负性共刺激分子B7-H3和B7-H4在子宫内膜癌发生发展中的作用机制研究

目的:探究负性共刺激分子B7-H3和B7-H4在子宫内膜癌发生发展中的作用机制。方法:选择我院2020年1月—2022年1月收治的60例子宫内膜癌患者开展研究,作为A组。另取同期收治的50例不典型增生子宫内膜患者作为B组。再取40例因子宫内膜病变切取正常子宫内膜组织患者作为C组。分别进行三组组织芯片的制作,并以免疫组织化学法检测B7-H3、B7-H4及白细胞介素-10(IL-10)、转化生长因子-β1(TGF-β1)表达情况。通过Spearman相关性分析明确B7-H3、B7-H4与IL-10、TGF-β1水平的相关性。此外,分析B7-H3、B7-H4表达与子宫内膜癌患者临床病理特征的关系。结果:A组B7-H3、B7-H4与IL-10、TGF-β1阳性率高于B组及C组(均P<0.05)。经Spearman相关性分析发现:B7-H3、B7-H4与IL-10、TGF-β1表达均呈正相关(均P<0.05)。病理分级G2+G3、临床分期Ⅲ~Ⅳ期及淋巴结转移子宫内膜癌患者B7-H3阳性率高于病理分级G1、临床分期Ⅰ~Ⅱ期及无淋巴结转移患者(均P<0.05)。病理分级G2+G3、临床分期Ⅲ~Ⅳ期及淋巴结转移子宫内膜癌患者B7-H4阳性率高于病理分级G1、临床分期Ⅰ~Ⅱ期及无淋巴结转移患者(均P<0.05)。结论:负性共刺激分子B7-H3和B7-H4在子宫内膜癌发生、发展过程中起着促进作用,其作用机制可能和调控IL-10、TGF-β1表达有关。

人4IgB7-H3-Fc融合蛋白的表达及其生物学活性的研究

为获得人4IgB7-H3-Fc融合蛋白,研究其对T细胞的共刺激作用,采用PCR技术分别从pMD18-T/4IgB7-H3和pMD18-T/hIgG1(Fc)重组载体中扩增出人4IgB7-H3胞外段基因和人IgG1重链Fc恒定区基因,通过RT-PCR技术插入逆转录病毒载体pGEZ-Term,重组逆转录病毒载体与两个辅助病毒载体经脂质体法共转染包装细胞293T,收集含有完整病毒颗粒的293T细胞的培养上清反复感染L929细胞,利用Zeocin筛选获得能稳定分泌4IgB7-H3-Fc融合蛋白的基因转染细胞。基因转染细胞经无血清培养后,收集的上清用Dot blot检测,超滤浓缩并经Protein G柱纯化,再用SDS-PAGE、Western blot鉴定。以4IgB7-H3-Fc蛋白检测活化T细胞表面未知受体的表达,通过MTT方法分析4IgB7-H3-Fc融合蛋白对T细胞的共刺激作用。结果显示,成功地构建了pEGZ-Term/4IgB7-H3-Fc重组逆转录病毒载体,经转染包装细胞293T后,筛选获得能稳定分泌4IgB7-H3-Fc蛋白的L929基因转染细胞株;纯化后的4IgB7-H3-Fc蛋白能够与活化T细胞表面结合,并对T细胞有显著的促增殖作用。为探讨人4IgB7-H3-Fc融合蛋白对T细胞的共刺激作用和寻找其未知受体奠定良好的物质基础。

