5×FAD转基因小鼠在阿尔茨海默病研究中的应用进展

5×FAD转基因小鼠(transgenic mice with five familial Alzheimer’s disease)是携带5个家族性基因突变的APP/PS1转基因小鼠,其中与β-淀粉样蛋白前体(amyloid precursor protein,APP)相关的突变为K670N/M671L(Swedish)、1716V(Florida)和V7171(London),与早老素-1(presenilin 1,PS1)相关的突变为MI46L和L286V。5×FAD小鼠在1.5月龄时脑内已有大量的β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ),2月龄时开始出现神经炎性斑(neuritic plaque,NP)。5×FAD小鼠的病理表型包括淀粉样斑块聚集、神经元丢失、神经胶质细胞增生和记忆功能障碍等。5×FAD小鼠的生物学特性可能涉及脑内Aβ斑块的形成变化、Tau蛋白过度磷酸化、突触功能障碍、神经炎症反应、线粒体功能障碍、血脑屏障损伤、神经元损伤、内质网应激和眼部病变等。作为阿尔茨海默病的经典动物模型,5×FAD转基因小鼠在早期即可模拟AD患者晚期的神经病理过程及行为学表现,被广泛应用于AD发病机制研究和AD新药开发。本文对5×FAD转基因小鼠模型的模型构建、生物学背景、生物学特性及AD防治药物的研发应用进行总结,以期为5×FAD转基因小鼠在AD研究中的应用提供参考与借鉴作用。

姬松茸多糖对阿尔茨海默病5×FAD转基因小鼠学习障碍的改善作用及机制研究

目的观察姬松茸多糖改善阿尔茨海默病5×FAD转基因小鼠学习障碍的作用,并探索其作用机制。方法4月龄阿尔茨海默病5×FAD转基因小鼠60只,雌雄各半,分为对照组(生理盐水组每次0.2 ml)、姬松茸多糖组(姬松茸多糖200 mg/kg)和石杉碱甲组(石杉碱甲0.1 mg/kg),每组20只,每日一次灌胃,持续60 d给药。给药结束后,采用Morris水迷宫及避暗实验评价各组小鼠学习和记忆能力;并通过Western blot检测各组实验小鼠海马中P53、Bcl-2、BAX及Caspase-3等凋亡蛋白的变化。结果与对照组比较,给予石杉碱甲及姬松茸多糖干预后能够增强5×FAD转基因小鼠的学习与记忆能力,脑部神经元的P53、BAX、Caspase-3的表达下降,Bcl-2的表达上升。结论姬松茸多糖能够提高阿尔茨海默病5×FAD转基因小鼠的学习与记忆能力,其作用可能与抑制海马神经元的凋亡有关。

调补心肾方通过活化PI3K/Akt/mTOR通路促进阿尔茨海默病5xFAD转基因小鼠突触可塑性相关蛋白的合成

目的探讨调补心肾方(党参、制首乌、枸杞子、黄芪等)对阿尔茨海默病5xFAD转基因小鼠突触可塑性的影响及机制。方法取5月龄雄性野生型(WT)小鼠和5xFAD转基因小鼠各18只,分别随机分为对照组(0.9%NaCl)、调补心肾方组(颗粒剂,4.18 g·kg^(-1))、安理申组(盐酸多奈哌齐,0.625 mg·kg^(-1)),每组6只。按照上述分组灌胃给药,每日1次,共60 d。采用透射电镜观察小鼠海马组织超微结构;Western Blot法检测小鼠皮层组织中Synaptophsin、PSD-95、p-NMDAR1、NMDAR1、p-CaMKⅡa、CaMKⅡa、PI3K、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR蛋白表达水平。结果与WT对照组比较,5xFAD对照组小鼠海马CA1区突触的超微结构不规则,线粒体萎缩、减少,线粒体嵴断裂、消失,突触膜弯曲不规则,突触囊泡减少,突触后致密物(PDS)变薄甚至断裂;皮层组织中Synaptophsin、PSD-95、p-NMDAR1/NMDAR1、p-CaMKⅡa/CaMKⅡa、PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白表达均明显下调(P<0.05)。与5xFAD对照组相比较,5xFAD调补心肾方组小鼠海马CA1区突触的超微结构有明显变化,线粒体数量增加,突触囊泡增多,突触膜完整,突触后致密物有增厚现象;皮层组织中Synaptophsin、PSD-95、p-NMDAR1/NMDAR1、p-CaMKⅡa/CaMKⅡa、PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白表达明显上调(P<0.05)。结论调补心肾方可能通过活化PI3K/Akt/mTOR通路,促进突触可塑性相关蛋白合成,进而改善AD的认知功能障碍。

