黄颡鱼脑P-450芳香化酶基因的克隆和组织表达

P-450芳香化酶(P450arom)是催化雄激素生物合成雌激素的关键酶.本文采用RT-PCR和RACE法,首次分离和克隆了黄颡鱼脑P450 芳香化酶基因HP450aromB, 并使用荧光实时定量RT-PCR对其组织表达进行了研究.结果表明HP450aromB cDNA全长2080 bp(不包括poly(A)), 5′端非翻译区有25 bp,3′端555 bp(不包含poly(A)),阅读框(open reading frame, ORF)1500 bp,编码 500个氨基酸,推测的蛋白质分子量为56 kDa.同源性分析显示,HP450aromB的氨基酸序列与其它鱼脑P450arom具有70%以上的同源性,与其它鱼卵巢P450arom为60%左右同源,与人胚盘和鸡卵巢P450arom 则为50%左右同源;但芳香化酶高保守区包括I-螺旋区,芳香化酶特异保守区II及血红素结合区III和其它鱼芳香化酶相比同源性分别为83%～96%,78%～86%和85%～100%.系统发育分析表明HP450aromB与鱼类脑P450arom属于同一分支的,并且也显示了黄颡鱼和鲶鱼分类地位最近,这和传统的分类一致.实时定量RT-PCR研究显示,HP450arom B在前脑,下丘脑,垂体、卵巢、精巢均有表达,在肝脏没表达,表达量脑部高于性腺,但雌雄鱼脑部HP450arom B的表达总量没显著差异.

绝经后子宫肌瘤中芳香化酶P450的表达及意义

目的:探讨芳香化酶P450(P450arom)在绝经后子宫肌瘤中的表达及其在子宫肌瘤发病中的作用。方法:选取100例子宫肌瘤患者,其中绝经后非萎缩性组40例,绝经后萎缩性组20例,绝经前增生期组20例,分泌期组20例。术前测定血清中雌二醇(E2)含量,术中取肌瘤及其相应肌层组织作免疫组织化学染色,检测P450arom的表达。结果:绝经后非萎缩性组与萎缩性组两组血清E2含量相比,差异无统计学意义(P>0.05)。P450arom在绝经后非萎缩性组、增生期及分泌期组肌瘤中的表达水平相比,差异无统计学意义(P>0.05),但均显著高于其相应肌层组织及绝经后萎缩性组(P<0.01);而P450arom在绝经后萎缩性组中的肌瘤表达水平与相应肌层组织相当,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:P450arom在绝经后非萎缩性肌瘤中过度表达,可能导致雌激素原位合成增加,使其不萎缩或继续生长。

芳香化酶P450、ERβ在宫颈癌组织的表达及临床意义

目的探讨芳香化酶P450、ERβ在正常宫颈组织、宫颈癌组织及癌周组织的表达差异,进而探讨其临床意义。方法对西安交通大学医学院第二附属医院2004年至2008年手术切除的正常宫颈组织、宫颈癌组织及癌周组织存档蜡块标本各30例,用免疫组化SP法检测其表达。结果芳香化酶P450在正常宫颈组织、癌周组织和宫颈癌组织的表达率分别为0%(0/30)、0%(0/30)和36.7%(11/30),经比较有显著性差异(P<0.05),而正常宫颈组与癌周组织组的表达无显著性差异(P>0.05)。ERβ在正常宫颈组织、癌周组织和宫颈癌组织的表达率分别为73%(22/30)、70%(21/30)和36.7%(11/30),相比较有显著性差异(P<0.05),而正常宫颈组织与癌周组织的表达无显著性差异(P>0.05)。结论芳香化酶P450在宫颈癌组织的阳性表达可能参与宫颈癌的发生;ERβ在宫颈癌组织的阳性表达率低,可作为预测宫颈癌变及宫颈癌预后良好的一项参考指标。

