel-dependent Cx43,channel-independent Cx43,extracellular vesicles(EVs),mitochondria,GJA1-20k”为英文关键词,以“缝隙连接,缝隙连接蛋白43,半通道,通道依赖性Cx43,非通道依赖性Cx43,线粒体,细胞外囊泡,GJA1-20k”为中文关键词,分别在PubMed数据库及中国知网数据库进行文献检索,最终共入选81篇文献进行综述分析。结果与结论:(1)缝隙连接蛋白43的经典作用即构成缝隙连接通道,通道依赖性缝隙连接蛋白43主要可通过直接构成缝隙连接通道参与组织器官的生理或病理过程,应充分关注其结构和功能的完整性,而黏附是缝隙连接的重要特性,与屏障障碍类疾病密切相关。(2)缝隙连接蛋白43的非经典作用即非缝隙连接通道依赖性作用,缝隙连接蛋白43六聚体目前被发现定位于质膜、线粒体内膜和细胞外囊泡表面等结构,参与炎性疾病的正向促炎机制、线粒体功能代谢和细胞外囊泡的靶向摄取等,选择性截短片段则参与全长连接蛋白43靶向转运至胞内各结构域过程,并且通过促使线粒体周围肌动蛋白聚合,调控线粒体稳态。(3)以上两种作用为开发靶向治疗药物及基于组织工程技术的治疗手段中种子细胞转化机制等问题的解决提供了新思路,但现存的一些原始研究常不能全面考虑不同形式缝隙连接蛋白43的相互作用,从而混杂地描述了其总体特征,使得研究结果产生偏差。(4)未来研究需要系统地构架不同形式存在的缝隙连接蛋白43的生理特性及在各疾病中的潜在机制,为缝隙连接蛋白43完整性机制探索及多疾病的诊断和治疗提供参考依据。

布托啡诺通过微小RNA-1-3p(miR-1-3p)上调连接子蛋白43(Cx43)通路减轻SD大鼠缺血性心律失常

目的探讨布托啡诺减轻缺血性心律失常的作用及其对微小RNA 1-3p/连接子蛋白43(miR-1-3p/Cx43)通路的调控作用。方法SD大鼠分为对照组(处理和造模相同但不进行冠状动脉结扎操作)、布托啡诺组(在针穿过心肌表层后股静脉注射50μg/kg布托啡诺)、抑制剂组(实验前5 d经尾静脉给予80 mg/kg的miR-1-3p的抑制物,其他同对照组);模型组(采用结扎法制备大鼠缺血性心律失常模型)、布托啡诺预处理组(在缺血处理前5 min给予50μg/kg的布托啡诺,其他同模型组)、抑制剂预处理组(实验前5 d给予80 mg/kg的miR-1-3p的抑制物,其他同模型组)。根据心电图结果对各组大鼠进行室性心律失常评分,Targetscan数据库预测Cx43的上游微小RNA(miRNA),利用实时定量PCR检测Cx43 mRNA及miR-1-3p水平,Western blot法检测心肌组织中Cx43表达,通过双荧光素酶报告实验验证Cx43 mRNA与miR-1-3p的结合。结果布托啡诺明显降低缺血性心律失常大鼠的室性早搏次数、室性心律失常评分、室颤持续时间、室速持续时间,并且明显提高Cx43蛋白在心肌组织中的表达;随后检测发现miR-1-3p和Cx43 mRNA的3′非翻译区(3′UTR)存在2个结合位点;布托啡诺显著下调心肌组织中miR-1-3p水平;而抑制miR-1-3p水平显著降低缺血性心律失常大鼠的室性心律失常评分的总分,同时显著上调Cx43 mRNA和蛋白的表达。结论布托啡诺通过miR-1-3p介导上调Cx43表达而改善大鼠缺血性心律失常。

