祛风通络方对5/6肾切除大鼠肾间质纤维化相关因子NF-κB及E-cad表达的影响

目的观察祛风通络方对5/6肾切除大鼠肾间质纤维化相关核转录因子κB(Nuclear factorκB,NF-κB)、E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)的影响。方法54只雄性SD大鼠随机分为假手术组(A组)9只、5/6肾切除造模大鼠45只。其中5/6肾切除大鼠按照其干预方式又分为模型组(B组)、洛丁新组(C组)、祛风通络方高剂量组(D组)、祛风通络方中剂量组(E组)、祛风通络方低剂量组(F组)。4周干预后检测各组大鼠24 h尿蛋白定量、血清肌酐及尿素氮;通过RT-PCR及免疫组化法检测肾脏组织中NF-κB及E-cad的表达,Masson染色观察肾组织病理形态。结果干预结束后,与模型组比较,干预各组肾功能均有改善,尿蛋白、血清肌酐及尿素氮下降(P<0.01),干预各组肾组织NF-κB表达下降(P<0.05),而E-cad表达上调(P<0.05),组间比较,祛风通络方高剂量组与洛丁新组效果明显。结论祛风通络方对肾小管间质纤维化有改善作用,其机制主要是通过下调肾组织NF-κB及上调E-cad等相关因子的表达。

肾安提取液对5／6肾切除模型肾组织学的影响

目的 本研究将药物的有效作用部位黄芪甲苷、淫羊藿苷、大黄蒽醌等进行分离提取，观察其复方提取物(肾安提取液)对残余肾模型(RK)肾组织病理学及增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。方法 Wistar雄性大鼠随机分成7组：正常组、假手术组、模型组、肾安2g／kg组、肾安4g／kg组、肾安8g／kg组及尿毒清组行肾大部切除术，在术后3个月每公斤体重分别灌服肾安2g、4g、8g及尿毒清3，6g，假手术及模型组灌服0．9％Nacl 10ml／kg，每日1次，疗程2个月。采用大鼠存活率、血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、PCAN及IV型胶原表达(CoIV)等为观察指标。结果 肾安不同剂量组均能明显提高RK模型存活率、能明显降低BUN、SCr(与模型组比较P<0．05，P<0．01)，其中以肾安大剂量组最显著；肾组织积分结果表明，肾安4g／kg组及8g／kg组肾小球及间质纤维化较模型组明显减轻(P<0．05，P<0．01)；免疫组化及半定量分析结果表明上述两组总的肾小球细胞、PCAN阳性细胞数及CoIV表达明显减少(与模型组比较P<0．05，P<0．01)。结论 PCNA表达与肾纤维化呈正相关关系。肾安提取液能减少RK肾组织PCNA表达，抑制纤维化，稳定肾功能，提高存活率，以大剂量组更明显，进一步探索中药提取物对肾纤维化的影响具有重要意义。

扶正活血方对5/6肾切除大鼠肾组织Fn和TGF-β1mRNA表达的影响

目的:探讨扶正活血方对慢性肾功能衰竭(CRF)大鼠肾组织纤维连接蛋白(Fn)和转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA表达的影响。方法:采用5/6肾切除制作大鼠 CRF 模型。模型制作成功后随机将模型大鼠分为模型组、扶正活血方组、黄芪组、丹参组、依那普利组,并与正常组对照。治疗2个月后,观察各组 CRF 大鼠肾组织 Fn 和 TGF-β1 mRNA 表达情况。结果:模型组血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、24小时尿蛋白定量(24hpro)明显高于正常组,肾组织 Fn 和 TGF-β1 mRNA 表达明显强于正常组。经过扶正活血方治疗后,肾组织 Fn 和 TGF-β1 mRNA 表达明显减弱,蛋白尿水平明显降低。结论:扶正活血方可改善CRF 大鼠肾功能,延缓 CRF 进展,其机制可能与降低 CRF 大鼠肾组织 Fn 和 TGF-β1 mRNA 表达有关。

