微RNA-454-3p、FERM结构域蛋白6在乳腺癌组织中的表达水平及临床意义

目的探讨微RNA(miR)-454-3p、FERM结构域蛋白6(FRMD6)在乳腺癌组织中的表达水平以及临床意义。方法选取唐山市人民医院2016年12月至2018年12月住院手术的150例乳腺癌病人术中切除的乳腺癌组织标本及癌旁组织标本;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-454-3p、FRMD6在组织中的水平;采用Kaplan-Meier法分析miR-454-3p、FRMD6水平与乳腺癌病人预后的关系,并用log-rank法进行检验;Cox回归分析影响乳腺癌病人预后的因素。结果乳腺癌组织miR-454-3p水平(1.25±0.24)高于癌旁组织(0.99±0.22),FRMD6水平(0.79±0.19)低于癌旁组织(1.01±0.24),差异有统计学意义(P<0.05);癌组织中miR-454-3p、FRMD6水平与淋巴结转移、组织分化以及TNM分期有关(P<0.05);miR-454-3p高表达组和FRMD6低表达组病人3年累积生存率分别低于miR-454-3p低表达组和FRMD6高表达组病人(均P<0.05);miR-454-3p高表达、FRMD6低表达、TNM分期为Ⅲ/Ⅳ期、淋巴结转移是影响乳腺癌病人预后的危险因素(P<0.05)。结论miR-454-3p在乳腺癌组织中表达上调,FRMD6在乳腺癌组织中表达降低,二者与乳腺癌病人预后密切相关,有望成为临床上预测乳腺癌病人预后的生物性标志物。

miR-454-3p通过靶向STAT3调控CNE-2人鼻咽癌细胞上皮-间质转化

目的:探讨miR-454-3p和STAT3在鼻咽癌组织中的表达情况,以及miR-454-3p靶向STAT3对鼻咽癌细胞上皮-间质转化的影响。方法:收集2023年6月~8月右江民族医学院附属医院和百色市人民医院的鼻咽癌组织和正常组织各5例,采用qRT-PCR检测各样本中miR-454-3p与STAT3的表达情况;以未处理的鼻咽癌细胞CNE-2作为空白对照组(blank group),采用LipofectamineTM3000将miR-454-3p mimics、mimics NC(negative control)、miR-454-3p inhibitor、inhibitor NC(negative control)分别转染CNE-2细胞作为miR-454-3p mimics组、mimics NC组、miR-454-3p inhibitor组、inhibitor NC组;利用Targetscan预测miR-454-3p与STAT3的靶向关系并用双荧光素酶实验验证;分别采用qRT-PCR检测转染效率及转染后STAT3的mRNA水平变化;划痕愈合实验、Transwell小室实验检测细胞的迁移和侵袭能力;Western blot检测STAT3和上皮-间质转化相关蛋白的表达。结果:鼻咽癌组织的miR-454-3p表达量较正常组织降低,而STAT3表达量升高(P<0.001);双荧光素酶实验提示miR-454-3p靶向调控STAT3表达(P<0.001);与空白组和mimics NC组相比,miR-454-3p mimics组的STAT3、N-cadherin、Vimentin蛋白表达下调,Ecadherin蛋白表达上调,细胞的侵袭和迁移能力均减弱(P<0.05);与空白组和inhibitor NC组相比,miR-454-3p inhibitor组的STAT3、N-cadherin、Vimentin蛋白表达上调,E-cadherin蛋白表达下调,细胞的侵袭和迁移能力均增强(P<0.05)。结论:在鼻咽癌组织中miR-454-3p表达下调,而STAT3表达上调,在CNE-2人鼻咽癌细胞中miR-454-3p可以显著降低STAT3的活性,有效抑制细胞的侵袭和迁移。