人4IgB7-H3对结肠癌细胞SW480中β3GnT8表达的影响

目的探索人结肠癌细胞SW480转染4IgB7-H3后对糖基转移酶133GnT8和细胞表面多聚乳糖胺糖链表达的影响。方法脂质体介导的重组表达载体plRES2-EGFP／4IgB7-H3转染SW480细胞，筛选并获得稳定表达4IgB7-H3的亚克隆细胞株；RT-PCR、WesternBlot检测B3GnT8的表达；流式细胞术检测多聚乳糖胺寡糖链的表达。结果成功获得稳定表达4IgB7-H3的亚克隆细胞株SW480／4IgB7-H3；转染4IgB7-H3的SW480细胞中B3GnT8和多聚乳糖胺糖链的表达均明显下调（P〈0．05）。结论人肠癌细胞中4IgB7-H3过表达能抑制p3GnT8的表达，进而抑制多聚乳糖胺糖链的表达。

负性共刺激分子B7-H3和B7-H4在子宫内膜癌中的表达及临床意义

目的:分析负性共刺激分子B7-H3和B7-H4在子宫内膜癌中的表达及临床意义。方法:将实施子宫切除术的198份石蜡包埋的子宫内膜病变标本纳入研究,其中经病理学确诊为子宫内膜癌的有89份,增生期子宫内膜标本为109份。所有子宫内膜病变标本以免疫组织化学染色法检测B7-H3、B7-H4表达情况,比较子宫内膜癌与增生期子宫内膜患者B7-H3、B7-H4阳性表达率,并分析子宫内膜癌B7-H3、B7-H4阳性表达率与临床病理特征之间的关系。结果:子宫内膜癌标本B7-H3阳性表达率与B7-H4阳性表达率高于增生期子宫内膜标本(P<0.05)。子宫内膜癌患者B7-H3阳性表达与其年龄(≥60岁)、淋巴结转移、肌层浸润深度(>1/2)、组织学类型、组织学病理分级无明显相关性(P>0.05),而B7-H3阳性表达与其临床分期存在相关性(P<0.05);子宫内膜癌患者B7-H4阳性表达与其年龄(≥60岁)、肌层浸润深度(>1/2)、组织学病理分级、临床分期无明显相关性(P>0.05),而B7-H4阳性表达与其淋巴结转移、组织学类型存在相关性(P<0.05)。结论:负性共刺激分子B7-H3、B7-H4表达与子宫内膜癌的发生密切相关,且B7-H3表达与子宫内膜癌临床分期有着一定关联,而B7-H4阳性表达与子宫内膜癌淋巴结转移、组织学类型存在相关性,B7-H3、B7-H4可为临床评估子宫内膜癌进展提供一定的依据。

血清sB7-H3、CCSP、CD4^(+)/CD8^(+)水平与MPP患儿病情程度的关系

目的:探讨血清共刺激分子可溶性B7-H3(Soluble costimulatory molecule B7-H3,sB7-H3)、Clara细胞分泌蛋白(Clara cell secretory protein,CCSP)、CD4^(+)/CD8^(+)水平与肺炎支原体肺炎(Mycoplasma pneumoniae pneumonia,MPP)患儿病情程度的关系。方法:选取我院2020年5月至2022年5月收治的80例MPP患儿为研究组,另选同期80例体检健康儿童为对照组。比较不同组别入院时血清sB7-H3、CCSP、CD4^(+)/CD8^(+)水平、肺功能指标及临床肺部感染评分(Clinical pulmonary infection score,CPIS)评分,并分析入院时血清sB7-H3、CCSP、CD4^(+)/CD8^(+)水平与CPIS评分及肺功能指标相关性及危险因素。结果:与对照组相比,入院时研究组血清sB7-H3水平较高,CCSP、CD4^(+)/CD8^(+)水平较低(P<0.05);重症患儿入院时血清sB7-H3水平、呼吸频率、CPIS评分高于轻症患儿,CCSP、CD4^(+)/CD8^(+)水平、潮气量、达峰时间/呼气时间、达峰容积/潮气量低于轻症患儿(P<0.05);入院时血清sB7-H3水平与潮气量、达峰时间/呼气时间、达峰容积/潮气量呈负相关,与呼吸频率、CPIS评分呈正相关(P<0.05);血清CCSP水平、血清CD4^(+)/CD8^(+)水平与潮气量、达峰时间/呼气时间、达峰容积/潮气量呈正相关,与呼吸频率、CPIS评分呈负相关(P<0.05);Logistic回归分析显示入院时血清sB7-H3水平(>7.72μg·L^(-1))、CCSP水平(≤8.38μg·L^(-1))、CD4^(+)/CD8^(+)水平(≤1.32)是重症MPP发生的危险因素(P<0.05)。结论:血清sB7-H3水平于MPP患者中呈高表达,血清CD4^(+)/CD8^(+)、CCSP水平呈低表达,动态监测血清变化有助于了解病情变化,为临床制定治疗方案起到指导作用。