灸法早期干预对5XFAD转基因小鼠β淀粉样蛋白_(1-40)表达的影响

目的探讨灸法早期干预对阿尔茨海默病模型(AD)小鼠脑内Ab_(1-40)的影响,对艾灸防治AD的作用机制进行探讨。方法 PCR法鉴定转基因AD传代小鼠的基因表型,选取1.5月龄雌性转基因阳性Tg6799小鼠随机分为模型组9只和治疗组8只,同龄、同背景的C57BL/6J野生型雌性小鼠9只为正常组。治疗组进行双侧心俞、肾俞麦粒灸治疗,治疗结束后,应用免疫组化法检测小鼠额叶皮层及海马区Ab_(1-40)的表达水平。结果与模型组比较,治疗组小鼠大脑额叶皮层和海马区Ab_(1-40)表达明显减少(P<0.01,P<0.05)。结论艾灸疗法早期干预可减少AD模型小鼠脑内Ab_(1-40)的表达,延缓AD病理过程的进展。

参芪益智颗粒对5XFAD转基因小鼠学习记忆能力和脑内β淀粉样蛋白_(1-42)含量的影响

目的观察参芪益智颗粒对阿尔茨海默病5XFAD转基因小鼠行为学和脑组织β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)含量的影响,探讨其改善5XFAD小鼠学习记忆能力的作用机制。方法将4月龄C57BL?6野生型小鼠随机分为生理盐水对照组和中药对照组,同时将同月龄5XFAD小鼠随机分为模型组、参芪益智颗粒组和石杉碱甲组,每组15只,各给药组给予相应药物灌胃,连续60 d。给药结束后,采用筑巢实验、避暗实验和Morris水迷宫实验评价各组小鼠学习和记忆能力;免疫组化和免疫荧光方法观察各组小鼠皮层和海马组织老年斑块、Aβ1-42、小胶质细胞激活的标记物小胶质细胞/巨噬细胞特异性蛋白1及星形胶质细胞激活标记物胶质纤维酸性蛋白含量的变化。结果与生理盐水对照组比较,模型组小鼠筑巢实验得分明显降低,避暗实验步入潜入期明显缩短,水迷宫实验逃避潜伏期明显延长,脑内老年斑块明显增多,Aβ1-42含量明显升高,胶质细胞激活明显增强。参芪益智颗粒组小鼠上述指标均恢复或接近至野生型小鼠水平,与模型组小鼠比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论参芪益智颗粒改善5XFAD小鼠学习和记忆能力的机制与减少脑内老年斑数量、抑制胶质细胞过度激活、减少脑内Aβ1-42的含量有关。

5xFAD转基因小鼠与阿尔茨海默病患者大脑中β-淀粉样蛋白特征的异同

目的探明5xFAD转基因小鼠与阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)患者大脑中β-淀粉样蛋白(amyloidβ-protein,Aβ)斑块特征的异同。方法利用免疫荧光染色通过单克隆抗体(4G8)检测了5xFAD转基因小鼠与AD患者大脑中的Aβ斑块,利用CaseViewer和GraphPad Prism 8软件对其脑内Aβ斑块进行定性定量分析,比较5xFAD转基因小鼠与AD患者大脑中Aβ斑块在形态、数量、类型等特征上的异同。结果5xFAD转基因小鼠与AD患者大脑中Aβ斑块特征的主要相同点包括:在两者的大脑皮质和海马区中均可见明显的Aβ斑块;两者均可见弥散型Aβ斑块和致密型Aβ斑块;两者脑内均以直径<15μm的Aβ斑块占比最高;两者脑内相同面积中直径为[45,60)μm及≥60μm Aβ斑块的数量相似;两者脑内均可见明显的淀粉样脑血管病变(cerebral amyloid angiopathy,CAA)。5xFAD转基因小鼠与AD患者大脑中Aβ斑块特征的主要不同点包括:在5xFAD转基因小鼠脑内直径<15μm的Aβ斑块显著少于AD患者脑内相同面积中的Aβ斑块(P<0.001);而直径在[15,30)μm、[30,45)μm的Aβ斑块显著多于AD患者脑内相同面积中的Aβ斑块(P=0.001,P=0.020);此外,在AD患者脑内致密型Aβ斑块中可见有典型日冕结构的Aβ斑块,而5xFAD转基因小鼠脑内未见典型日冕结构的Aβ斑块。结论5xFAD转基因小鼠大脑中Aβ斑块出现的位置、主要形态、相同面积中直径为[45,60)μm及≥60μm以上Aβ斑块数量以及CAA等方面的特征与我国AD患者高度相似,但是在大脑相同面积中直径<15μm、[15,30)μm、[30,45)μm的Aβ斑块数量以及在有无典型日冕结构Aβ斑块等方面的特征与我国AD患者不同,明确以上特征是使用5xFAD转基因小鼠研究我国AD患者相关病变特征的重要前提。