芳香化酶P450及雌激素和孕激素受体在子宫内膜癌发生发展过程中的表达及意义

目的:探讨芳香化酶P450及雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)在子宫内膜增生症及内膜癌组织中的表达,分析与子宫内膜癌发生机制、临床分期、细胞分化的相关性。方法:应用SP免疫组化法对子宫内膜单纯性增生52例、复杂性增生38例、不典型增生36例、内膜样腺癌58例患者的芳香化酶P450表达及ER、PR进行检测,并以42例正常增生期子宫内膜作为对照。结果:正常增生期子宫内膜无芳香化酶P450的表达,而在单纯性增生、复杂性增生、不典型增生的子宫内膜组织、内膜样腺癌组织中芳香化酶P450的表达均为阳性,表达率分别为40.4%、47.4%、69.4%和72.4%,与正常增生期子宫内膜相比差异有统计学意义;不典型增生与内膜样癌相比差异无统计学意义。正常增生期子宫内膜、子宫内膜单纯性增生、复杂性增生、不典型增生、内膜样腺癌的ER阳性表达率分别为59.5%、61.5%、57.5%、61.1%和60.3%,PR阳性表达率分别为73.8%、73.1%、73.7%、72.2%和74.1%,各组间无统计学差异,且与芳香化酶P450的表达无相关性。芳香化酶P450在子宫内膜癌不同临床分期、不同分化级别中的表达差异无统计学意义。结论:芳香化酶P450的不同表达与子宫内膜增生、癌变的发生发展有相关性,是子宫内膜发生不典型增生和癌变的促进因素之一。

韩氏内异止痛汤对子宫内膜异位症大鼠模型雌二醇和芳香化酶P450表达的影响

目的观察韩氏内异止痛汤对EMs大鼠异位内膜组织病理学改变的影响,探索雌二醇(E2)、雌激素受体(ER)、芳香化酶P450,阐明韩氏内异止痛汤抑制异位子宫内膜增生的机制。方法采用自体移植法建立EMs大鼠模型,选取57只SD大鼠进行自体移植手术,并于手术后4周第2次剖腹,观察异位内膜病灶形态变化,将造模成功的40只EMs大鼠随机分为内异止痛汤高剂量组、内异止痛汤低剂量组、达那唑阳性药物组和模型对照组,每组10只,另设假手术组8只。各组大鼠分别给予对应的药物及生理盐水灌胃,治疗4周后处死并取其异位内膜组织及血清。应用酶联免疫法(ELISA)检测各组大鼠给药后血清中E2以及异位内膜组织匀浆液中ER和芳香化酶P450的变化。结果对各组大鼠治疗4周后剖腹观察发现,各治疗组子宫内膜异位病灶的体积比治疗前明显缩小,模型组治疗前后子宫内膜异位病灶的体积无明显变化。酶联免疫法结果显示,各药物治疗组大鼠经治疗后,与模型组比较,E2、ER和芳香化酶P450含量明显降低。与中药低剂量组相比,中药高剂量组对EMs模型大鼠血清E2及异位组织中ER和芳香化酶P450含量降低更为显著(P <0.05)。结论韩氏内异止痛汤可有效下调EMs模型大鼠血清雌激素E2和组织雌激素受体水平,从而使阻断了雌激素受体作为信号传导者与雌激素结合活化及其与雌激素效应元件(ERE)结合,使异位病灶细胞生长和增殖得到抑制。

中药益坤宁方调节围绝经期大鼠卵巢细胞色素P450芳香化酶mRNA的实验研究

目的：探讨细胞色素P450芳香化酶（aromatase cytochrome P450,P450arom）mRNA在围绝经期自然老化大鼠卵巢上的表达及意义。方法：选用11-13月龄雌性围绝经期Wistar大鼠32只。随机将其分为模型组、益坤宁组、西药对照组。另选青年大鼠10只,月龄4个月,作为青年对照组,用原位杂交方法检测大鼠卵巢上的P450arom mRNA的表达。结果：P450arom mRNA在模型组卵巢上呈阴性或弱阳性表达,在青年组呈强阳性表达,两组比较差异有统计学意义（P〈0.01）。而在益坤宁组及西药对照组均呈阳性表达,与模型组比较差异均具有统计学意义（P〈0.01）。结论：中药益坤宁可促进大鼠卵巢P450arom mRNA的表达,有利于雌激素的合成。

异位子宫内膜芳香化酶P450A的表达及其意义

目的研究异位子宫内膜及在位内膜P450芳香化酶mRNA表达,探讨其在子宫内膜异位症发病中的作用和临床意义。方法采用逆转录聚合酶联反应(RT-PCR)技术检测45例卵巢异位子宫内膜、22例盆腹膜子宫内膜异位病灶、32例在位内膜和35例对照组子宫内膜中P450芳香化酶(P450A)mRNA的表达。结果67例异位内膜均有P450A mRNA的表达,在卵巢异位子宫内膜和盆腹膜异位子宫内膜组间其表达无显著性差异(P>0.05);异位子宫内膜P450A mRNA表达量均高于在位内膜(P<0.01);35例对照组子宫内膜几乎无表达。结论正常子宫内膜无P450A表达,但子宫内膜异位症患者的在位内膜有P450A,而异位子宫内膜则呈P450A高表达。提示异位子宫内膜局部存在异常雌激素合成;在位内膜本身的保护机制劣于正常内膜。

