改良5'-核苷酸酶-碱性磷酸酶双染色法观察成牙本质细胞层毛细淋巴管

目的:对5'-核苷酸酶-碱性磷酸酶(5'-nucleotidase-alkaline phosphatase,5'-Nase-ALPase)双染色法进行改良,并用其染色观察牙髓成牙本质细胞层是否存在毛细淋巴管。方法:选用牙根发育完成的健康恒前磨牙共44个。首先取15个牙,分为3组,分别用单纯冰冻法、先冰冻后固定法、先固定后冰冻法处理牙髓,选取适用于本研究的标本制备方法。然后取8个牙的牙髓切片对5'-Nase-ALPase双染色法从ALPase反应底物量和反应时间上进行改良。最后取21个牙,其中12例牙髓的切片用改良双染色法染色,9例分3组作对照染色,在光镜下观察成牙本质细胞层中的毛细淋巴管。结果:用改良5'-Nase-ALPase双染色法发现在被染为淡蓝色的成牙本质细胞层中有呈褐色或浅黄色的毛细淋巴管。结论:在牙根发育完成的健康恒前磨牙成牙本质细胞层中有毛细淋巴管。

顺铂致大鼠肾损害与尿5'-核苷酸磷酸二酯酶的关系

目的 :探讨尿 5 '-核苷酸磷酸二酯酶 (5 '- NPD)能否反映顺铂导致的早期肾损害。方法 :采用完全随机设计方法 ,建立顺铂致大鼠肾损害动物模型 ,通过检测顺铂致大鼠肾损害过程中尿 5 '- NPD的活性变化 ,同时用光镜和电镜观察大鼠肾脏的病理改变 ,以验证尿 5 '- NPD能否反映早期肾损害。结果 :实验中空白对照组 (IV组 )和小剂量顺铂组 ( 组 )大鼠的尿5 '- NPD活性以及肾脏病理组织学均无明显改变 ;大剂量顺铂组大鼠 ( 组和 组 )在投药后第 2天 ,尿 5 '- NPD活性开始升高 ,第 4天到达高峰 ,活性明显高于 组和 组 ,而肾脏的病理改变则出现得相对迟缓 ,投药后第 8天可见肾小管中度扩张 ,部分区域有炎性细胞浸润 ;第 15天有较多肾实质细胞坏死。结论 :尿 5 '- NPD指标对顺铂导致的肾损害反映较灵敏 。

TBA、ALP、5'-NT、AFU、ADA、CHE、γ-GT、PA水平变化在肝脏疾病患者中的检测价值

分析8项生化指标在肝脏疾病患者中的检测价值。方法 抽取2023年9月-2024年6月我院肝脏疾病患者、健康体检正常者各30例,分析分析检验结果。结果 TBA、ALP、5'-NT、AFU、ADA、γ-GT水平对比,观察组高于对照组,PA、CHE对比,低于对照组(P<0.05),观察5'-NT、TBA、ADA、AFU、ALP、γ-GT指标发现,急性肝炎患者以上指标明显增高,而慢性肝炎主要表现为γ-GT、TBA增高,肝硬化要表现为ADA、TBA、γ-GT、AFU、ALP水平增高,肝硬化患者主要表现为TBA、5'-NT、ADA、γ-GT、AFU增高,PA、CHE水平出现下降。结论 在肝脏疾病患者病情诊断中,可以对TBA、ALP、5'-NT、AFU、ADA、CHE、γ-GT、PA水平进行检测,从而提升患者病情诊断准确性。

3',5'-二磷酸核苷酸酶在亲和双水相胶束系统中分配行为研究

以高分子表面活性剂HM-EO为主成相剂,金属螯合表面活性剂Triton X-114-IDA-Cu(Ⅱ)(TX-Cu(Ⅱ))为辅成相剂,构建新型亲和双水相胶束系统(ATPMS)以提高目标产物的萃取选择性,并考察重组蛋白3',5'-二磷酸核苷酸酶(YND)在系统中分配行为。结果表明,系统中不含亲和配基时YND主要分配于胶束缺失相;随着亲和配基含量的增加,YND与TX-Cu(Ⅱ)亲和结合而逐渐分配到胶束富集相并且在系统中显示出优异的稳定性;调节溶液p H能够影响YND亲和分配,最适萃取条件为pH 9.0;增大无机盐浓度,导致更多杂蛋白分配到胶束缺失相,然而对YND分配影响较小。在2.5%HM-EO、0.125%TX-Cu(Ⅱ)、p H 9.0、50 mmol/L Na Cl条件下,实验获得65.8%的酶活回收率。因此亲和ATPMS可以有效用于对富组氨酸蛋白YND的分离纯化,为该体系在重组蛋白的分离纯化试验提供相应的基础依据。

