电导法测定Sepharose 4FF凝胶层析柱柱效方法的验证

目的以氯化钠溶液为样品和洗脱液,对电导法测定Sepharose 4FF凝胶层析柱柱效方法进行验证,确定该方法测定柱效的最优条件。方法设计四因素三水平正交实验对电导法测定Sepharose 4FF凝胶层析柱柱效方法进行验证,考察不同样品体积、流速、样品浓度和洗脱液浓度对Sepharose 4FF凝胶层析柱柱效和对称性的影响。依据正交实验结果确定电导法测定柱效的最优条件并进行验证。结果9次实验测得柱效均>2800 N/m、对称性为1.020~1.160。通过单因素方差分析,样品体积对柱效的影响无统计学意义(P=0.123,P>0.05),对对称性的影响无统计学意义(P=0.735,P>0.05);流速对柱效的影响无统计学意义(P=0.600,P>0.05),对对称性的影响有统计学意义(P=0.032,P<0.05);样品浓度对柱效的影响无统计学意义(P=0.319,P>0.05),对对称性的影响无统计学意义(P=0.824,P>0.05);洗脱液浓度对柱效的影响无统计学意义(P=0.930,P>0.05),对对称性的影响无统计学意义(P=0.596,P>0.05)。通过极差分析,确定测定柱效的最优条件为:样品体积为600 mL、样品浓度为1.0 mol/L、洗脱液浓度为0.2 mol/L、流速为20 cm/h;重复性和耐用性考察中柱效RSD均<5%,对称性RSD均<5%。将丙酮对照实验结果和重复性实验结果进行t检验,柱效和对称性结果均无统计学意义(P均>0.05)。结论电导法可用于测定Sepharose 4FF凝胶层析柱柱效,确定的最优条件重复性、耐用性良好,可准确、真实地评估Sepharose 4FF凝胶层析柱的性能。

蛋白A的固定及在抗体亲和纯化中的应用

目的以蛋白A作配基偶联活化的Sepharose 4FF后纯化兔免疫蛋白IgG。方法以环氧氯丙烷(ECH)活化凝胶,正交试验确定最佳活化条件;以纯化数据确定抗体兔免疫蛋白IgG纯化最佳缓冲液盐浓度。结果 Sepharose 4FF最佳活化条件:ECH浓度20%(v/v),0.8 mol/L NaOH添加量为1 mL/1 g Sepharose 4FF湿胶,活化时间2.5 h,反应温度40°C。结论建立将活化琼脂糖凝胶Sepharose 4FF与蛋白A偶联的条件,可应用于纯化兔免疫蛋白IgG。

大豆蛋白对高血胆固醇模型大鼠胆固醇代谢的影响

目的:探讨膳食大豆蛋白对高胆固醇模型大鼠血浆胆固醇及其有关血脂指标的影响,并对其可能的作用机理加以研究。方法: 4周龄断乳雄性Wistar大鼠,经28d诱发高血胆固醇以后,按体重和血浆总胆固醇浓度将动物均衡分为两组,分别喂饲含酪蛋白和大豆蛋白的纯合成高脂饲料56d。结果:经28d诱导高脂模型后,高血胆固醇模型大鼠的TC浓度是阴性对照组的1 51倍。又经56d喂饲含有处理因素的饲料后,同酪蛋白组相比,大豆蛋白组动物TC,TG,apoB含量显著降低,而FT4水平显著高于酪蛋白组(P<0. 05)。膳食大豆蛋白摄入可降低高血胆固醇模型大鼠TC、TG、apoB浓度、使血浆FT4含量增高,但对HDL-C,apoA,FT3,TSH和胰岛素(INS)水平无影响。结论:大豆蛋白可影响血浆胆固醇水平,但其相应的作用机理还需进一步探讨。

品行障碍患儿应付方式和父母养育方式的相关分析

目的探讨儿童青少年品行障碍患者应付方式和父母养育方式的特点及两者的相关性。方法应用应付方式问卷和父母养育方式评价量表评估青少年品行障碍42例,并与50例正常学生对照,检测两者的相关性。结果在应付方式方面,品行障碍组解决问题评分为0.53±0.16,显著低于对照组,自责、求助、幻想、退避的因子分分别为0.54±0.19、0.46±0.17、0.56±0.21、0.60±0.22,显著高于对照组;在家庭养育方式方面,FF1、MF1因子分分别为41.98±6.32、45.93±10.18,显著低于对照组;其他各项因子分除FF4外均显著高于对照组;相关性结果显示,解决问题-求助与FF1、MF1正相关,与其他各项因子负相关;自责-退避与FF1、MF1负相关,与其他各因子负相关。结论儿童青少年品行障碍患者的应付方式不良,与父母养育方式明显相关。

猪繁殖与呼吸综合征病毒纯化方法的建立

采用差速离心、膜包超滤浓缩和Sepharose 4 Fast Flow(4FF)凝胶层析相结合的策略纯化猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),建立了一种温和纯化PRRSV的方法。通过SDS-PAGE、Western-blot和检测病毒含量、蛋白含量等方法分析纯化效果。用纯化后的病毒免疫BALB/c雌性小鼠,通过免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)检测其免疫原性,并与超速离心沉淀病毒的纯化方法相比较,评估纯化病毒的免疫效果。结果显示,4FF纯化后的病毒TCID_(50)提高了50倍,与超离方法相比,4FF纯化法将病毒原液杂蛋白的去除比率由97.51%提高到99.68%,SDS-PAGE显示未见明显杂蛋白条带,IPMA结果显示4FF纯化病毒的免疫原性较好,特异性较强,消除了免疫后小鼠血清与Marc-145细胞蛋白的非特异性反应。结果表明,4FF纯化方法优于超离纯化方法,前者的建立为制备单克隆抗体和规模化纯化PRRSV疫苗的工艺开发奠定基础。

表达MERS-CoVS1蛋白重组狂犬病病毒rSRV9-MERSS1纯化方法的建立

建立一种可线性放大、应用于表达中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)S1蛋白重组狂犬病病毒rSRV9-MERSS1的规模化纯化方法。将收获的病毒去除细胞碎片、灭活后,分别通过3种方法(醋酸锌沉淀+Sepharose 4FF凝胶过滤层析、500 000中空纤维超滤柱+Sepharose 4FF凝胶过滤层析、500 000中空纤维超滤柱+CellufineTM Sulfate亲和层析)进行纯化,经比较筛选出一种温和、目的蛋白回收率高、纯度高的纯化方法。结果显示,500 000中空纤维超滤柱+Sepharose 4FF凝胶过滤层析回收的抗原含量最高,50 mL重组病毒原液经纯化后可得到1.82 mg蛋白,杂蛋白去除率达到97.02%,病毒纯度较高,电镜下可见到病毒囊膜刺突。结合成本等方面综合考虑,此方法优于其他2种纯化方法。本试验筛选获得了一种适用于rSRV9-MERSS1的纯化方法,为rSRV9-MERSS1规模化纯化工艺的建立与MERS新型疫苗的研制奠定了基础。

简洁典雅

飞利浦9FF2M4是PC Labs中国试验室最近收到的又一款数码相框新品，对比我们上个月测试过的爱国者数码相框，我们发现了其中很多有趣的地方。例如在分辨率上飞利浦的产品要胜出一筹，显示效果清晰细腻；不过爱国者的数码相框F5001却拥有音乐播放等多种丰富的功能，在功能上又占了不少上风。对比两个产品的不同卖点，我们就会从中发现欧美市场与中国市场一些消费理念的差异性。