藏药旺拉活性成分对APP/PS1转基因5×FAD小鼠老年斑形成及炎症反应的影响

目的:研究藏药旺拉活性成分对APP/PS1双转基因5×FAD小鼠脑内老年斑和炎症反应的影响。方法:选取20只4月龄5×FAD小鼠,随机分成模型组(n=10)和藏药旺拉活性成分组(n=10);20只同月龄野生型(WT)小鼠随机分为正常对照组(n=10)和藏药旺拉活性成分对照组(n=10)。正常对照组与模型组给予蒸馏水灌胃,藏药旺拉活性成分各组灌胃藏药旺拉活性成分。给药80 d后,应用Morris水迷宫实验检测各组学习记忆功能,免疫组化染色检测脑部淀粉样斑块沉积情况,免疫荧光染色和Western Blot观察脑部β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积及离子钙结合接头分子1(Iba1)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达分布并进行定量分析,ELISA检测脑内炎症因子水平。结果:与模型组比较,藏药旺拉活性成分组小鼠水迷宫潜伏时间显著减少,穿越目标象限的次数和停留时间显著增加,脑部淀粉样斑块沉积显著减少,Aβ、Iba1、GFAP表达及TNF-α、IL-6、IL-β水平显著降低(P<0.05~P<0.001)。结论:藏药旺拉活性成分能改善5×FAD小鼠的学习记忆障碍,减少Aβ过度沉积和老年斑形成,降低脑内炎症反应,改善APP/PS1转基因5×FAD小鼠脑内病理特征。

不同测试指标及观测时段对情景条件恐惧实验检测5XFAD转基因小鼠行为学效力的影响

目的·探讨选择不同的测试指标和观测时段是否影响情景条件恐惧实验对5XFAD转基因小鼠学习和记忆能力的检测效力。方法·选用雄性5XFAD转基因小鼠与雌性C57BL/6小鼠交配繁殖的4月龄雌性子代5XFAD小鼠12只为实验组,同窝Littermates小鼠(LM小鼠)14只为对照组,相继进行旷场实验及情景条件恐惧实验。分别采用旷场实验中的总路程、速度及情景条件恐惧实验训练阶段前60 s的平均运动指数,评估2组小鼠的自发活动性有无差异。继而分别选取测试阶段前180 s、181~360 s或前300 s作为观测时段,评估不同观测时段下小鼠僵直时间百分比和活动抑制率,并进一步探究选择不同观测时段对2种检测指标的差异性检出效力的影响。结果·2组小鼠在旷场实验中的总路程和速度比较,差异均无统计学意义;但其情景条件恐惧实验训练阶段前60 s的平均运动指数间比较,差异有统计学意义(P=0.027)。LM小鼠不同观测时段僵直时间百分比的差异有统计学意义(均P<0.05),而活动抑制率的差异无统计学意义;5XFAD小鼠不同观测时段僵直时间百分比和活动抑制率的差异均无统计学意义。在3个观测时段观察小鼠的运动状态时,2组小鼠僵直百分比的差异均无统计学意义;选取测试阶段的前180 s观测时,5XFAD小鼠的活动抑制率明显高于LM小鼠(P=0.038);而在其余2个观测时段中,2组小鼠活动抑制率的差异无统计学意义。结论·采用情景条件恐惧实验训练阶段的平均运动指数检测5XFAD小鼠的自发活动性较旷场实验的总路程和速度更敏感。在情景条件恐惧实验中,观测时段的不同设定可对单一品系小鼠的僵直时间百分比产生影响,而不影响活动抑制率。选用活动抑制率较僵直时间百分比更能准确反映出5XFAD小鼠的认知功能障碍,将测试阶段的前180 s作为观测时段更为准确。