肝硬化96例血清中微RNA-454和Wnt10a的表达及其临床意义

目的探究肝硬化病人血清中微RNA(microRNA,miR)-454和无翅型小鼠乳腺肿瘤病毒整合位点家族成员10a(Wnt10a)的表达及其临床意义。方法以2018年2月至2020年12月入住武汉科技大学附属汉阳医院的96例肝硬化病人为肝硬化组,并根据Child-Pugh分级分为A级36例、B级31例、C级29例。另选60例健康体检者为对照组。抽取空腹外周血检测天冬氨酸转氨酶(AST)、白蛋白(ALB)、丙氨酸转氨酶(ALT)等肝功能指标,qRT-PCR法检测血清中miR-454和Wnt10a表达水平,并分析miR-454、Wnt10a与Child-Pugh分级评分及AST、ALT、ALB等肝功能指标的关系;受试者操作特征(ROC)曲线分析miR-454、Wnt10a对严重肝硬化的诊断效能。结果肝硬化组miR-454表达水平0.85±0.20)显著低于对照组1.46±0.29,Wnt10a表达水平1.67±0.31显著高于对照组0.94±0.23(P<0.05);肝硬化组GGT、CLO、AST、ALP、ALT、TBil水平明显高于对照组,而ALB水平低于对照组(P<0.05);Child-Pugh A级、B级、C级中miR-454表达水平依次降低(P<0.05);Wnt10a在Child-Pugh A级、B级、C级中表达水平逐渐增加(P<0.05);血清miR-454与Wnt10a表达水平呈负相关(r=-0.53,P<0.001);血清miR-454表达水平与ALB呈正相关(r>0,P<0.05),与GLO、TBil、AST、GGT、Child-Pugh分级、ALT、ALP呈负相关(r<0,P<0.05);血清Wnt10a表达水平与ALB呈负相关(r<0,P<0.05),与GLO、TBil、AST、GGT、Child-Pugh分级、ALT、ALP呈正相关(r>0,P<0.05);miR-454、Wnt10a诊断严重性肝硬化的曲线下面积分别为0.80[95%CI:(0.71,0.88)]、0.73[95%CI:(0.621,0.837)];miR-454与Wnt10a联合诊断的曲线下面积为0.84[95%CI:(0.75,0.93)]。结论肝硬化病人血清中miR-454下调表达,Wnt10a上调表达,miR-454和Wnt10a呈负相关性,二者均与肝功能损伤有关,有作为诊断肝硬化严重程度的潜能。

异鼠李素介导miR-454-3p/PIK3R1轴对口腔鳞状细胞癌细胞生物学特性的影响

目的:探讨异鼠李素(ISO)对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞生物学特性的影响,以及在该过程中对miR-454-3p/PIK3R1轴的调控机制。方法:MTT法检测ISO对TSCC1细胞的毒性,随后将TSCC1细胞分为OSCC组、ISO组、ISO+miR-NC组、ISO+miR-454-3p mimic组。MTT法检测各组细胞的存活率;克隆形成实验检测各组细胞增殖情况;流式细胞术检测各组细胞凋亡;Transwell实验检测各组细胞迁移和侵袭能力;RT-qPCR法检测各组细胞中miR-454-3p和PIK3R1的mRNA水平;Western blotting法检测各组细胞中PIK3R1蛋白的表达;双荧光素酶实验验证miR-454-3p与PIK3R1的靶向关系;建立裸鼠移植瘤模型,将小鼠分为模型组、ISO组、ISO组+agomir-NC组,ISO组+miR-454-3p agomir组,每组5只,干预15 d后检测各组小鼠的肿瘤质量和体积;RT-qPCR法检测肿瘤组织中miR-454-3p和PIK3R1的mRNA水平。结果:体外实验发现,与OSCC组比较,ISO组和ISO+miR-NC组细胞存活率、迁移和侵袭细胞数量、miR-454-3p表达水平均降低(P<0.05),细胞凋亡率、PIK3R1 mRNA和蛋白表达水平均升高(P<0.05);miR-454-3p mimic回补实验逆转了ISO对OSCC的抑癌作用及PIK3R1的表达水平(P<0.05),同时双荧光素酶报告基因实验验证了miR-454-3p与PIK3R1之间存在靶向关系;体内实验发现,与模型组比较,ISO组小鼠移植瘤的质量和体积均减小(P<0.05),miR-454-3p表达水平、PIK3R1 mRNA表达水平以及miR-454-3p agomir的回补实验结果均与体外实验保持一致。结论:ISO能够通过调节miR-454-3p/PIK3R1轴抑制OSCC细胞的增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。