5/6肾切除大鼠肾组织CD_(44)和CD_(54)的变化及阿魏酸钠和氯沙坦的干预作用

目的:探讨5/6肾切除大鼠肾小球硬化及肾小管间质纤维化过程中肾组织细胞黏附分子CD44和CD54的表达及阿魏酸钠(SF)和氯沙坦干预治疗的影响。方法:将5/6肾切除大鼠随机分为模型组和阿魏酸钠治疗组、氯沙坦治疗组,并设假手术组对照。12周后观察各组大鼠血尿生化指标、残肾组织的病理改变,检测肾组织内细胞黏附分子CD44、CD54的表达。结果:模型组残肾组织CD44及CD54表达增高,大量炎细胞浸润,肾小球硬化和间质纤维化,肾功能恶化。阿魏酸钠及氯沙坦治疗组CD44及CD54的表达减少,炎细胞浸润减少,肾小球增生、硬化程度、小管间质纤维化程度明显减轻;肾功能改善。结论:阿魏酸钠及氯沙坦治疗组都可通过抑制5/6肾切除大鼠CD44及CD54的表达而延缓肾小球硬化和间质纤维化的进展。

六味地黄汤对慢性肾衰竭大鼠肾组织ZO-1、N-cadherin及Vimentin表达的影响

目的观察六味地黄汤对慢性肾衰竭大鼠肾组织紧密连接蛋白1(ZO-1)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达的影响,探讨其干预肾间质纤维化的作用机制。方法健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、六味地黄汤组和依那普利组。5/6肾切除术复制慢性肾衰竭模型,各给药组给予相应药物灌胃,每日1次。给药8周后,腹主动脉放血法处死大鼠,检测大鼠肾功能指标,HE染色观察肾组织病理变化,Masson染色观察胶原纤维沉积,免疫组化检测肾组织ZO-1、N-cadherin、Vimentin蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠24 h尿蛋白、血尿素氮和血肌酐水平明显升高(P<0.05);肾组织病变明显,大量胶原纤维沉积(P<0.05);肾组织ZO-1蛋白表达明显降低(P<0.05),N-cadherin、Vimentin蛋白表达明显升高(P<0.05)。与模型组比较,六味地黄汤组大鼠24h尿蛋白、血尿素氮和血肌酐水平明显降低(P<0.05);肾组织病变程度减轻,少量胶原纤维沉积(P<0.05);肾组织ZO-1蛋白表达明显升高(P<0.05),N-cadherin、Vimentin蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论六味地黄汤通过上调ZO-1的表达,下调N-cadherin、Vimentin的表达,延缓肾间质纤维化,其作用机制与抑制肾小管上皮细胞间充质转化有关。

氟伐他汀对5/6肾切除大鼠肾脏皮质细胞外基质积聚的影响

目的观察降脂药氟伐他汀对5/6肾切除大鼠肾皮质细胞外基质(ECM)积聚的影响和探讨其降脂作用外的肾脏保护机制。方法将5/6肾切除大鼠随机分为模型组和氟伐他汀治疗组(治疗组),另设假手术组作为对照。实验期间测定尿蛋白排泄率;氟伐他汀处理(7mg·kg-1·d-1)13周后免疫组化法检测肾小球Ⅳ型胶原(ColⅣ)及纤连蛋白(FN)蛋白表达;酶谱法检测肾皮质基质金属蛋白酶(MMP)-2活性;免疫印迹检测金属蛋白酶组织抑制物(TIMP)-2蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组大鼠尿蛋白排泄、肾小球Ⅳ型胶原和FN表达均明显增加(均为P<0.01)。模型组大鼠肾皮质MMP-2活性较假手术组明显降低(P<0.01),而TIMP-2蛋白表达明显上调(P<0.01)。氟伐他汀治疗后这些改变均明显好转。结论氟伐他汀可能通过增加5/6肾切除大鼠肾脏MMP-2活性和降低TIMP-2表达,从而能增加细胞外基质降解和减轻肾小球细胞外基质积聚。