左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马血脑屏障精细结构AQP4、Cx43的影响

目的研究左归降糖解郁方(黄芪、贯叶连翘、姜黄、熟地黄、山茱萸等)对糖尿病并发抑郁症大鼠海马血脑屏障精细结构水通道蛋白AQP4和缝隙连接蛋白Cx43表达的影响。方法采用高脂乳剂灌胃、尾静脉注射链脲佐菌素、28 d慢性应激联合的方法复制糖尿病并发抑郁症大鼠模型,并随机分为5组:模型组,阳性药(二甲双胍+盐酸氟西汀)组,左归降糖解郁方高、中、低剂量组,以正常大鼠为空白组,灌胃给药4周。给药后,采用Morris水迷宫测试大鼠空间学习能力,HE染色法观察海马组织病理学,免疫组化法检测海马血脑屏障精细结构AQP4和Cx43表达情况。结果与空白组比较,模型组大鼠逃避潜伏期延长(P<0.01),海马细胞存在明显损伤,AQP4和Cx43表达下降,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,阳性药组和左归降糖解郁方高剂量组大鼠逃避潜伏期缩短,差异有显著统计学意义(P<0.01),海马细胞形态趋于正常,且AQP4和Cx43表达增多,差异有统计学意义(P<0.05)。结论左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠的治疗作用可能与调控海马血脑屏障精细结构AQP4和Cx43表达有关。

羊水过少对妊娠结局及胎盘组织中Cx43、Caspase7蛋白表达的影响

目的探讨羊水过少对母婴妊娠结局的影响,并检测胎盘组织中缝隙连接蛋白43(Cx43)、半胱氨酸肽酶7(Caspase7)蛋白阳性表达情况,分析羊水过少与Cx43、Caspase7蛋白表达之间的关系。方法选择本院2016年1月至2018年12月羊水过少的孕产妇110例作为研究组,选取同期羊水正常的产妇110例作为对照组。记录两组孕产妇围产期结局,观察新生儿不良结局情况,检测胎盘组织中Cx43、Caspase7蛋白表达水平。结果研究组的阴道顺产率(17.27%)显著低于对照组(56.36%)(P<0.05);研究组产妇的剖宫产率、产程异常发生率、新生儿不良结局总发生率分别为74.55%、16.36%、15.45%,显著高于对照组的37.27%、3.64%、5.45%(P<0.05)。研究组产妇胎盘Cx43蛋白阳性率及阳性评分分别为21.45%、(2.42±0.71)分,显著低于对照组的67.64%、(7.69±0.83)分,蛋白表达的阳性程度亦显著低于对照组(P<0.05)。研究组产妇胎盘Caspase7蛋白阳性率及阳性评分分别为65.64%、(7.69±0.83)分,显著高于对照组的18.73%、(2.42±0.71)分,蛋白表达的阳性程度亦显著高于对照组(P<0.05)。结论羊水过少产妇剖宫产率增加,产妇产程异常、新生儿不良结局总发生率上升;产妇胎盘Cx43蛋白表达下调,而Caspase7蛋白表达呈现上升趋势,可能与羊水过少有关。

Cx43、Skp2在卵巢上皮性肿瘤组织中的表达及临床意义

背景与目的:间隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)是间隙连接蛋白家族的主要成员,在多种肿瘤细胞中表达下降。它在许多细胞系以依赖间隙连接(Gapjunction)的途径发挥抑癌作用。最近研究发现它还可能通过抑制S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase associated protein2,Skp2)的表达而起到抑制肿瘤生长的作用。Skp2是F鄄box蛋白家族的成员,它能特异性识别并促进某些调节G1期进程的关键性细胞周期调节物的降解,在许多肿瘤中表达升高。本研究检测Cx43和Skp2在卵巢上皮性肿瘤中的表达,探讨它们的表达与卵巢癌发展的关系,以及这两种蛋白表达的相互关系。方法:收集81例卵巢上皮性肿瘤的外科手术石蜡标本(良性13例、交界性12例、恶性56例),用免疫组化的方法检测Cx43和Skp2蛋白的表达水平。分析它们的表达水平与临床病理参数的关系以及二者的相互关系。结果:Cx43蛋白在卵巢上皮性良性、交界性及恶性肿瘤中阳性率分别为84.6%、66.7%和33.9%,经免疫组化半定量分析,其在上皮性卵巢癌中的表达水平明显低于良性肿瘤(P<0.01)和交界性肿瘤(P<0.01),在不同年龄及组织类型的卵巢癌中表达无显著性差异(P>0.05),而在中低度分化组、Ⅲ～Ⅳ期组及有淋巴结转移组分别明显低于高分化组(P<0.05)、Ⅰ～Ⅱ期组(P<0.05)及无淋巴结转移组(P<0.