R-454B与R-410A在北美定频管道机中的应用对比研究

通过实验对比研究了R-410A和R-454B在管道机中的最优充注量及二者在Afull和Bfull工况下各性能参数的差异,并分析了在管道机中利用R-454B批量替换R-410A的可行性。结果表明:R-410A和R-454B最优充注量分别为3 kg和3.65 kg。与R-410A相比,R-454B在Afull和Bfull工况下能力分别降低2.22%和2.64%,EER2分别提升2.76%和1.41%,排气温度分别降低3.9℃和4.7℃,回气温度分别降低6.0℃和5.2℃,冷凝压力分别降低6.35%和5.70%,蒸发压力分别降低2.10%和2.14%。说明R-454B基本可满足目前R-410A系统的能力能效要求,且R-454B对系统部件高温保护要求和强度要求均低于R-410A,R-454B可直接使用目前R-410A的系统,为管道机批量切换制冷剂做出参考。

Circ_0101504/miR-454-3p/ARAP2通路在胃癌生长中的作用及其机制

目的探讨circ_0101504/miR-454-3p/ARAP2通路在胃癌生长中的作用及其机制。方法选取2020年5月至2020年12月入上海交通大学医学院附属瑞金医院卢湾分院行胃癌切除手术的癌组织及癌旁组织标本30对,采用实时荧光定量PCR检测组织和细胞中circ_0101504和miR-454-3p的表达,MTT检测胃癌细胞BGC-823增殖,Transwell检测胃癌细胞BGC-823迁移,流式细胞仪检测胃癌细胞BGC-823凋亡和细胞周期,荧光素酶报告基因检测circ_0101504和miR-454-3p及miR-454-3p和ARAP2之间的相互作用。结果胃癌组织中circ_0101504的水平明显高于癌旁组织;胃癌组织中miR-454-3p的水平明显低于癌旁组织;与GES-1相比,胃癌细胞系MKN-28、SNU-1、HGC-27、BGC-823中circ_0101504表达明显升高,胃癌细胞系MKN-28、SNU-1、HGC-27、BGC-823中miR-454-3p表达明显降低;与si-NC组相比,si-circRNA_0101504组中的circRNA_0101504表达明显降低,miR-454-3p表达显著升高;与si-NC组相比,si-circRNA_0101504组细胞增殖能力、迁移数量显著降低,细胞凋亡率、G0/G1期细胞比例及ARAP2蛋白表达显著增加,S期细胞比例显著降低;与si-circRNA_0101504+miR-NC组相比,si-circRNA_0101504+miR-454-3p抑制剂组的细胞增殖能力、迁移数量明显升高,细胞凋亡率、G0/G1期细胞比例及ARAP2蛋白表达明显降低,S期细胞比例明显上升,与miR-NC组相比,miR-454-3pmimics组中的相对荧光素酶活性显著降低,miR-454-3p mimic减少ARAP2-wt荧光素酶活性。结论circ_0101504/miR-454-3p/ARAP2通路在胃癌的发生发展中起着至关重要的作用,可能成为胃癌诊断及治疗的新靶点。

基于R454B制冷剂应用的涡旋压缩机非对称型线设计研究

基于压缩腔动网格CFD仿真,结合R454B制冷剂特性从型线方程、内容积比、吸排气形式等角度研究了低背压涡旋压缩机型线参数对泵体性能、轴向气体力的影响,在原代数螺旋型线的基础上优化出一种基于圆渐开方程形式的非对称吸气型线,通过测试验证,新型线相比于原型线整机性能提升约1%~1.5%。