残肾大鼠主动脉重塑及缓激肽B_2受体

目的研究1/6残肾大鼠主动脉重塑情况和BKB2R mRNA水平.方法32只Wistar大鼠随机分成模型组和假手术组,每组16只.使用5/6肾切除术构建残肾大鼠模型.造模前和造模后15、30、60、120 d检测血压和血清肌酐.造模后1月和4月每组处死大鼠各8只,RT-PCR法检测主动脉BKB2R mRNA的水平;取同一部位胸主动脉石蜡切片行天狼星红染色.结果造模后15 d血压(180±22)mm Hg和血清肌酐(44.5±9.3)μmol/L较假手术组,分别(109±11)mm Hg和(24.5±5.3)μmol/L显著升高(均P＜0.01),并维持在较高水平,至术后120 d无显著变化.模型组主动脉BKB2R mRNA水平(×103拷贝数)术后1月为22.48土6.26,4月为6.25±1.78,呈现时间依赖性持续降低(P＜0.05).造模后1月大动脉中膜胶原纤维含量略增加,造模后4月大动脉中膜胶原纤维增生显著.结论1/6残肾大鼠模型至少在术后15 d出现显著的肾功能不全的表现,并维持到术后4月.残肾大鼠更易出现大血管重塑,血管BKB2R mRNA的水平呈时间依赖性的显著降低.

尿毒症皮肤瘙痒小鼠模型的构建

构建尿毒症皮肤瘙痒(uremic pruritus,UP)小鼠模型。方法 将16只7周龄雄性ICR小鼠随机平均分为模型组和假手术组。模型组行改良5/6肾切除术,术后12周于小鼠颈背部皮内注射β2微球蛋白(β2-MG,0.67mg/kg),每天1次,注射后1h观察并记录30min内小鼠抓挠行为,连续注射1周。检测血肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)以评估小鼠肾功能;HE染色观察肾脏及皮肤组织病理变化;免疫组化检测皮肤组织中嗜碱性粒细胞、IL-31、IL-1β、TNF-α、SP的表达;Western blot检测IL-31、IL-1β、TNF-α、SP蛋白表达水平。结果 与假手术组相比,模型组小鼠抓挠次数明显增加(P<0.001);Scr和BUN浓度显著升高(P<0.01);肾脏和皮肤组织病理改变显著;皮肤组织中嗜碱性粒细胞、IL-31、IL-1β、TNF-α、SP表达明显提高(P<0.05),皮肤组织中IL-31、IL-1β、TNF-α、SP蛋白表达明显增加(P<0.05)。结论 改良5/6肾切除术联合皮内注射β2-MG可诱导小鼠尿毒症皮肤瘙痒模型。

蛋白酪氨酸激酶2/信号转导和转录活化因子3信号通路在局灶节段性肾小球硬化小鼠模型中的机制研究

目的通过精准化5/6肾切除术建立局灶节段性肾小球硬化(FSGS)小鼠模型,探讨蛋白酪氨酸激酶2/信号转导和转录活化因子3(JAK2/STAT3)信号通路在FSGS小鼠模型中的发病机制。方法选取6周龄雄性C57BL/6小鼠60只,并随机分为对照组(n=30)和FSGS组(n=30)。FSGS组小鼠接受精准化5/6肾切除术,应用体积公式计算肾脏切除体积。对照组为假手术组,仅暴露双侧肾脏,剥离肾周脂肪组织后复位缝合。比较2组小鼠24 h尿蛋白、血肌酐、尿素氮等指标水平;应用苏木精-伊红(HE)染色观察肾脏组织的病理学变化;应用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)测定肾组织JAK2/STAT3信号通路的目标基因;应用Western Blot测定JAK2/STAT3信号通路的目标蛋白;应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测JAK2/STAT3信号通路下游炎症因子及纤维化因子的水平。结果造模过程中,FSGS组有1只小鼠死于麻醉,予以排除;精准化5/6肾切除术建立FSGS小鼠模型的造模成功率为89.7%(26/29)。与对照组相比,FSGS组小鼠24 h尿蛋白、血肌酐、尿素氮水平较高,差异有统计学意义(P<0.01)。FSGS组小鼠HE染色可见大量肾小管上皮细胞凋亡、坏死,肾小囊腔扩张,肾小球代偿性肥大及局灶性硬化,系膜细胞和系膜基质增生,伴炎细胞浸润。术后10周,FSGS组小鼠肾组织JAK2 mRNA、STAT3 mRNA表达水平,磷酸化酪氨酸激酶2(p-JAK2)、JAK2、磷酸化信号转导和转录活化因子3(p-STAT3)、STAT3蛋白表达水平,以及白细胞介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子-β(TGF-β)水平均升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论通过精准化5/6肾切除术可成功建立小鼠FSGS模型,而JAK2/STAT3信号通路活化可通过促进炎症反应、肾组织纤维化等多种途径参与FSGS的发生及发展过程。