高效毛细管电泳法测定酱油中5′-单磷酸核苷酸

建立高效毛细管电泳同时分离测定酱油中两种核苷酸鸟嘌呤-5′-单磷酸(GMP)和次黄嘌呤-5′-单磷酸(IMP)的方法。电泳条件:以50μm×60.2cm(有效长度50cm)未涂敷石英毛细管为分离柱,30mmol/L硼砂+30mmol/L碳酸钠+60mmol/L羟丙基-β-环糊精为分离缓冲溶液,50mmol/L醋酸溶液为样品介质,检测波长为254nm。GMP及IMP的校正峰面积与质量浓度在5～100mg/L范围内具有良好线性关系,线性相关系数分别为0.9998和0.9997,检出限均为2mg/L,定量限均为5mg/L。用该法测定了9种酱油,并与文献报道的高效液相色谱法的结果进行比较,结果满意。

5'-磷酸二酯酶强化香菇风味基料中鲜味成分

研究了5'-磷酸二酯酶强化香菇鲜味成分的工艺条件及其作用.在香菇打浆料中添加5'-磷酸二酯酶及酵母粉,研究各因素对5'-核苷酸产量的影响.结果表明,酵母粉用量、5'-磷酸二酯酶用量、酶解体系pH值、酶解温度及时间等因素对鲜味核苷酸生成有重要影响,正交试验优化的酶解工艺条件为:酵母粉用量5%,5'-磷酸二酯酶用量5%,pH值4.0,酶解温度60℃,酶解时间60min.在此条件下制备的香菇风味基料中鲜味核苷酸(5'-IMP、5'-GMP)产量达到30.01 mg/g,较未经5'-磷酸二酯酶处理基料的鲜味核苷酸产量提高了3倍.

5'-磷酸二酯酶的应用与研究进展

5'-磷酸二酯酶是一种能将单链DNA和RNA水解为5′-核苷酸的磷酸二酯酶,是酶法生产5′-核苷酸的主要工业用酶。文中对5'-磷酸二酯酶的来源、制备方法、应用及研究进展进行了综述。

高活力5′-磷酸二酯酶制备及水解RNA的研究

目的:获得高活力5′-磷酸二酯酶液,提高核酸RNA酶解效率。方法:采用超滤和盐析技术对从麦芽根浸提液中纯化5′-磷酸二酯酶工艺进行研究,采用单因子试验法优化酶解工艺条件。结果:浸提液依次经过5万Da超滤膜浓缩、40%饱和度硫酸铵盐析、5万Da超滤膜脱盐后,酶活力可达1 500U/ml;第1次超滤膜透过液可作为浸提液循环使用,酶活力是水浸提的1.15倍;第2次超滤膜透过液浓缩5倍后,可回收56.46%硫酸铵,浓缩母液可按1∶2比例循环使用;在底物浓度5.8%、酶用量8%、反应时间2h条件下,RNA酶解率可达95%。结论:初步建立了适合工业化规模的核苷酸生产新工艺。

麦芽根提取5′-磷酸二酯酶对RNA酶解工艺研究

从麦芽根提取中的5′-磷酸二酯酶,原酶液酶活达到300U/mL。将提取的酶液用于水解酵母RNA,得到5′-AMP、UMP、CMP、GMP四种核苷酸,并系统研究了麦芽根5′-磷酸二酯酶对核酸的酶解条件。结果表明,最佳反应条件为:底物浓度3%,酶用量5%,温度68℃,pH6.5,水解时间为4～5h,在此条件下,酶解率可以达到84%。在酶解2h内补加RNA底物可提高酶利用率。

麦芽根中5′-磷酸二酯酶的分离提纯及其固定化

从麦芽根中分离得到了5′-磷酸二酯酶,采用戊二醛为交联剂,将该酶固定到壳聚糖上,用于酵母RNA的催化水解,以制备5′-核苷酸.研究了酶固定化反应的影响因素,在最适条件下,酶活回收率可达53.6%.进一步研究了固定化5′-磷酸二酯酶的酶学性质,测得固定化酶的米氏常数Km为15.38 mg/mL(以RNA为底物),固定化酶催化水解RNA的最适温度为75℃,最适pH值为5.5,实验发现固定化5′-磷酸二酯酶具有更好的耐热性和更高的纯度.