R454C制冷剂应用于涡旋式压缩机分析

为分析R454C制冷剂在涡旋式压缩机中的应用特性,对R454C,R407C和R404A这3种制冷剂在同一台涡旋式压缩机中的应用进行测试与分析,结果表明:在变工况下,R454C输入功率最低,性能系数最高;在制冷高温名义工况下,R454C性能系数比R407C高4.7%,排气温度低约11℃,压缩机运行范围扩大;在制冷中温名义工况下,R454C性能系数比R404A高10.0%,制冷量减少约12.8%,电流减小约16.7%。最后指出,采用R454C制冷剂,需要考虑增强系统密封性以及调整过电流保护值。

R454B在制冷系统中替代R410A的实验研究

文章旨在研究制冷系统中R454B相较于R410A的可替代性,对比分析了R454B和R410A在制冷系统中所表现出的制冷量、压缩机功耗、系统COP和排气温度。通过实验得出蒸发器/冷凝器出水温度分别与蒸发温度、冷凝温度呈正相关,且实验变量对性能参数的影响具有相似性;制冷量和系统COP均随蒸发温度的升高、冷凝温度的降低而增大,而工质物性对系统COP的影响并不大;压缩机功耗和排气温度随蒸发温度的降低、冷凝温度的升高而增大。

R454B在多压缩机并联风冷涡旋机组的应用及节能分析

R454B是R410A的替代制冷剂之一,总结了北美某风冷涡旋单冷样机中两种制冷剂的性能测试及相关分析。试验结果表明,R454B的充注量约为R410A的79%;制冷量相比R410A降低了2.5%;而EER值提升了4.7%,IPLV提升了0.4%。另外,在部分负荷时,为进一步提高R454B机组性能,笔者通过优化压缩机开关组合及风机转速,可使IPLV进一步提高。

HFO混合制冷剂R455A和R454C在转子式压缩机的应用特性研究

针对冷冻冷藏领域转子式压缩机,R455A、R454C制冷剂在不同蒸发温度下进行测试,与目前使用最为广泛的R404A进行对比分析,得出结论,在蒸发温度低于-20℃,R404A性能最优;蒸发温度高于-20℃,R455A性能最优;蒸发温度在-40℃~-5℃,R454C功率及电流均比R404A、R455A偏低。

R454B风冷涡旋式冷水(热泵)机组性能分析

对R410A和R454B在风冷涡旋式冷水(热泵)机组上进行性能对比测试,结果表明:在ASHARE额定工况下,R454B充注量约为R410A的83%;R454B制冷量较R410A低1.5%,制冷COP提高4.1%;R454B制热量较R410A低约1.6%~2.3%,制热COP高约3.1%~3.7%。另外,由于R454B排气温度较高,导致压缩机的运行范围略小于R410A。

基于454测序的油茶DNA序列微卫星观察与分析

采用MISA软件挖掘比较各1/4个454高通量测序反应获得的普通油茶、浙江红山茶和短柱茶EST序列及普通油茶基因组序列中的微卫星信息。结果显示:3个种的EST序列微卫星出现频率大小相近,普通油茶EST序列的微卫星出现频率高于其基因组序列的;在所有被检索序列的二至六碱基微卫星中,均以二碱基微卫星最多(>55%),并以(AG)n类型为主,但三碱基微卫星在所有EST序列中以(AAG)n类型最多,而在普通油茶基因组序列中则以(AAT)n最多;除六碱基微卫星外,二至五碱基微卫星均表现为不同微卫星重复单元的丰度随着微卫星碱基长度增加而减少。在转录组序列中,除六碱基微卫星之外,不同微卫星单元重复数的变异与重复单元长度呈负相关,推测二碱基微卫星理论多态性最高,而五碱基微卫星理论多态性最低;对在无冗余独立基因各区域中的微卫星进行统计,显示分布比例依次为3'UTR>CDS>5'UTR,在相同区域内比较,UTR区域中二碱基微卫星占总数量比例最大,CDS区域内三碱基微卫星的比例最高,此外5'UTR区域的三碱基微卫星的分布比例均高于3'UTR,初步推断5'UTR区域的微卫星相对3'UTR要保守些。

