目的:探讨TLR4信号对乳腺癌4T1细胞株中miR-21表达的影响及调控机制,研究miR-21对乳腺癌细胞凋亡和增殖的影响。方法:体外培养乳腺癌细胞株4T1,以TLR4配体LPS刺激6、12、18、24 h,实时荧光定量PCR检测4T1细胞中miR-21的表达变化。Wester...目的:探讨TLR4信号对乳腺癌4T1细胞株中miR-21表达的影响及调控机制,研究miR-21对乳腺癌细胞凋亡和增殖的影响。方法:体外培养乳腺癌细胞株4T1,以TLR4配体LPS刺激6、12、18、24 h,实时荧光定量PCR检测4T1细胞中miR-21的表达变化。Western blotting检测TLR4信号活化后4T1细胞中NF-κBp65的表达和磷酸化情况;应用NF-κB抑制剂PDTC预处理30 min,实时荧光定量PCR检测4T1细胞中miR-21的变化。转染miR-21抑制剂和阴性对照后,Annexin-V/PI双标法检测4T1细胞凋亡情况,MTT法检测4T1细胞增殖情况。结果:LPS刺激致TLR4信号活化能够时间依赖性地上调miR-21的表达(18 h时:2.07±0.33 vs 1;t=5.61,P=0.03),TLR4信号能够时间依赖性地上调NF-κB的活化,NF-κB抑制剂PDTC能明显抑制TLR4信号诱导的4T1细胞的miR-21上调(0.70±0.10 vs 2.14±0.32;t=-7.357,P=0.002)。与阴性对照组相比,miR-21抑制剂组4T1细胞的凋亡率明显增高[(24.2±2.4)%vs(14.8±5.1)%;t=2.891,P=0.044],4T1细胞的增殖能力明显降低(0.42±0.02 vs 0.55±0.01;t=-8.528,P=0.001)。结论:TLR4信号通路的活化能够上调乳腺癌4T1细胞中miR-21的表达,其机制与NF-κB的活化有关;靶向抑制miR-21能有效促进4T1细胞的凋亡、抑制4T1细胞增殖。展开更多
动物实验是新化合物向临床转化的基础过程,也是评价其安全性和有效性的关键步骤,因此,合理的剂量设置、动物模型构建与适宜的给药方式是保证实验数据可靠的前提。但是在科学研究的实践中,研究者在选用动物实验条件等方面并没有形成统一...动物实验是新化合物向临床转化的基础过程,也是评价其安全性和有效性的关键步骤,因此,合理的剂量设置、动物模型构建与适宜的给药方式是保证实验数据可靠的前提。但是在科学研究的实践中,研究者在选用动物实验条件等方面并没有形成统一标准,使药效评价出现偏差,不能有效促进新化合物向临床的转化。鉴于此种情况,笔者仅以顺铂参与的使用4T1细胞构建的异体移植瘤模型为例,来探讨铂类化合物治疗三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)的药效学研究中动物实验存在的问题与可能的解决方案,从而使动物实验更好的为临床转化服务。展开更多
文摘目的:探讨TLR4信号对乳腺癌4T1细胞株中miR-21表达的影响及调控机制,研究miR-21对乳腺癌细胞凋亡和增殖的影响。方法:体外培养乳腺癌细胞株4T1,以TLR4配体LPS刺激6、12、18、24 h,实时荧光定量PCR检测4T1细胞中miR-21的表达变化。Western blotting检测TLR4信号活化后4T1细胞中NF-κBp65的表达和磷酸化情况;应用NF-κB抑制剂PDTC预处理30 min,实时荧光定量PCR检测4T1细胞中miR-21的变化。转染miR-21抑制剂和阴性对照后,Annexin-V/PI双标法检测4T1细胞凋亡情况,MTT法检测4T1细胞增殖情况。结果:LPS刺激致TLR4信号活化能够时间依赖性地上调miR-21的表达(18 h时:2.07±0.33 vs 1;t=5.61,P=0.03),TLR4信号能够时间依赖性地上调NF-κB的活化,NF-κB抑制剂PDTC能明显抑制TLR4信号诱导的4T1细胞的miR-21上调(0.70±0.10 vs 2.14±0.32;t=-7.357,P=0.002)。与阴性对照组相比,miR-21抑制剂组4T1细胞的凋亡率明显增高[(24.2±2.4)%vs(14.8±5.1)%;t=2.891,P=0.044],4T1细胞的增殖能力明显降低(0.42±0.02 vs 0.55±0.01;t=-8.528,P=0.001)。结论:TLR4信号通路的活化能够上调乳腺癌4T1细胞中miR-21的表达,其机制与NF-κB的活化有关;靶向抑制miR-21能有效促进4T1细胞的凋亡、抑制4T1细胞增殖。
文摘动物实验是新化合物向临床转化的基础过程,也是评价其安全性和有效性的关键步骤,因此,合理的剂量设置、动物模型构建与适宜的给药方式是保证实验数据可靠的前提。但是在科学研究的实践中,研究者在选用动物实验条件等方面并没有形成统一标准,使药效评价出现偏差,不能有效促进新化合物向临床的转化。鉴于此种情况,笔者仅以顺铂参与的使用4T1细胞构建的异体移植瘤模型为例,来探讨铂类化合物治疗三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)的药效学研究中动物实验存在的问题与可能的解决方案,从而使动物实验更好的为临床转化服务。