益坤宁对围绝经期大鼠卵巢细胞色素P450芳香化酶的调节作用和血清雌二醇水平的影响

目的:观察中药益坤宁方对围绝经期大鼠卵巢细胞色素P450芳香化酶(Aromatase cytochrome P450,P450arom)的调节作用。方法:建立自然衰老的大鼠模型,将模型分为青年对照组、模型组、益坤宁组和西药对照组4组,益坤宁组和西药对照组分别给予中药益坤宁汤剂和西药利维爱混悬液治疗。4周后,采用免疫组织化学及Western Blot方法检测大鼠卵巢P450arom蛋白表达情况;采用放射免疫法测定大鼠空腹血清雌二醇(E2)水平。结果:P450arom蛋白在益坤宁组大鼠卵巢上均多呈阳性表达,与模型组比较均具有显著性差异(P<0.01);与西药对照组比较差异不具有统计学意义(P>0.05)。益坤宁组大鼠空腹血清雌二醇(E2)水平升高,与模型组比较差异显著(P<0.01),与西药对照组比较差异不具统计学意义(P>0.05),但其E2水平仍然低于青年对照组,差异具有显著性(P<0.05)。结论:中药益坤宁可促进围绝经期大鼠卵巢P450arom蛋白的表达。中药益坤宁可提高大鼠血清雌二醇(E2)的水平。中药益坤宁可通过促进卵巢P450arom的表达而利于雌激素的生成。

芳香化酶P450A在子宫内膜异位症中的表达及其作用

目的:检测P450芳香化酶(P450A)蛋白和mRNA在子宫内膜异位症中的表达,并探讨其在发病中的作用。方法:采用逆转录聚合酶联反应(RT-PCR)和免疫组化技术检测45例卵巢巧克力囊肿的囊壁(巧囊组)、32例卵巢内异症的在位内膜(在位内膜组)和35例正常子宫内膜(正常对照组)中P450AmRNA及蛋白的表达。结果:巧囊组P450A mRNA表达量高于在位内膜组(P<0.01);35例正常子宫内膜中仅有2例呈阳性表达;免疫组化检测巧囊壁P450A蛋白其表达特征与mRNA一致。结论:子宫内膜异位症异位灶中有P450A表达,这种雌激素的合成酶能在异位灶局部合成异常的雌激素;卵巢内异症的在位内膜有P450A表达,提示在位内膜本身局部有雌激素的合成,其保护机制劣于正常内膜。子宫内膜异位症中P450A的表达在其发病中起到重要作用。

橘荔散结丸对子宫肌瘤组织芳香化酶P450表达影响*

目的:探讨橘荔散结丸对子宫肌瘤组织P450arom表达的影响,进一步明确P450arom的表达与子宫肌瘤发生的相关性。方法:将40例患者分为2组,服用橘荔散结丸(主要由橘核、荔枝核、续断、小茴香等组成)治疗3个月(一个疗程)后有手术指征且要求手术者20例为治疗组,未曾服用中西药物治疗而要求手术者20例为对照组。采用放射免疫法检测两组子宫肌瘤组织及周围正常子宫肌层组织P450arom水平。结果:两组子宫肌瘤组织和子宫肌层组织均存在P450arom表达,且子宫肌瘤组织P450arom水平均高于肌层组织(P<0.01);而治疗组肌瘤组织P450arom显著低于对照组(P<0.01);两组子宫肌层组织P450arom比较无统计学意义(P>0.05)。结论:子宫肌瘤发生与肌瘤组织局部P450arom高表达相关;降低子宫肌瘤患者瘤体组织中P450arom水平可能是橘荔散结丸治疗子宫肌瘤的主要机理之一。

芳香化酶细胞色素P450及CA_(125)联合检测对子宫内膜异位症的诊断价值

目的:探讨子宫内膜芳香化酶细胞色素P450(简称芳香化酶P450),CA125联合检测对子宫内膜异位症(简称内异症)的诊断价值。方法:36例经腹腔镜检或开腹手术证实为内异症的患者为研究组,22例非内异症的不孕或盆腔疼痛妇女为对照组。化学发光法测定血CA125值。术中取子宫内膜,应用免疫组织化学方法,检测芳香化酶P450在上述妇女子宫内膜的表达情况。结果:血CA125值测定用于诊断内异症的敏感性为44%,特异性为82%,阳性预测值为80%,阴性预测值为47%;子宫内膜芳香化酶用于诊断内异症的敏感性为83%,特异性为86%,阳性预测值为91%,阴性预测值为76%;免疫组织化学方法检测芳香化酶P450联合血CA125用于诊断内异症的敏感性为91.7%,特异性为68.2%。结论:子宫内膜芳香化酶及CA125联合检测对内异症诊断价值高,尤其对于早期内异症患者,明显优于血CA125值测定。