Cx43通过P38/MAPK信号途径增强膀胱癌细胞的侵袭能力

目的:探讨连接蛋白43(connexin 43,Cx43)对膀胱癌细胞侵袭能力的影响及其可能的作用机制。方法:选取2014年6月至2015年9月间承德医学院附属医院泌尿外科52例膀胱癌手术组织标本及32例癌旁组织,以及人膀胱癌细胞株5637。用免疫组化方法检测膀胱癌组织中Cx43蛋白表达。将Cx43脂质体、空白脂质体、siRNA及siRNA对照质粒转染5637细胞,Western blotting验证过Cx43表达和干扰效果;用Transwell侵袭实验检测5637细胞侵袭能力的变化,用Western blotting检测5637细胞MMP-2、MMP-9和P-P38蛋白表达水平的变化。结果:膀胱癌组织中Cx43蛋白的表达水平明显高于癌旁组织[(5.21±0.33)vs(2.84±0.19),P<0.01]。转染Cx43脂质体和siRNA成功上调/下调5637细胞中Cx43的表达。Cx43过表达组5637细胞的侵袭能力高于对照组[穿膜细胞数:(1.36±0.04)vs(0.70±0.15)个,P<0.01],siRNA干扰组细胞的侵袭能力低于对照组[穿膜细胞数:(0.20±0.08)vs(0.59±0.13)个,P<0.05)。Cx43过表达组细胞MMP-2、MMP-9、P-P38/P38蛋白水平均高于对照组(P<0.01或P<0.05),siRNA干扰组均低于对照组低(均P<0.01)。结论:Cx43增强膀胱癌5637细胞的侵袭能力,其机制可能是通过激活P38/MAPK信号途径实现的。

尼古丁上调Cx43致C57BL/6J小鼠肺动脉肌源性异常实验研究

目的探讨缝隙连接蛋白connexin 43(Cx43)在尼古丁致C57BL/6J小鼠肺动脉肌源性异常中的作用机制。方法将C57BL/6J小鼠随机分成4组,每组12只,分别为空白对照组(正常饮水、摄食)、0.003 mg/kg尼古丁组[腹腔注射尼古丁0.003 mg/(kg·d)]、0.03 mg/kg尼古丁组[腹腔注射尼古丁0.03 mg/(kg·d)]和0.3 mg/kg尼古丁组[腹腔注射尼古丁0.3 mg/(kg·d)]。干预时间为24周。利用微血管张力测定检测各组小鼠离体肺动脉对不同浓度梯度氯化钾KCl(20、28、39、55、77和108 mmol/L)和U46619(3×10^(-8)、10^(-7)、3×10^(-7)、10^(-6)、3×10^(-6) mol/L)的收缩反应,以及对不同浓度硝普钠SNP(10^(-8)、3×10^(-8)、10^(-7)、3×10^(-7)、10^(-6) mol/L)和吡那地尔Pina(10^(-8)、3×10^(-8)、10^(-7)、3×10^(-7)、10^(-6) mol/L)的舒张反应。HE特染观察各组小鼠肺动脉重构程度。免疫荧光检测各组小鼠肺动脉Cx43表达水平。RT-PCR和Western blot测定小鼠肺动脉Cx43的mRNA和蛋白表达水平。结果离体血管张力测定结果显示,与空白对照组相比较,分别使用0.003、0.03和0.3 mg/(kg·d)尼古丁干预C57BL/6J小鼠24周后,小鼠离体肺动脉对浓度梯度KCl和U46619的最大收缩反应均呈现不同程度的增强(P<0.05);同时小鼠离体肺动脉对浓度梯度SNP和Pina的最大舒张反应却呈现不同程度的减弱(P<0.05)。0.003、0.03和0.3 mg/(kg·d)尼古丁组肺动脉重构程度呈现浓度依赖性增加,且Cx43的免疫荧光蛋白表达均显著高于空白对照组。RT-PCR和Western blot实验结果显示,0.003、0.03和0.3 mg/kg尼古丁组肺动脉Cx43 mRNA和蛋白表达均显著高于空白对照组(P<0.05)。结论尼古丁可造成C57BL/6J小鼠肺动脉肌源性反应异常,其机制可能与上调Cx43表达有关。