人类β1,3半乳糖基转移酶7对人4IgB7-H3的修饰作用初探

目的:探讨人4IgB7-H3基因转染人胃癌细胞株SGC7901后人类β1,3半乳糖基转移酶7(β1,3-galacto-syltransferase 7,β3GalT7)的表达变化,以期发现4IgB7-H3与β3GalT7的相互关系。方法:脂质体介导重组逆转录病毒载体pEGZ-Term/4IgB7-H3转染SGC7901细胞,筛选获得稳定表达4IgB7-H3的亚克隆细胞株,通过RT-PCR和蛋白质印迹方法检测β3GalT7的表达。结果:成功获得稳定表达4IgB7-H3的亚克隆细胞株SGC7901/4IgB7-H3;β3GalT7随4IgB7-H3的表达上调而上调。结论:4IgB7-H3蛋白的修饰成熟可能需要β3GalT7的作用。

共刺激分子B7-H1、B7-H3和B7-H4在血液系统恶性肿瘤细胞株中的表达水平和分布特征

目的:探讨3种共刺激分子B7-H1、B7-H3和B7-H4在人类血液系统恶性肿瘤细胞株中的表达及分布特征。方法:分别采用RT-PCR、q PCR、Western blot和流式细胞术检测13株血液肿瘤细胞中B7-H1、B7-H3和B7-H4的表达及亚细胞定位情况,设12例志愿者外周血单个核细胞(PB MNC)为对照。结果:3种共刺激分子的mRNA在12例志愿者PB MNC和13株血液肿瘤细胞中广泛表达,其中B7-H4表达水平相对偏低;3种共刺激分子分别在Maver、Z138和HL-60中表达最高,B7-H3和B7-H4在CZ1中不表达。3种共刺激分子的胞核及胞浆蛋白仅在恶性血液肿瘤细胞中异常高表达,分别在U937、Z138和Raji细胞中表达最高,B7-H3和B7-H4在CZ1细胞中不表达。在同一肿瘤来源的细胞株中,3种共刺激分子的mRNA和胞核及胞浆蛋白表达均存在差异,且差异不全一致。B7-H3膜蛋白在U937、M aver和Z138中表达丰度较高;B7-H1和B7-H4的膜蛋白在13株细胞中呈不表达或低表达。结论:共刺激分子B7-H1、B7-H3和B7-H4在mRNA水平均广泛表达,但蛋白水平仅在血液肿瘤细胞中异常高表达,且亚细胞定位多在胞核及胞浆,膜蛋白水平普遍低表达或不表达。同一肿瘤来源的细胞株中3种共刺激分子的表达可存在差异。

