利用T_4RNA连接酶在单链DNA/RNA的5'末端进行荧光、同位素以及生物素标记

利用Ｔ４ＲＮＡ连接酶在单链ＤＮＡ／ＲＮＡ的５′末端进行荧光、同位素以及生物素标记对于核酸研究来说ＤＮＡ／ＲＮＡ的末端标记是一项很重要的技术。酶法标记比有机化学法标记更简单方便。这是由于酶学反应具有温和、特异、可控制性和高效性的特点。酶法的３′端标记技...

马铃薯卷叶病毒基因功能的研究进展

马铃薯卷叶病毒(PLRV)基因组具有较高的同源性和稳定性,不同株系间致病力不同。目前在VPg蛋白氨基酸序列和功能方面以及基因组功能方面取得了较大的进展。综述PLRV基因组核苷酸序列及其表达蛋白质在病毒侵染后的病害症状表达,病毒本身的复制增殖,以及病毒的传播等方面的作用。随着对基因组功能的研究更加深入,一定会给马铃薯的抗病育种带来更多可能。

IRES增强mRNA在树突状细胞中的翻译效率有效地诱发抗肿瘤免疫

目的旨在寻求一种能完全替代目前常规体外转录合成肿瘤相关抗原(TAA)mRNA的方法。方法构建4个质粒包括 pmRNA 荧光素(Luc)、pmRNA IRES-Luc、pmRNA 鸡卵清蛋白(OVA)和 pmRNA IRES-OVA,用 Luc 报告系统检测不同形式的 Luc mRNA 转染小鼠树突状细胞(DC)后的蛋白表达水平;以 OVA 作为靶抗原,以小鼠黑色素瘤肺转移作为动物模型,通过体内细胞毒性 T淋巴细胞(CTL)杀伤实验及荷瘤实验,比较 Capped-OVA mRNA 和 IRES-OVA mRNA 修饰 DC 所诱发的抗原特异性细胞免疫反应。结果将 IRES 序列插入 mRNA 转录模板编码基因 cDNA 序列前,不影响体外转录合成相应 mRNA 的产量。不同形式 Luc mRNA 转染 DC 后8h,IRES-Luc mRNA 较Capped-Luc mRNA 表达的酶活性高1倍,而较 Uncapped-Luc mRNA 高20倍;IRES-Luc mRNA 和Capped-Luc mRNA 转染 DC 96 h 后仍能检测到 Luc 活性。用 Capped-OVA mRNA 和 IRES-OVA mRNA修饰 DC 免疫小鼠1周后行体内 CTL 杀伤实验,结果示 Capped-OVA mRNA/DC 免疫组4 h CTL 杀伤率为(28±3)%,而 IRES-OVA mRNA/DC 免疫组4 h CTL 杀伤率为(32±4)%。荷瘤实验显示,Capped-OVA mRNA/DC 和 IRES-OVA mRNA/DC 免疫小鼠后均能保护小鼠肺部免受黑色素瘤转移结节形成。结论含 IRES 序列的 TAA mRNA 可作为一种更经济、适用的方法,完伞可以取代 Cap 化mRNA 修饰 DC,并能诱导与 Cap 化 mRNA 修饰 DC 同样有效的抗原特异性细胞免疫反应。