CRH对人子宫平滑肌细胞Cx43磷酸化水平及细胞间隙连接通讯的影响

目的:探讨人类促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)对人子宫平滑肌细胞间隙连接蛋白43磷酸化水平(P-Cx43)以及其对子宫平滑肌细胞间隙连接通道(GJIC)功能的影响。方法:原代培养人未孕子宫平滑肌细胞,给予不同浓度的CRH(0,5.85,58.5,585,5850 pmol/L)进行干预,采用Western印迹分别定量检测CRH各浓度组中子宫平滑肌细胞P-Cx43与非磷酸化Cx43蛋白(NP-Cx43)的表达;细胞划痕实验检测CRH各浓度组中GJIC的变化。结果:CRH各干预组子宫平滑肌细胞中P-Cx43蛋白的表达明显高于对照组,随着CRH干预浓度的递增,呈剂量依赖趋势,各组之间差异有统计学意义(P<0.01);而对照组和干预组之间NP-Cx43蛋白的表达差异无统计学意义(P>0.05);CRH干预后各浓度组荧光黄染料在子宫平滑肌细胞中传输的细胞数明显高于对照组,各组之间比较差异有统计学意义(P<0.01)。同时,随着CRH干预浓度的递增,荧光黄染料传输至最远细胞级所需要的时间呈剂量依赖趋势,各组之间比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:CRH可上调原代子宫平滑肌细胞中P-Cx43蛋白的表达,增强GJIC的功能。

VSMC-Cx43^(-/-)条件性基因敲除小鼠模型的构建及基因型鉴定

目的应用CRISPR-Cas9技术和LoxP-Cre系统构建血管平滑肌缝隙连接蛋白Cx43条件性基因敲除小鼠(VSMC-Cx43^(-/-))模型。方法采用受精卵同源重组的方式,对Gja1基因进行flox修饰。通过体外转录的方式,获得Cas9 mRNA和gRNA;通过In-Fusion cloning的方法构建同源重组载体,该载体包含3.0 kb 5’同源臂、1.9 kb的flox区域和3.0 kb 3’同源臂。将Cas9 mRNA、gRNA和donor vector显微注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中,获得F0代小鼠。PCR扩增及测序鉴定阳性的F0代小鼠与C57BL/6J小鼠交配获得3只阳性F1代小鼠(Cx43^(flox/+))。将获得的flox杂合子Cx43^(flox/+)小鼠自交,获得flox纯合子Cx43^(flox/flox)小鼠。然后用Cx43^(flox/flox)小鼠和Myh11-CreERT2小鼠交配,最终获得flox纯合且Cre阳性的实验组小鼠(该小鼠简写为:VSMC-Cx43^(-/-))和flox纯合且Cre阴性的对照组小鼠(Cx43^(flox/flox))。用PCR进行基因型鉴定,用Western blot技术检测Cx43在大脑中动脉、冠脉、肺动脉和肾动脉组织中的表达,以明确基因敲除小鼠是否构建成功。结果基因型鉴定、免疫荧光和Western blot检测结果表明VSMC-Cx43^(-/-)基因敲除小鼠模型构建成功,小鼠一般性状无改变,小鼠大脑中动脉、冠脉、肺动脉和肾动脉组织中Cx43蛋白表达均下降。因此,可作为长期稳定模型研究血管平滑肌Cx43的功能。结论应用CRISPR-Cas9技术和LoxP-Cre系统成功构建了VSMC-Cx43^(-/-)基因敲除小鼠模型,为深入研究Cx43在血管疾病中的作用提供工具。

血管紧张素Ⅱ上调连接子蛋白43(Cx43)促进人肺动脉平滑肌细胞的增殖和迁移

目的以人肺动脉平滑肌细胞(HPASMC)为研究对象,探讨连接子蛋白43(Cx43)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的细胞增殖、迁移的影响。方法体外培养的对数生长期HPASMC,分为对照组、AngⅡ处理组、AngⅡ联合二甲基亚砜(DMSO)处理组及AngⅡ联合坎地沙坦处理组。采用CCK-8法检测HPASMC增殖,TranswellTM小室检测HPASMC的迁移能力,划痕实验检测其迁移能力;Western blot法检测HPASMC的Cx43蛋白及其磷酸化、骨桥蛋白(OPN)、增殖细胞核抗原(PCNA)、SMAD家族成员2(SMAD2)、SMAD3的蛋白水平。结果与对照组相比,AngⅡ处理组OPN、PCNA蛋白表达增加,细胞增殖和迁移能力增强;与AngⅡ处理组相比,AngⅡ联合坎地沙坦处理组细胞的增殖和迁移能力降低。与对照组相比,AngⅡ处理组Cx43蛋白及其磷酸化水平均明显增加,SMAD2、SMAD3的蛋白表达增加,而AngⅡ联合坎地沙坦组各蛋白表达较AngⅡ组均明显降低。结论AngⅡ上调Cx43蛋白的表达促进HPASMC增殖和迁移,可能与激活SMAD2/3信号通路有关。