应用454测序技术分析种植制度对黑垆土微生物多样性的影响

研究典型种植制度对旱地黑垆土微生物多样性的影响,对优化旱地作物种植制度、发挥土壤潜在肥力、实现土壤资源可持续利用有着重要的意义。通过27年长期定位试验,采用454测序技术分析了黄土高原旱作地区不同种植制度下黑垆土细菌、真菌多样性的变化情况。结果表明,不施肥低营养胁迫下,细菌多样性表现为粮豆轮作>小麦连作>裸地>苜蓿连作,真菌多样性表现为小麦连作≈苜蓿连作>裸地>粮豆轮作。施氮、磷肥条件下,粮草长周期轮作(苜蓿→苜蓿→苜蓿→苜蓿→马铃薯→小麦→小麦→小麦+苜蓿)中土壤微生物多样性大致表现出先降低后增加的趋势,第4年苜蓿或苜蓿茬后第1年小麦微生物Chao指数和Shannon指数最低,苜蓿茬后第2年小麦微生物多样性最高,细菌Chao指数和真菌Shannon指数比连作小麦高22.0%和79.2%;粮草短周期轮作(红豆草→小麦→小麦+红豆草)中土壤微生物多样性大致呈现增加趋势,至红豆草茬后第2年小麦土壤微生物多样性达到最高,真菌Chao指数和Shannon指数均分别比连作小麦高50.8%和51.0%。黄土高原旱地区黑垆土采取粮食作物与豆科作物轮作可提高土壤微生物多样性。

454测序技术开发微卫星标记的研究进展

第二代测序技术(454测序为例)已成为测定基因组序列的一种成熟技术。454测序亦可应用于目标DNA区域分析,因此可用作微卫星标记的开发。较传统方法而言,具有便捷、高效等特点。目前,运用454技术进行基因组测序或转录组测序开发微卫星标记,用以研究种群生态学、构建遗传图谱等得到越来越多的重视和应用。综述了454测序技术在开发微卫星标记上的应用,并根据其优缺点对其应用前景进行了展望,旨在为应用454测序开发微卫星提供参考。

454测序技术在微生物生态学研究中的应用

以Sanger法(双脱氧核苷酸末端终止法)为代表的第1代测序技术由于其成本高、速度慢、通量低等不足,满足不了大规模测序的要求。进入21世纪后,以Roche 454为代表的第2代测序技术诞生了,454测序法作为一种高通量的测序方法,近年来已被广泛应用于微生物生态学研究中。介绍了该测序技术的原理和操作步骤,结合本实验室的研究成果,对近年来运用454测序技术在微生物生态学研究中的进展进行综述,并对其研究前景进行介绍。

不同施氮水平对固氮甘蔗品种RB_(72-454)的肥效响应

用RB72-454和F134(CK)2个甘蔗品种在坝地和坡地设置尿素施用量为每667m240 kg、20 kg、10 kg和不施尿素4种处理,经新植和宿根各1年试验,结果表明:3种施氮处理RB72-454产量构成因素比不施氮肥明显增加,但对施氮水平响应不敏感。20 kg/667m2尿素处理RB72-454的产量、含糖量、产糖量坝地达8 686 kg/667m2、15.72%和1159 kg/667m2,比F134分别增长50.1%、1.49%(绝对值)和65.6%;坡地达6 982 kg/667m2、15.53%和927 kg/667m2,比F134分别增长71.7%、1.06%(绝对值)和85.4%,增产增糖效果极显著。

