5α-双氢睾酮对前列腺癌LNCaP细胞钙离子移动和细胞生长的影响

目的:探讨5α-双氢睾酮(DHT)对前列腺癌LNCaP细胞钙离子移动的影响及其机制。方法:应用Fura-2/AM Ca2+荧光探针法结合MiraCal荧光成像系统动态检测DHT刺激以及Ca2+通道阻滞剂干预后LNCaP细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的变化。应用MTT法观察细胞活力,流式细胞仪观察早期细胞凋亡率。结果:DHT浓度为1、10、100和1000nmol/L时,能快速诱导[Ca2+]i升高,在20s～3min升至峰值。细胞外液无Ca2+时,1000nmol/L DHT未能诱导[Ca2+]i升高。细胞膜L-型电压门控Ca2+通道阻滞剂维拉帕米(50μmol/L)、地尔硫(100μmol/L)或硝苯地平(5mmol/L)37℃孵育细胞5min后,能完全抑制1000nmol/L DHT诱导的[Ca2+]i升高。磷脂酶C抑制剂新霉素(1mmol/L)37℃孵育细胞5min或兰尼定受体阻滞剂普鲁卡因(50mmol/L)37℃孵育细胞3min后,对1000nmol/L DHT诱导的[Ca2+]i升高没有影响。1000nmol/LDHT作用细胞48h后,与1000nmol/L DHT作用前用维拉帕米预孵细胞相比,细胞光密度(D)值[(0.67±0.10)vs(2.13±0.16))和早期细胞凋亡率[(14.31±2.29)%vs(1.07±0.19)%]差异有统计学意义(P<0.01)。结论:DHT可快速地、剂量依赖性地诱导LNCaP细胞[Ca2+]i升高;DHT诱导的LNCaP细胞[Ca2+]i的升高是通过细胞外Ca2+经细胞膜L-型电压门控Ca2+通道流入细胞内实现的,细胞内贮钙库未释放Ca2+。DHT诱导的LNCaP细胞[Ca2+]i升高促进细胞凋亡、抑制细胞生长。

5α-双氢睾酮对解聚素金属蛋白酶9表达水平的影响

目的研究5α-双氢睾酮(5α-DHT)对解聚素金属蛋白酶9(ADAM9)表达水平的影响。方法应用盐析法提取人类基因组DNA,扩增ADAM9基因启动子区目的片断,构建表达ADAM9启动子的报告基因质粒。应用脂质体转染法,分别转染入人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)、人前列腺癌细胞(LNCaP)和人宫颈癌上皮细胞(HeLa)内。5α-DHT处理各组细胞后,检测ADAM9启动子转录效率。结果我们扩增了ADAM9启动子区1676bp目的片断,构建了ADAM9启动子报告基因质粒pGL-ADAM9,将其瞬时转染入上述细胞内。5α-DHT干预细胞后,ADAM9启动子转录活性与非处理组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论上述三种细胞中,5α-DHT对ADAM9启动子表达水平无显著影响。

5α-双氢睾酮对大脑皮质组织结构和细胞凋亡的影响

采用免疫组织化学、Western blot等方法,研究了5α-双氢睾酮对大脑皮质组织结构和细胞凋亡的影响。结果显示:(1)去睾丸引起大脑皮质神经元数量下降,细胞凋亡数量增加,部分神经元线粒体、内质网肿胀,出现凋亡小体,髓鞘板层疏松、分离并脱髓鞘,雄激素受体、Bcl-2表达下降,GFAP、BAX表达增加,与正常组、假手术组和去睾丸后补充5α-双氢睾酮组比较,均呈显著性差异(P<0.05);(2)与去睾丸组比较,去睾丸后补充5α-双氢睾酮引起神经元数量增加,细胞凋亡数量减少,神经元线粒体、内质网等细胞器结构正常,雄激素受体、Bcl-2表达增加,胶质纤维酸性蛋白、BAX表达下降,且均呈显著性差异(P<0.05);(3)正常组、假手术组和去睾丸后补充5α-双氢睾酮组之间,以上各试验观察指标均无显著性差异(P>0.05)。结果表明,5α-双氢睾酮可通过与雄激素受体结合,促进Bcl-2表达,抑制胶质纤维酸性蛋白、BAX表达,维持神经元、胶质细胞正常的超微结构,阻止细胞凋亡,保持神经元数量正常,实现对大脑皮质的保护。

5α－双氢睾酮B环衍生物的合成

用改良的实验方法以３β－乙醚氧基－雄甾－５－烯－１７－酮（去氢表雄酮醋酸酯，Ⅸ）为原料，经硝化、还原、水解、卤化和氧化等反应制备了５α－双氢睾酮Ｂ环衍生物共８个。并进行了蛋白同化作用和抗辐射作用的药理实验。初步分析了结构与活性的关系．

高压氧综合治疗雄激素性秃发患者的临床疗效观察

目的探讨高压氧(HBO)综合治疗雄激素性秃发(AGA)患者的临床疗效.方法选取2014年1月至2016年12月在湘雅医院诊治的雄激素性秃发患者71例为研究对象,按照治疗方法分为HBO组(38例)和对照组(33例),对照组采用常规药物非那雄胺和米诺地尔治疗,HBO组在对照组治疗的基础上联合HBO治疗.治疗6个疗程后,比较2组患者疗效;采用脱发及新生发积分、皮肤病生活质量指数问卷(DLQI)、汉密尔顿抑郁量表(HAMD)得分评定治疗效果;并检测治疗前后血清游离睾酮(FT)、5α-双氢睾酮(5α-DHT)水平.结果治疗6个疗程后,HBO组治疗有效率(90.91%)明显高于对照组(70.53%)(P<0.05);与治疗前比较,2组患者脱发评分均明显下降,且HBO组评分明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与治疗前比较,2组患者新生发评分均明显下降,且HBO组评分明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);2组患者DLQI评分均明显提高,且HBO组评分明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01).2组患者HAMD评分均明显降低,且HBO组评分明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01);治疗6个疗程后,与治疗前比较,2组患者血清FT和DHT水平均明显降低(P<0.01),但HBO组治疗后FT和DHT水平与对照组比较无明显差异(P>0.05).结论 HBO综合治疗能进一步提高AGA患者的临床疗效,并能减少患者头发脱落,增加新发生长,改善患者抑郁情绪,提高生活质量.