血管紧张素Ⅱ通过激活连接子蛋白43(Cx43)诱导小鼠巨噬细胞M1型极化

目的观察连接蛋白43(Cx43)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的小鼠RAW264. 7单核巨噬细胞M1型极化中的影响。方法将RAW264. 7巨噬细胞分为对照组、AngⅡ处理组和Cx43特异性阻断剂Gap26预处理组,其中AngⅡ处理组给予10^(-6)mol/L AngⅡ作用12 h,Gap26预处理组先给予10^(-5)mol/L Gap26预处理30 min,再给予10^(-6)mol/L AngⅡ作用12 h。实时定量PCR检测M1型标志分子CD86、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA水平,Western blot法检测巨噬细胞上Cx43、CD86、iNOS的蛋白水平,激光共聚焦显微镜观察巨噬细胞CD86、iNOS表达和共定位。结果与对照组相比,AngⅡ处理组CD86、iNOS及TNF-α水平显著升高;与AngⅡ处理组相比,Gap26预处理后CD86、iNOS及TNF-α的水平明显降低,但仍高于对照组。CD86主要表达于细胞膜上,iNOS则在全细胞均有表达。结论 AngⅡ可以诱导小鼠巨噬细胞向M1型极化,Cx43特异性阻断剂Gap26对AngⅡ诱导的M1型极化具有抑制作用。

阻断连接子蛋白43(Cx43)抑制脂多糖诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞M1型极化

目的研讨连接子蛋白43(Cx43)在脂多糖(LPS)诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞M1型极化中的作用。方法将体外培养的小鼠RAW264.7巨噬细胞分为对照组、LPS组、LPS联合Cx43阻断剂模拟肽19(Gap19)或模拟肽26(Gap26)预处理组(LPS联合Gap19组、LPS联合Gap26组)。Western blot法检测小鼠RAW264.7巨噬细胞Cx43和M1型极化标志物CD86、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的蛋白水平,免疫荧光细胞化学染色观察CD86在RAW264.7巨噬细胞的表达和定位,流式细胞术检测小鼠RAW264.7巨噬细胞M1型极化标志物CD86的表达频数。结果与对照组相比,LPS组中CD86、iNOS和Cx43的蛋白表达明显升高,CD86的表达频数明显升高;与LPS组相比,在LPS联合Gap19组和LPS联合Gap26组中CD86和iNOS的蛋白表达均显著降低,CD86的表达频数均显著降低。因此,LPS可以诱导小鼠RAW264.7巨噬细胞向M1型极化,而Gap19和Gap26能够降低M1型极化标志物的表达。结论通过阻断Cx43可以抑制巨噬细胞M1型极化。