强化剂量阿托伐他汀对不稳定型心绞痛患者PCI围手术期B7-H3、B7-H4的影响

目的探讨强化剂量阿托伐他汀对不稳定型心绞痛患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)围手术期B7-H3和B7-H4表达的影响。方法将80例不稳定型心绞痛患者随机分为常规剂量组(阿托伐他汀20 mg/d,n=40)和强化剂量组(阿托伐他汀80 mg/d,n=40),分别于PCI术前和术后18~24 h收集外周静脉血,采用ELISA检测外周血白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素10(IL-10)、干扰素γ(IFN-γ)、血清可溶性B7-H3(sB7-H3)、可溶性B7-H4(sB7-H4)水平,用实时荧光定量PCR检测外周血单核细胞B7-H3、B7-H4 mRNA相对表达量。结果两组患者PCI术后IL-10、sB7-H3、sB7-H4水平和B7-H3、B7-H4的mRNA表达水平均较术前升高,其中强化剂量组升高更显著(P<0.05)。相反,两组患者PCI术后IL-4、IFN-γ水平均降低,且强化剂量组较常规剂量组下降更明显(P<0.05)。结论强化剂量阿托伐他汀可能通过促进B7-H3、B7-H4表达,从而降低不稳定型心绞痛患者PCI术后免疫炎症反应。

动脉粥样硬化兔血清、外周血单核细胞、主动脉组织B7-H3、B7-H4表达变化及意义

目的观察动脉粥样硬化(AS)兔血清、外周血单核细胞、主动脉组织中协同刺激分子B7-H3、B7-H4表达变化,并探讨其可能的机制。方法选取成年雄性新西兰大白兔20只,随机分为AS组和对照组各10只。AS组持续给予高脂饮食14周,对照组给予普通饮食14周。分组处理前(0周)和分组处理14周末,比较两组血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及白细胞介素1β(IL-1β)、γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素10(IL-10)。两组分组处理14周末,采用HE染色观察主动脉形态及病理情况,记录斑块面积比及内膜厚度,采用实时荧光定量PCR法检测外周血单核细胞与主动脉组织B7-H3、B7-H4 mRNA表达。结果 AS组14周时兔血清TC、TG、LDL-C、IL-1β、IFN-γ水平均高于同组0周及对照组同时间点,HDL-C、IL-10、sB7-H3、sB7-H4水平均低于同组0周及对照组同时间点(P均<0.05)。主动脉形态及病理结果显示,对照组兔主动脉内膜光滑完整;AS组兔主动脉呈弥漫性改变,可见脂样物质突出管腔,内膜增生增厚且可见泡沫细胞与脂质沉积,中膜平滑肌细胞增生。AS组兔斑块面积比为66.82%±15.45%、内膜厚度(86.02±12.32)μm,对照组分别为0、(8.12±3.85)μm;两组比较P均<0.05。与对照组比较,AS组兔外周血单核细胞与主动脉组织B7-H3、B7-H4mRNA表达均降低(P均<0.05)。血清sB7-H3、sB7-H4与IL-1β、IFN-γ均呈负相关关系,与IL-10均呈正相关关系(P均<0.05)。结论 AS兔血清、外周血单核细胞、主动脉组织中协同刺激分子B7-H3、B7-H4表达均降低,B7-H3、B7-H4可能通过促进IL-10分泌及抑制IL-1β、IFN-γ表达而减轻AS的炎症反应。

C_3S-C_(12)A_7-H_2O和C_3S-C_(12)A_7-CaSO_4·2H_2O-H_2O系统的水化及其性能研究

试验用结合水法、化学减缩法、XRD定量等物理、化学分析方法 ,研究了C1 2 A7和石膏同时存在时C3S在不同系统中的水化动力学及水化机理。结果表明C1 2 A7能够促进C3S的水化 ,尤其是对C3S早期水化有显著的促进作用 ;当有石膏存在时 ,这种促进作用更为显著。其机理是由于C1 2 A7水解放出的Al(OH) - 4 与C3S水解放出的Ca2 +反应生成C3AH6 ,当有石膏存在时 ,生成钙钒石 ,从而加快了C3S的水化。