芳香化酶P450与环氧化酶-2在子宫内膜异位症和子宫腺肌病中的表达及意义

目的研究细胞色素芳香化酶P450(P450arom)和环氧化酶-2(COX-2)在子宫内膜异位症(EMs)和子宫腺肌病(AM)在位和异位内膜中的表达及相关性。方法应用免疫组化Envision法和半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测正常子宫内膜、EMs及AM的在位和异位内膜中P450arom及COX-2的蛋白与mRNA的表达,并进行相关性分析。结果P450arom和COX-2在正常子宫内膜中无表达或弱表达,二者在EMs和AM在位和异位内膜中的表达均高于正常子宫内膜,差异均有显著性意义(P<0.05)。P450arom与COX-2在EMs和AM异位内膜中的表达均高于在位内膜,差异均有显著性意义(P<0.05)。P450arom在EMs和AM增殖期和分泌期表达无差异(P>0.05)。COX-2在正常子宫内膜、EMs分泌期表达高于增殖期,差异均有显著性意义(P<0.05),在AM表达不随月经周期变化。P450arom mRNA与COX-2mRNA在EMs中的表达水平呈正相关(r=0.964,P<0.01);在AM中的表达水平亦呈正相关(r=0.813,P<0.01)。结论P450arom和COX-2在EMs和AM中呈过表达,与EMs和AM的发病相关,二者协同作用促进EMs和AM的发生发展。

芳香化酶P450在子宫内膜增殖及癌变组织中的表达及意义

目的探讨芳香化酶P450在子宫内膜增殖、非典型增殖及癌变组织中的表达。方法应用免疫组织化学SP法对子宫内膜增殖、非典型增殖及癌变子宫内膜(观察组)148例芳香化酶P450的表达进行研究,并设正常增殖期子宫内膜37名为对照组。结果对照组无芳香化酶P450表达,观察组芳香化酶P450呈阳性表达,表达率分别为45%、72%、75%,两组差异有统计学意义;非典型组与癌变组阳性表达率差异无统计学意义,但表达的阳性细胞数差异有统计学意义。结论芳香化酶P450的异常表达与子宫内膜增殖癌变的发生、发展有关,组织学异型性与阳性表达率增高有关;提示芳香化酶P450可能是促使子宫内膜细胞增殖及恶变的促进因素之一。

阿那曲唑对子宫内膜异位症芳香化酶P450、雌二醇及雌激素受体的影响

目的探讨阿那曲唑对子宫内膜异位症(EMs)患者细胞色素芳香化酶P450(P450arom)、雌二醇(E2)和雌激素受体(ER)的影响。方法子宫内膜异位症患者20例采用阿那曲唑治疗3个月为治疗组,子宫内膜异位症未采取药物治疗的20例为对照组,用放射免疫法检测血清中E2水平,用免疫组化方法检测两组患者在位内膜和异位子宫内膜组织中P450arom、ER的表达。结果治疗组与对照组相比血循环中E2、P450arom和ER表达下降,差异有统计学意义(P<0.01)。结论阿那曲唑治疗EMs,可能通过降低血E2,减少异位内膜的P450arom和ER表达而起到使异位内膜病灶萎缩的作用。

P450芳香化酶与多囊卵巢综合征

P450芳香化酶是雄激素转化为雌激素的限速酶,其表达具有组织特异性,在不同的组织中转化不同的底物,产生不同活性的雌激素,P450的表达受多种调节因子的作用,多囊卵巢综合征患者卵巢中P450芳香化酶的表达异常的,造成卵巢激素分泌紊乱,影响卵泡成熟和排卵,但是多囊卵巢综合征妇女卵巢中芳香化酶的表达缺陷还是亢进尚无定论,寻找调节P450芳香化酶的特异蛋白也是未来的研究方向之一,就P450芳香化酶在多囊卵巢综合征中的表达及影响因素作综述。

CYP19基因及其产物芳香化酶P450与雌激素依赖性疾病

芳香化酶P4 5 0 (aromatasecytochromep4 5 0 ,P4 5 0arom)是雄激素转化为雌激素的限速酶 ,不仅存在于全身多种正常组织中 ,而且也存在于许多雌激素依赖性肿瘤组织中。CYP19基因是P4 5 0arom的编码基因 ,它的组织特异性表达决定了P4 5 0arom在各组织中发挥其不同的生理或病理作用。本文就CYP19基因和P4 5 0arom的结构、功能及其与雌激素依赖性疾病的关系作以综述。