圣草酚改善5×FAD小鼠认知功能并调控Nogo-A/NgR/ROCK2信号通路

背景:大量研究表明,神经生长抑制因子A(nerve growth inhibitory factor A,Nogo-A)可以通过与其下游分子结合激活Rho相关卷曲螺旋激酶(Rho-associated kinase,ROCK),从而对神经轴突的生长发挥抑制作用,与阿尔茨海默病中β-淀粉样蛋白的累积密切相关。实验室前期已经证明圣草酚能够改善5×FAD小鼠的认知功能障碍,但其对Nogo-A/NgR/ROCK2信号通路的调控尚未明确。目的:基于Nogo-A/NgR/ROCK2信号通路,探讨圣草酚对5×FAD小鼠认知功能的影响。方法:选取8月龄雄性C57BL/6小鼠分为野生组、野生给药组,8月龄雄性5×FAD小鼠分为模型组、圣草酚治疗组,每组8只,从小鼠33周龄开始,野生给药组和圣草酚治疗组每日腹腔注射圣草酚10μL/g,野生组和模型组注射同等体积的生理盐水,连续给药2个月,进行水迷宫、Y迷宫等行为学检测,检测结束后采用Western blot和免疫组织化学方法检测小鼠脑内β-淀粉样蛋白1-42,Nogo-A,NgR,p75NTR,Lingo1,ROCK2,p-ROCK2等相关靶蛋白的表达。结果与结论:①行为学检测结果显示,与野生组和野生给药组相比,模型组小鼠空间记忆能力与新事物探索能力均下降;与模型组相比,圣草酚治疗组空间记忆能力与新事物探索能力得到改善;②免疫组织化学与Western blot结果显示,与野生组和野生给药组相比,模型组β-淀粉样蛋白1-42、神经生长抑制因子Nogo-A及其神经生长抑制因子受体NgR,p75NTR,Lingo1的表达均升高;与模型组相比,圣草酚治疗组相关蛋白表达均有所下调;③与野生组和野生给药组相比,模型组Rho激酶相关蛋白ROCK2及p-ROCK2表达均升高;与模型组相比,圣草酚治疗组相关蛋白表达下调;④结果表明,圣草酚改善5×FAD小鼠的认知功能障碍与抑制Nogo-A/NgR/ROCK2信号通路相关。

白细胞介素6基因敲除对阿尔茨海默病5×FAD模型小鼠β淀粉样蛋白沉积和认知的影响

目的探讨白细胞介素6(IL-6)基因敲除对阿尔茨海默病5×FAD转基因小鼠认知及脑组织病理变化的影响。方法IL-6+/-小鼠与5×FAD小鼠杂交,构建5×FAD;IL-6^(-/-)小鼠模型,并选用3、10月龄子代小鼠进行实验。采用行为学实验对小鼠的认知记忆功能进行分析;采用HE染色和β淀粉样蛋白(Aβ)免疫组织化学染色检测小鼠脑组织病理变化。结果得到5×FAD;IL-6^(-/-)模型小鼠(3月龄n=20,10月龄n=5)及5×FAD同窝对照小鼠(3月龄n=26,10月龄n=24),子代小鼠数量符合孟德尔定律。新物体识别实验结果显示,与同月龄5×FAD小鼠相比,3月龄5×FAD;IL-6^(-/-)小鼠的探索指数显著升高,差异有统计学意义(q=3.890,P=0.002)。Morris水迷宫空间探索结果显示,与同月龄5×FAD小鼠相比,3月龄5×FAD;IL-6^(-/-)小鼠目标象限停留时间及穿台次数增加,差异有统计学意义(q=3.797,P=0.012;q=2.505,P=0.017)。免疫组织化学染色结果显示,IL-6基因敲除显著减少3、10月龄5×FAD小鼠海马(q=13.490,P=0.002;q=45.680,P<0.001)及皮层(q=16.830,P=0.001;q=14.180,P=0.001)的Aβ沉积,差异有统计学意义。结论IL-6基因敲除可明显改善阿尔茨海默病5×FAD模型小鼠的空间记忆能力,减少小鼠大脑Aβ沉积。