4-1BBL-B7-H3基因对免疫重建重症联合免疫缺陷荷瘤鼠的抑瘤作用

目的通过建立人免疫重建重症联合免疫缺陷(SCID)荷瘤鼠嵌合模型来探讨4-1BBL-B7-H3基因在非特异性抗肿瘤免疫中的作用。方法将40只SCID鼠随机分为5组,A组(对照组)行免疫重建加注射Tca8113细胞;B组(Ad4-1BBL-B7-H3组)行免疫重建加注射含有人4-1BBL-B7-H3基因腺病毒转染的Tca8113细胞;C组(空载组)行免疫重建加注射含有空载体腺病毒转染的Tca8113细胞;D组(非免疫重建组)不给予小鼠免疫重建,注射Tca8113细胞;E组(非肿瘤组)行免疫重建加注射PBS。每周定期测量肿瘤体积;酶联免疫吸附法检测人IgG蛋白含量;流式细胞仪检测外周血中人CD3+、CD56+淋巴细胞比例;免疫组织化学法观察自然杀伤细胞2族成员D(NKG2D)和Toll样受体2(TLR2)在肿瘤中的表达;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测4-1BBL-B7-H3 mRNA的表达,实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测主要组织相容性复合体1类相关分子(M1C)A、B及TLR2的表达。结果 1)B组小鼠肿瘤体积最小(P<0.05);2)A、B、C、E组小鼠外周血中检测到人IgG、CD3+、CD56+淋巴细胞,B组淋巴细胞比例高于A、C和E组(P<0.05);3)B组NKG2D和TLR2的表达较其余各组明显增强;4)人4-1BBL-B7-H3基因在B组小鼠肿瘤中稳定表达;5)B组M1CA、M1CB和TLR2的表达高于A、C、D组(P<0.05)。结论 4-1BBL-B7-H3基因在肿瘤组织中的高表达能成功诱导人CD3+、CD56+细胞增殖,直接或间接活化TLR2,上调NKG2D及其配体M1CA、M1CB的表达,从而产生有效的抗肿瘤免疫应答。

Na_2CO_3-Na_2B_4O_7-H_2O三元体系288K相平衡研究

采用等温溶解平衡法研究了三元体系 Na2 CO3- Na2 B4 O7- H2 O 2 88K时的相平衡及平衡液相的主要物化性质 (密度 ,电导率 ,p H)。研究发现 :该三元体系为简单共饱和型 ,无复盐及固溶体形成 ,根据溶解度数据绘制出相图 ,相图中单变量曲线所对应的平衡固相分别为 :Na2 CO3· 10 H2 O,Na2 B4 O7· 10 H2 O。并简要讨论了物化性质的变化规律。

K_2CO_3-KCl-K_2B_4O_7-H_2O四元体系298K介稳相平衡的实验研究

采用等温蒸发法研究了K2CO3-KCl-K2B4O7-H2O四元体系298 K介稳平衡相关系,并测定了该体系达介稳平衡时液相的密度、折光率和pH值等物化性质。根据实验数据,绘制了该体系298 K的介稳相图及物化性质-组成图。结果表明:该四元体系属简单共饱型,无复盐或固溶体形成;其溶解度等温图含有一个共饱点、三条单变量曲线和3个结晶相区。3个结晶相区分别对应于K2B4O7.4H2O,K2CO3.32 H2O和KCl。共饱点的平衡液相组成为w(K2CO3)=51.57%,w(KCl)=1.09%,w(K2B4O7)=1.29%,所对应的平衡固相为K2CO3.32 H2O+KCl+K2B4O7.4H2O。

B7-H3和B7-H4在鼻咽癌组织中的表达及意义

目的探讨B7-H3和B7-H4基因突变在鼻咽癌中的表达及临床意义。方法以60例鼻咽癌标本作为病例组,以30例正常子鼻咽部组织作为对照组,应用免疫组织化学技术,检测两组中B7-H3和B7-H4的表达。结果 B7-H3和B7-H4在鼻咽癌组织中阳性率均明显高于正常鼻咽组织,差异均有显著统计学意义(P<0.01);Ⅲ+Ⅳ期及淋巴结转移患者B7-H3和B7-H4阳性率分别明显高于Ⅰ+Ⅱ期、无淋巴结转移患者,差异有明显的统计学意义(P<0.05)。结论 B7-H3和B7-H4与鼻咽癌发生和发展密切相关。