5′-核苷酸酶的测定及临床意义

目的对5′-核苷酸酶(5′-NT)与碱性磷酸酶(ALP)进行测定,探讨5′-NT在肝胆疾病与骨科疾病中诊断与鉴别诊断的应用。方法选择2012年1—2月健康体检者30例为对照组,另选择2012年1—5月在肝胆外科住院患者48例(各类肝胆疾病组)和骨科住院患者15例(骨病组),测定三组受试人员5′-NT与ALP水平。结果各类肝胆疾病组患者的5′-NT、ALP水平显著高于骨病组及对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 5′-NT是诊断肝胆疾病的特异性指标,与ALP联合应用可鉴别诊断肝胆疾病与骨骼疾病。

反相离子对色谱法测定注射用核糖核酸酶解产物中的5′-核苷酸

目的建立反相离子对色谱法同时测定注射用核糖核酸酶解产物中4种5'-核苷酸的方法,根据核苷酸的含量计算样品中核糖核酸的含量。方法用蛇毒磷酸二酯酶将样品中的核糖核酸水解为5'-核苷酸,采用岛津VP-ODS(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相A为甲醇-水(5:95)[含20 mmol L-1KH2PO4和1%(v/v)四丁基氢氧化铵(TBAOH)溶液,pH=6.5],流动相B为甲醇-水(80:20)[含1%(v/v)TBAOH溶液,pH=6.5],梯度洗脱,检测波长为254 nm。结果建立的色谱法能将4种核苷酸良好分离,4种核苷酸在0.50～15μg mL-1线性关系良好,相关系数分别为0.999 8、0.999 9、0.999 9、0.999 9;平均回收率(n=6)均在95.1%～106.3%,RSD均<3.5%。结论该方法专属性好,具有一定的准确性,可用于检测注射用核糖核酸的含量,测定结果可为注射用核糖核酸的质量研究和评价提供依据。

5型磷酸二酯酶参与急性心肌梗死发生的机制及研究进展

5型磷酸二酯酶(PDE5)选择性水解细胞内关键的第二信使3,5-环磷酸鸟苷(cGMP),参与心血管病的病理生理过程。研究证实,PDE5在急性心肌梗死(AMI)中表达升高,PDE5抑制剂能够降低心肌梗死面积,预防AMI并发症,降低心肌梗死再发率。本综述汇总了PDE5参与AMI发病的基础与临床研究证据,总结了PDE5参与AMI发生机制,讨论PDE5成为治疗AMI新靶点的可能。

毛细管电泳法测定苷肽胶囊中3种核苷酸

提出了毛细管电泳法同时分离测定苷肽胶囊中3种核苷酸腺嘌呤-5′-单磷酸、胞嘧啶-5′-单磷酸和鸟嘌呤-5′-单磷酸含量的方法。以15 mmol.L-1硼砂+35 mmol.L-1碳酸钠+60 mmol.L-1羟丙基-β-环糊精混合溶液为电解质溶液,运行电压30 kV,于254 nm波长处进行紫外检测。3种核苷酸的线性范围依次为5.0～80.0,8.0～80.0,8.0～80.0 mg.L-1,检出限(3S/N)依次为2.0,3.0,3.0 mg.L-1。采用该方法对苷肽胶囊样品中3种核苷酸的含量分别进行了测定,所得加标回收率在92.1%～102.7%之间,相对标准偏差(n=5)均小于等于5.0%。

酶法合成2＇－脱氧－5－氟尿苷

本文采用大肠杆菌核苷磷酸化酶，以５－氟尿嘧啶（ＦＵ）、２＇－脱氧尿苷（ｄＵ）和磷酸盐为底物酶法合成２＇－脱氧－５－氟尿苷，实验结果表明，含１０ｍｍｏｌ／ＬｄＵ、３０ｍｍｏｌ／ＬＦＵ、１０－３０ｍｍｏｌ／Ｌ磷酸盐的混合物加入５％培养２４ｈ的大肠杆菌湿菌体于ｐＨ７．０反应３ｈ，底物ｄＵ的转化率可达４５．９％。

环腺苷酸结合蛋白在心脏功能及相关心脏疾病中的作用研究进展

3,5-环磷酸腺苷（cAMP）是心血管系统中细胞对于外界刺激反应的关键信号分子。它控制很多生物效应,如细胞增殖、变异和凋亡等。cAMP是ATP通过跨膜腺苷酸环化酶激活的G蛋白偶联受体^（[1]）。细胞内cAMP不仅由腺苷酸环化酶产生,而且由cAMP的磷酸二酯酶调控其降解,催化cAMP水解成5-AMP。

嘌呤核苷酸代谢与恶性肿瘤关系的研究进展

核苷酸是多种生命活动所必须的有机小分子,嘌呤核苷酸的合成和分解代谢异常是一些疾病产生的基础,也是其治疗的靶点。肿瘤的发生、发展涉及大量的病理生理学过程,包括嘌呤核苷酸代谢失衡。参与嘌呤核苷酸合成代谢和分解代谢的多种酶与肿瘤细胞的增殖、耐药有关,尿酸抗氧化特性和促炎特性的失衡也可诱发肿瘤并促其进展。异常的嘌呤核苷酸代谢可通过调节信号转导通路影响基因和蛋白的表达,促进细胞恶性转化、侵袭和转移,且不同肿瘤患者的核苷酸代谢特点不完全相同。本文简要综述了嘌呤核苷酸代谢与恶性肿瘤关系的基础研究和流行病学研究进展,旨在为恶性肿瘤的预防、治疗及预后判断提供依据。