肌萎缩侧索硬化症转基因小鼠脊髓中自噬相关基因ATG5表达降低

目的明确自噬相关基因ATG5在肌萎缩侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)转基因鼠脊髓中的表达情况.方法取95d、108d和122d ALS转基因小鼠和野生型小鼠脊髓,应用免疫荧光、Western blot和RT-PCR技术,检测ATG5在脊髓中的表达.结果免疫荧光染色检测显示,在脊髓内,ATG5免疫反应产物主要定位于神经元;与同窝野生型小鼠比较,脊髓内ATG5免疫反应性在95d转基因小鼠无明显差异,而在108d和122d转基因小鼠明显降低.Western blot和RT-PCR分析显示,与同窝野生型小鼠比较,脊髓内ATG5 mRNA和蛋白表达水平在95d无明显变化,但在108d和122d时,转基因小鼠脊髓内ATG5 mRNA和蛋白表达均显著低于同窝野生型小鼠.结论ATG5在ALS转基因鼠脊髓中表达降低,提示ATG5表达异常与ALS发生密切相关.

用5-Fu治疗MT/p210^(bcr-abl)转基因小鼠的研究

以５－氟脲嘧啶（５－ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ，５－Ｆｕ）腹腔注射治疗了１２只携有金属硫蛋白（Ｍｅｔａｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ，ＭＴ）启动子和增强子序列、ｂｃｒ－ａｂｌｃＤＮＡ（ｐ２１０）序列及ＳＶ４０剪切和Ｐｏｌｙ（Ａ）信号序列的转基因慢粒白血病（ｃｈｒｏｎｉｃｍｙｅｌｏｉｄｌｅｕｋｅｍｉ－ａ，ＣＭＬ）ＭＴ／ｐ２１０ｂｃｒ－ａｂｌ小鼠，于治疗的第５ｄ及第１０ｄ从不同脏器提取总ＲＮＡ、ＤＮＡ及蛋白质，分别进行ＰＣＲ分析、ＲＴ－ＰＣＲ检测被转移基因的表达水平及免疫沉淀法分析ｐ２１０ｂｃｒ－ａｂｌ转基因产物的激酶活性．结果表明，被转移基因在脾脏和骨髓中表达水平较高，胸腺和肾脏中呈低水平表达．５－Ｆｕ活体治疗１０ｄ后。

肝组织特异表达人核受体nr5a2转基因小鼠的构建(英文)

人乙肝病毒增强子ⅡB1结合因子(hB1F)系FtzF1(NR5A)亚家族的新成员。经基因重组法将人hb1fcDNA置于小鼠白蛋白增强子/启动子序列下游构建成肝特异重组载体,通过原核显微注射将该载体导入小鼠受精卵原核,经注射且状态良好的卵回输至假孕母鼠输卵管。产下仔鼠经PCR和Southernblotting鉴定,同时RTPCR和Westernblotting分析转基因的表达。阳性Founder鼠与正常C57鼠交配以建立转基因纯系小鼠,F1代以PCR法鉴定。结果共获得4只PCR鉴定转基因阳性Founder鼠,其中一只同时经Southernblotting鉴定为阳性。RTPCR和Westernblotting结果显示,外源基因在转基因小鼠的肝组织成功表达。遗传学分析表明,转基因已整合入小鼠基因组并可稳定遗传。

天麻素改善5×FAD小鼠认知功能障碍的作用研究

目的天麻素是从兰科植物天麻的干燥根块中提取的一种天然酚类物质,对改善脑供血、保护神经细胞和减缓衰老进程有重要作用,目前仍无天麻素改善5×FAD小鼠认知功能障碍的作用研究。方法本研究采用2.5月龄的雄性C57和5×FAD小鼠,分为正常组、模型组、阳性药组(多奈哌齐1.3 mg·kg^(-1)·d^(-1))、天麻素低、中、高(50,100和200 mg·kg^(-1)·d^(-1))剂量组,每组12只小鼠,连续灌胃给药6.9个月。采用Y迷宫和Morris水迷宫检测小鼠的空间学习记忆能力;采用ELISA方法检测小鼠血浆和海马中Aβ_(1-40)、Aβ_(1-42)含量,以及皮层中TNF-α含量。结果Y迷宫和Morris水迷宫结果显示,5×FAD小鼠的空间学习记忆能力发生明显损害,给予天麻素可显著改善小鼠的空间学习记忆能力;9.4月龄时5×FAD小鼠血浆和海马中出现大量的Aβ_(1-40)、Aβ_(1-42)蛋白积聚,Aβ_(1-42)/Aβ_(1-40)显著升高,皮层中TNF-α含量显著升高,给予天麻素干预后,小鼠海马中Aβ_(1-42)和Aβ_(1-42)/Aβ_(1-40)显著降低,并能一定程度减少皮层中TNF-α含量。结论天麻素可改善5×FAD小鼠学习和记忆功能障碍,改善小鼠脑内Aβ沉积,其具体作用机制仍有待进一步研究。