Cx43及GLT-1对三叉神经痛大鼠疼痛行为学变化的调控作用

目的:研究大鼠三叉神经痛模型中缝隙连接蛋白43(connexin-43,Cx43)和谷氨酸转运体-1(glutamate transporter-1,GLT-1)表达的变化,探讨Cx43和GLT-1与三叉神经痛大鼠疼痛行为的关系。方法:将42只SD大鼠随机分为正常组(N)、假手术组(S)、模型组(ION-CCI)、ION-CCI+生理盐水1组(NS1)、ION-CCI+Gap26组(Gap26)、ION-CCI+生理盐水2组(NS2)、ION-CCI+头孢曲松组(Cef),每组6只。用铬肠线疏松结扎大鼠眶下神经建立三叉神经痛动物模型;造模成功后,相应组于术后第8天分别腹腔注射Gap26、头孢曲松或生理盐水;假手术组仅暴露神经,不结扎。于术前1天,术后1、3、5、7、9、11、14天行机械痛阈值及视频行为学检测。术后第15天取三叉神经脊束核,应用蛋白质印迹检测Cx43和GLT-1蛋白表达水平。结果:腹腔注射Gap26或头孢曲松可提高三叉神经痛大鼠的机械痛阈值(P<0.001),减少其抓脸次数(P<0.001)。术后第15天,ION-CCI、NS1及NS2组大鼠较N组及S组大鼠相比,Cx43表达明显增加(P<0.01),GLT-1表达明显减少(P<0.001);Gap26组大鼠较ION-CCI、NS1组大鼠相比,Cx43表达减少(P<0.05),GLT-1表达增加(P<0.01);Cef组大鼠较ION-CCI、NS2组大鼠相比,GLT-1表达增加(P<0.001),Cx43表达无明显差异。结论:腹腔注射Gap26或头孢曲松可改变三叉神经痛大鼠疼痛行为并改变三叉神经脊束核中Cx43和GLT-1的表达,提示Cx43和GLT-1参与了三叉神经痛大鼠疼痛行为的变化。

间隙连接蛋白43(Cx43)在皮肤伤口愈合中的作用

间隙连接(gap junction,GJ)是细胞膜上的通道结构,其介导的细胞间间隙连接通讯(gap junction intercellular communication,GJIC)对内环境的稳定、细胞生长调控及新陈代谢等起到重要的作用。间隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)是哺乳动物细胞中分布最为广泛的间隙连接蛋白,越来越多的研究发现皮肤创伤后Cx43的表达会随着伤口愈合的过程发生动态变化,并影响伤口愈合的速率和质量,人为调控Cx43的表达水平会改善伤口愈合的速率和质量。主要就Cx43结构与功能、Cx43的水平对伤口愈合各阶段的影响及Cx43与慢性伤口的关系进行总结,以期为探索皮肤创伤,尤其是慢性伤口治疗新途径提供参考价值。

连接子蛋白43(Cx43)抑制氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的大鼠胸主动脉平滑肌细胞自噬

目的探讨连接子蛋白43(Cx43)在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)自噬中的作用。方法采用α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫荧光细胞化学染色鉴定原代VSMC,ox-LDL处理后,采用油红O染色鉴定泡沫细胞;Western blot法检测(0、40、80、160)μg/mL ox-LDL处理0、6、12、24 h,VSMC中微管相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白的表达以及80μg/mLox-LDL干预24 h,Cx43蛋白的表达;将VSMC随机分为对照组、ox-LDL组和ox-LDL联合Cx43特异性阻断剂Gap26组,Western blot法检测各组细胞LC3、beclin 1的表达。结果分离的细胞α-SMA阳性率达95%以上,与对照组相比,ox-LDL处理的细胞油红O阳性细胞明显增加,ox-LDL呈浓度依赖及时间依赖地降低LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值及beclin 1蛋白表达,Cx43蛋白的表达明显升高;给予Gap26后,可上调LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值及beclin 1蛋白表达。结论Cx43抑制ox-LDL引起的自噬。

硫氢化钠抑制大鼠外周血淋巴细胞TNF-α和IL-6的释放并下调连接子蛋白40(Cx40)和Cx43水平

目的探讨硫氢化钠(NaHS)对淋巴细胞连接子蛋白40(Cx40)和Cx43表达及肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)释放的影响。方法选取清洁级Wistar京都(WKY)大鼠6只,采集腹主动脉外周血;密度梯度法分离淋巴细胞,分为对照组、伴刀豆球蛋白A (ConA)组、ConA联合NaHS组。ELISA检测培养细胞上清中IL-6和TNF-α的水平,免疫荧光染色技术检测淋巴细胞Cx40、Cx43表达和定位,流式细胞术检测淋巴细胞Cx40、Cx43表达频数,Western blot法检测淋巴细胞Cx40、Cx43的蛋白水平。结果与对照组相比,ConA组IL-6和TNF-α水平升高,ConA联合NaHS组较ConA组降低; Cx40主要表达在细胞质和细胞核,而Cx43主要表达在细胞膜上;与对照组相比,ConA组淋巴细胞Cx40和Cx43表达均明显增强、Cx40和Cx43表达频数及蛋白水平均升高;与ConA组相比,ConA联合NaHS组淋巴细胞Cx40和Cx43表达均降低、Cx40和Cx43表达频数及蛋白水平均降低。结论 NaHS处理抑制ConA处理引起的TNF-α和IL-6释放,下调淋巴细胞上Cx40和Cx43的表达。