烟酸对实验性动脉粥样硬化兔协同刺激分子B7-H3和B7-H4表达的影响

目的:探讨烟酸对实验性动脉粥样硬化(As)兔协同刺激分子B7-H3和B7-H4表达的影响。方法:选取30只成年雄性新西兰大白兔随机分为对照组、As组和烟酸组。As组持续高脂饮食14周,烟酸组在高脂饮食8周基础上给予烟酸200 mg/(kg·d)干预6周,对照组普通饮食14周。实验前、实验后0周、8周及14周采集静脉血,实验结束时留取主动脉。全自动生化分析仪检测血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平,HE法检测主动脉斑块病理改变,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清白细胞介素(IL)-1β、γ-干扰素(IFN-γ)、IL-10、可溶性B7-H3(sB7-H3)及可溶性B7-H4(sB7-H4)水平,实时荧光定量PCR检测外周血单核细胞和主动脉B7-H3、B7-H4 mRNA的表达。结果:As组血清TC、TG、LDL-C、IL-1β和IFN-γ水平及主动脉斑块面积均明显高于对照组,而血清IL-10、sB7-H3和sB7-H4水平及外周血单核细胞和主动脉B7-H3、B7-H4 mRNA的表达水平均显著低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。烟酸组血清TC、TG、LDL-C、IL-1β和IFN-γ水平及主动脉斑块面积均明显低于As组,而血清HDL-C、IL-10、sB7-H3和sB7-H4水平及外周血单核细胞和主动脉B7-H3、B7-H4 mRNA的表达水平均显著高于As组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:烟酸可能通过促进B7-H3、B7-H4表达,调节炎性因子IL-1β、IFN-γ、IL-10水平,从而抑制As兔的炎性反应。

黄芪甲苷基于ILT4-PI3K/Akt-B7-H3通路对NSCLC免疫逃逸机制影响的实验研究

目的:探究黄芪甲苷通过ILT4-PI3K/Akt-B7-H3通路抑制非小细胞肺癌(NSCLC)免疫逃逸的机制。方法:A549人肺腺癌细胞株,对细胞进行复苏、培养和传代。选取对数生长期细胞行MTT实验,细胞传代后用黄芪甲苷进行干预。根据药物浓度分为对照组及黄芪甲苷低、中、高浓度组,药物干预后进行Western blot实验、qRT-PCR实验、划痕实验、MTT试验。结果:各组D(λ)值随时间及黄芪甲苷浓度的增加而降低,40μmol/L以上各给药组间差异不明显。各浓度黄芪甲苷均能抑制A549细胞增殖,且抑制作用随药物浓度升高及时间延长而增强。黄芪甲苷低、中、高浓度组ILT4、PI3K、Akt蛋白表达显著低于对照组(P<0.05),低、中浓度组B7-H3蛋白表达显著低于对照组,ILT4、PI3K、Akt、B7-H3 mRNA表达显著低于对照组(P<0.05)。各组细胞划痕愈合率均随着时间的延长而提高,随着黄芪甲苷浓度的升高而降低(P<0.05)。结论:黄芪甲苷在蛋白水平和基因水平上均能显著降低A549细胞ILT4的表达,抑制PI3K/Akt通路,影响B7-H3的表达,抑制ILT4-PI3K/Akt-B7-H3通路,可进一步影响肺癌免疫逃逸的后续阶段,从而抑制NSCLC的发生发展。