5-脂氧化酶转基因小鼠表型初步研究

目的建立5-脂氧化酶（5-LO）高表达转基因小鼠模型，为动脉粥样硬化（AS）发病分子机制的研究提供有应用价值的动物模型。方法对5-LO转基因及正常对照小鼠分别选用RT—PCR、免疫组织化学、血脂、血压监测等方法进行分析实验。结果5-LO及大鼠5-脂氧合酶激活蛋白（FLAP）免疫组织化学实验结果显示，在肾和肺中5-LO及FLAP的表达，转基因小鼠高于正常对照组小鼠：RT—PCR实验结果显示，转基因小鼠与正常对照小鼠比较在骨髓细胞、腹腔细胞、脾脏、肾脏中白三烯介质及其受体均有不同程度的高表达。其中，两种小鼠的腹腔细胞和骨髓细胞中白三烯A4（LTA4）、白三烯B4（LTB4）和半胱酰胺-白三烯受体2（Cys—LTR2）的表达存在差异（P〈0．05），脾和肾脏中LTB4、白三烯C4（LTC4）及Cys—LTR2的表达存在差异（P〈0．05），肾脏中半胱酰胺-白三烯受体1（Cys-LTR1）的表达存在差异（P〈0．05）。C反应蛋白（CRP）、白介素-1β（IL-1β）、血小板衍生因子（PDGF）、坏死因子-κB（NF-κB）等细胞因子检测结果显示，在肾组织中转基因小鼠的各项指标显著高于正常对照小鼠（P〈0．05）；血压测定结果显示，转基因小鼠高于正常对照小鼠（P〈0．05）；血脂检测结果显示，两种小鼠未见明显差异（P〉0．05）。结论成功建立5-LO高表达转基因小鼠模型。

Wnt11及其受体Fzd5在肌萎缩脊髓侧索硬化症转基因鼠脊髓内的表达变化

目的检测Wnt11及其受体Fzd5在成年肌萎缩脊髓侧索硬化症(ALS)转基因模型鼠脊髓内的表达变化,探讨Wnt11及其受体Fzd5在ALS发病中的作用。方法选取ALS转基因鼠和同窝野生型鼠各30只,分别于鼠龄95 d、108d、122 d取材,部分鼠经4%多聚甲醛心脏灌注固定、分离脊髓、冰冻切片,应用免疫荧光技术,检测脊髓中Wnt11及其受体Fzd5的表达变化;部分鼠取出脊髓、匀浆,应用RT-PCR技术检测不同时间点Wnt11及其受体Fzd5 mRNA的表达变化。结果免疫荧光结果显示,与同窝野生型鼠比较,95 d、108 d和122 d龄ALS转基因鼠脊髓中Wnt11阳性细胞明显增多。免疫荧光双标结果显示,Wnt11标记的阳性细胞与GFAP和β-tubulinⅢ共表达,ALS转基因鼠Wnt11/GFAP双阳性细胞增多。与同窝野生型鼠比较,ALS转基因鼠Wnt11 mRNA水平在95 d、108 d和122 d均升高。Wnt11受体Fzd5表达情况与Wnt11一致。结论 Wnt11和Fzd5在ALS转基因鼠脊髓中表达增多,表明Wnt11及其受体Fzd5表达升高与肌萎缩脊髓侧索硬化症密切相关。

丙型肝炎病毒NS3-5B转基因小鼠模型的构建

目的:构建表达丙型肝炎病毒(HCV)NS3-5B蛋白的转基因小鼠模型。方法:显微注射线性化p IRES2-EGFP-NS3-5B载体到小鼠受精卵,制备并传代筛选HCV NS3-5B转基因小鼠;通过血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)检测和肝脏HE染色,对6周龄转基因小鼠进行肝功能评价。结果:PCR、RT-PCR和Western印迹结果表明HCV NS3-5B转基因小鼠构建成功;6周龄部分转基因小鼠血清ALT和AST值升高,但差别无统计学意义,肝组织形态无改变。结论:构建了HCV NS3-5B转基因小鼠模型,为进一步在体研究HCV复制复合体建立了平台。