Mg^2+介导底物亲和力的改变增加黍子过氧化物酶的磷酸酶活性

黍子过氧化物酶(proso millet peroxidase,PmPOD)具有磷酸酶活性,可以断裂DNA中磷酸二酯键及脱氧核糖核苷酸(dNMPs)中磷酸单酯键。在此反应过程中,Mg^2+显著增强PmPOD的磷酸酶活性,但其具体的机制尚不明确。本文采用紫外-可见分光光谱法和荧光光谱法,研究了以dNMPs为底物时,Mg^2+对PmPOD磷酸酶活性的影响,并对其反应机制进行了初步的探究。紫外-可见分光光度法结果表明:Mg^2+介导了PmPOD与底物的相互作用,但Mg^2+并未直接与PmPOD发生相互作用。荧光光谱进一步表明,在Mg^2+存在的情况下,dNMPs对PmPOD内源荧光淬灭方式发生变化,由动态淬灭转变为静态淬灭。同时还发现,dNMPs与PmPOD的结合常数Ka增加约2~10倍(与不存在Mg^2+条件相比),依次为:KadCMP>KadGMP>KadTMP>KadAMP。高效液相色谱表明,Mg^2+可增强PmPOD水解dNMPs的速率3~13倍,且水解速率VdCMP>VdGMP>VdTMP>VdAMP,与结合常数的变化一致。因此,我们得出结论,PmPOD发挥磷酸酶活性时,Mg^2+首先与dNMPs形成中间产物,这一中间产物更适合与PmPOD形成复合物,增大了底物dNMPs与PmPOD结合常数,进而加速了PmPOD水解dNMPs。本研究为Mg^2+在过氧化物酶催化DNA水解的机制提供了相关依据,为研究金属离子增强蛋白酶活性的机制提供了理论基础。

毛蕊花糖苷对中波紫外线所致小鼠皮肤损伤的保护作用研究

目的 研究毛蕊花糖苷对中波紫外线(UVB)照射所致小鼠皮肤损伤的保护作用。方法 将Balb/c小鼠随机分为正常对照组、UVB模型组、基质+UVB组、1%毛蕊花糖苷+UVB组、5%毛蕊花糖苷+UVB组、5%维生素E+UVB组,每组10只。除正常对照组外,其余4组小鼠采用UVB照射建立皮肤损伤模型,单次照射强度为0.326 mW·cm^(-2),每次照射10 min,隔日照射1次,共照射10次,累积照射剂量为1 956 mJ·cm^(-2)。基质组和各给药组小鼠分别于每次照射前30 min将不含药物的空白基质、1%毛蕊花糖苷乳膏、5%毛蕊花糖苷乳膏、5%的维生素E乳膏涂于小鼠背部脱毛处。末次照射24 h后,处死小鼠,取背部皮肤进行相关指标的检测:皮肤称质量及皮肤厚度测量检测皮肤水肿;苏木精-伊红(HE)染色观察小鼠皮肤组织形态学特征;免疫组织化学法检测小鼠皮肤组织磷酸化的H2AX组蛋白(Phosphorylated histone H2AX,γH2AX)的表达;酶联免疫吸附法测定皮肤组织中环丁烷嘧啶二聚体(cyclobutyl pyrimidine dimers,CPDs)、6-4光产物(6-4photoproducts, 6-4PPs)和8-羟基-2-脱氧鸟嘌呤核苷(8-hydroxy-2-deoxyguanosine, 8-OHdG)的水平。结果 与正常对照组比较,UVB模型组小鼠皮肤出现水肿、粗糙、红肿、溃烂、表皮增厚等;γH2AX表达量明显升高(P<0.01);CPDs、6-4PPs、8-OHdG的含量均明显增加(P<0.01)。与UVB模型组比较,毛蕊花糖苷给药组小鼠皮肤组织的水肿、粗糙、红肿、溃烂、表皮增厚等症状明显改善;组织中γH2AX的表达明显降低(P<0.01);CPDs、6-4PPs、8-OHdG的含量明显减少(P<0.01)。结论 毛蕊花糖苷能改善UVB照射引起的小鼠皮肤损伤,且这种作用的发挥可能与其降低CPDs、6-4PPs和8-OHdG等因子的表达,改善DNA损伤有关。