转人4-1BBL-B7-H3基因口腔鳞癌细胞体外诱导抗肿瘤免疫的研究

目的通过构建转人4-1BBL-B7-H3基因肿瘤细胞株,探讨4-1BBL-B7-H3体外诱导抗肿瘤免疫的能力。方法通过脂质体法将真核表达载体pEGFP-4-1BBL-B7H3转染人口腔鳞癌Tca8113细胞,经G418筛选及有限稀释后获得稳定高表达克隆,用流式细胞仪分析表型,RT-PCR检测转染细胞中4-1BBL-B7-H3 m RNA的表达。用淋巴细胞分离液分离纯化人外周血T淋巴细胞,分别与转染4-1BBL、B7-H3、4-1BBL-B7-H3的Tca8113细胞混合培养。用CCK-8法检测细胞毒性T细胞(CTL)杀伤活性;ELISA法检测培养上清液中IFN-γ水平。结果转基因Tca8113细胞能够稳定高表达4-1BBL-B7-H3。与Tca8113细胞相比较,转染4-1BBL-B7-H3的Tca8113细胞能够显著增强T细胞增殖,促进IFN-γ分泌,并有效地诱导CTL产生对Tca8113细胞的特异性杀伤作用。结论转染人4-1BBL-B7-H3基因既能增强口腔鳞癌Tca8113细胞的免疫原性,亦能诱导T细胞产生有效的抗肿瘤免疫应答。

PI3K/AKT信号通路的抑制促进B7-H4分子的核转移

目的探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路对负性共刺激分子B7-H4细胞定位的调控作用。方法体外培养稳定转染B7-H4/HEK293细胞,采用PI3K/AKT特异性抑制剂LY294002和/或出核转运抑制剂来普霉素B(LMB)处理细胞之后,免疫荧光技术结合激光共聚焦显微镜检测B7-H4蛋白在B7-H4/HEK293细胞中亚细胞定位的变化;Western blot法检测B7-H4蛋白在细胞膜、细胞质和细胞核表达水平的变化。结果激光共聚焦显微镜观察结果显示,PI3K抑制剂LY294002作用于B7-H4稳定转染的B7-H4/HEK293细胞后,与空白对照组相比,B7-H4发生核转移,加入出核转运抑制剂LMB后,核转移的程度显著增加;Western blot法结果显示,LY294002抑制PI3K/AKT信号通路活性24 h后,B7-H4在细胞膜和细胞质中的定位均显著降低(P<0.05),而细胞核中B7-H4的定位显著增加(P<0.05)。结论 PI3K/AKT信号通路可抑制B7-H4的核转移。

协同刺激分子PD-L1、B7-H3与B7-H4在卵巢癌中的表达及其意义

协同刺激分子PD-L1、B7-H3与B7-H4可与T细胞及其受体结合并抑制T细胞的增殖和过度活化,在细胞免疫应答过程中起重要的调控作用,已被多项研究证明与肿瘤的免疫原性及肿瘤的发生、发展密切相关。这3种分子在正常卵巢组织中均不表达,而在卵巢癌组织中呈不同程度的高表达,它们可能在促进卵巢癌的发生、转变及病情进展过程中起重要作用,研究其作用机制对卵巢癌的早期诊断及靶向治疗有一定的意义。

一株新的鼠抗人2IgB7-H3功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定

研制功能性鼠抗人2IgB7-H3单克隆抗体。以人2IgB7-H3基因转染细胞1．929／2IGB7-H3为免疫原，常规免疫6～8周龄的雌性BALB／c小鼠；利用B淋巴杂交瘤技术，将免疫小鼠脾脏细胞和骨髓瘤细胞株SP2／0融合，1．929／2IGB7-H3细胞为抗原筛选阳性细胞；经间接免疫荧光标记法对杂交瘤细胞进行反复筛选和多次克隆化培养；采用快速定性试纸法鉴定单抗Ig亚类；利用竞争抑制性实验分析该单抗识别的抗原表位；采用MTT法分析该单抗在体外阻断DC对T细胞的促增殖效应。结果：获得了1株持续稳定分泌鼠抗人2IgB7-H3单克隆抗体的杂交瘤细胞株（命名为7D7），该单抗可特异识别1．929／2IGB7-H3分子和介导有效的共刺激信号。该单抗的成功获得和其生物学特性的初步鉴定，为进一步研究B7-H3两个异构体在DC细胞及肿瘤细胞上的作用机制奠定了物质基础。