运用454焦磷酸测序技术对断奶前后仔猪肠道菌群的分析

本研究旨在运用454焦磷酸测序技术分析断奶前后仔猪肠道菌群的变化。随机选取胎次和出生时间相近的、体重差异不显著的健康"杜×长×大"外三元新生仔猪12头用于试验。整个试验期间由母猪按常规哺乳直到断奶(25日龄),母猪饲粮不含有抗生素,仔猪于12日龄开始饲喂教槽料。于25日龄(断奶前)和32日龄(断奶后)分别随机挑选3头仔猪进行心脏放血屠宰,无菌采集盲肠内容物,运用454焦磷酸测序技术分析断奶前后仔猪盲肠内容物中菌群结构的变化。结果表明:与断奶前仔猪相比,断奶后仔猪腹泻率显著增加(P<0.05);肠道中菌群多样性增加;肠道中拟杆菌门(Bacteroidetes)含量变化不显著(P>0.05),厚壁菌门(Firmicutes)含量显著增加了63.95%(P<0.05),梭杆菌门(Fusobacteria)和变形菌门(Proteobacteria)含量分别显著减少了100.00%和70.54%(P<0.05)。对厚壁菌门含量进行深入分析发现,在纲的水平,与断奶前仔猪相比,断奶后仔猪肠道中梭菌纲(Clostridia)和芽孢杆菌纲(Bacilli)含量有减少的趋势(P>0.05),而Negativicutes纲、Erysipelotrichia纲和未知厚壁菌纲含量有增加的趋势(P>0.05)。从门到属的水平,断奶前后仔猪肠道菌群相对丰度不同,有些菌是断奶前仔猪肠道特有的,如嗜胆菌属(Bilophila)、具核梭杆菌属(Fusobacterium nucleatum)、黄杆菌属(Flavobacteriaceae)等,有些菌是断奶后仔猪肠道特有的,如费克蓝姆菌属(Facklamia)、八叠球菌属(Sarcina)等。由此可见,断奶后仔猪肠道菌群多样性和菌群结构发生了改变。

基于454焦磷酸测序法的典型草原土壤真核生物多样性

利用454焦磷酸测序法对黄土区不同封育时期典型草地土壤真核生物多样性进行了研究。结果表明,选择的V4区引物可以扩增出土壤真核生物中的微生物、动物和植物,其中真菌群落主要由子囊菌门(Ascomycota)、壶菌门(Chytridiomycota)、担子菌门(Basidiomycota)、绿藻门(Chlorophyta)、球囊菌门(Glomeromycota)和变形菌门(Proteobacteria)组成;动物群落区系主要包括脊椎动物门(Craniata)、节足动物门(Arthropoda)、线虫门(Nematoda)和环节动物门(Annelida);植物群落包括陆生植物(Embryophyta)和单子叶植物纲(百合纲)(Liliopsida)。在不同分类学水平,不同封育时期草地真菌群落组成具有各自的优势菌群;动物群落组成仅在种水平存在差异。草地管理实践中可以结合土壤微生物和土壤养分恢复时间的阈值对封育草地进行合理利用。454焦磷酸测序法可以用于土壤中未知动物、植物和微生物区系的研究。

固氮甘蔗新品种RB72-454吨糖田土配套技术应用

用RB72-454和F134(CK)2个甘蔗品种,于2003~2005年在坝地和缓坡地进行吨糖田土试验示范,经新植和宿根研究结果表明:在用种量8 000芽/667m2、深沟双行种植、合理施肥和优化管理技术规范下,RB72-454坝地蔗糖分含量15.47%,产量8 616 kg/667m2,产糖量1 130 kg/667m2,比对照蔗糖分含量增长1.16个百分点,产量增加38.0%,单位面积产糖量增加49.1%;坡地蔗糖分含量15.56%,产量7 808 kg/667m2,产糖量1 030 kg/667m2,比对照蔗糖分含量增长1.16个百分点,产量增加37.5%,单位面积产糖量增加48.3%。RB72-454在坝地和坡地含糖量均达到1 t/667m2以上。