Atg5在肌萎缩侧索硬化症转基因小鼠纹状体和脑干中表达降低

目的研究自噬相关基因Atg5在肌萎缩侧索硬化症(ALS)转基因小鼠纹状体和脑干中的表达情况,探讨Atg5与ALS发病的关系。方法分别取ALS转基因小鼠和同窝野生型小鼠95d、108d和122d的纹状体和脑干,应用免疫荧光技术检测Atg5在纹状体和脑干中的表达及与神经元的共定位关系,应用q RT-PCR技术检测Atg5 m RNA表达情况,应用Western blot技术检测蛋白表达的改变。结果免疫荧光双标染色检测发现,ALS转基因小鼠和野生型小鼠纹状体和脑干中Atg5阳性细胞与β-tubulinⅢ标记的神经元共表达;与野生型小鼠比较,ALS转基因小鼠纹状体和脑干内舌下神经核和面神经核中Atg5免疫反应性降低;q RT-PCR分析显示,ALS转基因小鼠纹状体内Atg5 m RNA表达水平在95d、108d和122d时均显著低于同窝野生型小鼠纹状体内Atg5 m RNA表达水平;脑干内Atg5 m RNA表达水平在108d和122d时均显著低于同窝野生型小鼠脑干内Atg5 m RNA表达水平;Western bot分析显示,与野生型小鼠比较,ALS转基因小鼠纹状体和脑干内Atg5蛋白表达水平在108d和122d时显著降低。结论 ALS转基因小鼠纹状体和脑干中Atg5的表达降低,提示Atg5调控的自噬改变与ALS发病关系密切。

心肌细胞特异性Snhg5过表达转基因小鼠的建立和应用

目的 建立心肌细胞特异性过表达Snhg5的转基因小鼠,用于研究Snhg5在心脏稳态维持中发挥的功能。方法 通过构建心肌细胞特异性过表达Snhg5的转基因载体,利用显微注射导入小鼠的受精卵中,经过胚胎移植获得转基因首建者小鼠。利用实时荧光定量PCR(Real-time PCR,qRT-PCR)检测子代小鼠Snhg5基因整合情况,并检测Snhg5在各个组织中的表达情况,进一步通过形态观察、组织学和分子水平的检测分析转基因小鼠的心脏表型。结果 成功构建心肌细胞特异性过表达Snhg5的转基因载体,利用受精卵显微注射技术获得Snhg5转基因首建者小鼠4只。通过对子代小鼠各组织中Snhg5的表达进行检测,发现Snhg5只在心脏组织中特异性地过表达。进一步的表型分析发现,与对照小鼠相比,转基因小鼠在异丙肾上腺素刺激下更容易发生病理性心脏重塑。结论 成功建立了心肌细胞特异性Snhg5过表达的转基因小鼠,为研究Snhg5在心脏组织中的功能及病理性心脏重塑的发生机制提供了良好的动物模型。

产生乳腺定位表达人CD14的转基因小鼠研究

将来自ＰＣＲ法合成的绵羊β－乳球蛋白基因（ＢＬＧ）５′端８９８ｂｐ上游区和人单核细胞表面分化抗原基因（ｈＣＤ１４）成熟肽１２４５ｂｐ片段构建的ＢＬＧ－ｈＣＤ１４融合基因纯化后，注入小鼠受精卵原核．实验共注射受精卵１１４９枚，经体外培养发育到２－细胞期的胚胎计９６８枚，发育率为８４．２％．从发育的胚胎中选择６３４枚移植到４６只假孕受体．其中１４只妊娠产仔，妊娠率３０．４％．妊娠受体共移植胚胎２０７枚，产仔４３只，产仔率２０．８％．经ＰＣＲ法检测８只为ＢＬＧ阳性整合，整合率２５．８％．检测泌乳的转基因阳性雌性小鼠，其中一只经过用生物素标记的鼠抗人ｈＣＤ１４单克隆抗体与琼脂糖凝胶转移片段简易杂交检测。