缝隙连接蛋白43(Cx43)与神经炎症的研究进展

缝隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)是中枢神经系统(central nervous system,CNS)中含量最丰富的连接蛋白,主要分布于星形胶质细胞,以缝隙连接(gap junction,GJ)和半通道(hemichannel,HC)的形式存在,分别介导细胞间和细胞与外环境间的信息交流。随着人口的老龄化,阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)、脑卒中及术后认知功能障碍等疾病的发生率越来越高,神经炎症是这些CNS疾病的一个共同特征,涉及到白细胞聚集、胶质细胞激活、炎性因子释放等,该过程需要高效的信息交流,研究表明Cx43在该过程中发挥着不可忽视的作用,主要表现为GJ抑制和HC活性增加并影响神经功能。本文重点综述Cx43与神经炎症的关系,为多种CNS疾病的治疗提供新的靶点。

心肌病猝死者心肌连接蛋白43的免疫组化染色观察

目的探讨心肌病猝死者心肌连接蛋白43(Cx43)染色变化及其与猝死的关系。方法运用免疫组化和图像分析技术,分2组(A和B组)检测20例心肌病猝死者心室肌的Cx43染色情况;并与14例非心肌病猝死者(C组)的检测结果对照。结果扩张型心肌病(DCM)猝死组(A组,11例)心肌Cx43染色明显减弱,阳性着色斑点大小不等、深浅不一、分布不均,有的呈散在颗粒状;其它类型的心肌病猝死组(B组,9例)亦见类似变化;非心肌病猝死的对照组(C组,14例)未见明显变化。定量检测并经统计分析发现,Cx43蛋白染色阳性的面积,A组与B组和C组的差异有非常显著性意义(P<0.01),B组与C组的差异无显著性意义(P>0.05);而平均光密度各组之间的差异无显著性意义(P>0.05)。结论心肌病猝死者心肌Cx43免疫组化染色明显减弱,尤以扩张型心肌病明显;心肌病猝死者心肌Cx43变化可能与其猝死有一定关系。

胃癌组织中间隙连接超微结构改变及间隙连接蛋白-43的表达及其意义

目的观察胃癌组织中间隙连接结构的改变,并检测Cx43蛋白及m RNA在组织中的表达,为胃癌的发病机制研究提供新的思路,同时也为药物治疗提供潜在的作用靶点。方法通过透射电子显微镜技术观察正常胃与胃癌组织中间隙连接的变化;利用Western blot和RT-PCR技术检测Cx43在正常胃与胃癌组织中的表达水平。结果胃癌组织超微结构中细胞间隙连接破坏,分化越差破坏越严重,在正常胃组织中Cx43蛋白及m RNA的表达高于胃癌组织中的表达(P<0.05),在胃癌组织中高-中分化者Cx43蛋白及m RNA表达高于低分化者(P<0.05),胃癌组织中TNM分期Ⅰ/ⅡCx43蛋白及m RNA表达高于Ⅲ/Ⅳ期的表达(P<0.05),胃癌组织中浸润深度未侵及浆膜层者Cx43蛋白及m RNA的表达高于侵及浆膜层者(P<0.05),胃癌组织中无淋巴结转移者Cx43蛋白及m RNA的表达高于有淋巴结转移者(P<0.05),Cx43蛋白及m RNA在不同年龄和性别组中的表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论间隙连接超微结构的改变同Cx43蛋白及m RNA的异常表达与胃癌的发生、发展有关,这为胃癌的发病及靶向治疗提供了新的方向。

成人心脏传导系统中连接蛋白43的表达

目的 探讨成人心脏及传导系统窦房结 ,房室结 ,浦肯野纤维中连接蛋白 4 3(CX4 3)的表达情况。 方法 免疫组织化学SABC法。 结果 CX4 3在窦房结及房室结周围细胞膜呈散在、少量表达 ,在浦肯野细胞膜可见线性、细长阳性颗粒 ,在心房及心室肌阳性颗粒主要位于端端相连部位的闰盘处。 结论 CX4 3在传导系统的表达与心脏传导系统的电生理传导特性相符。