5'核苷酸磷酸二酯酶同工酶Ⅴ对肝癌的诊断价值

检测９０例原发性肝癌（ＰＨＣ）和８４例良性肝病患者血清５′核苷酸磷酸二酯酶同工酶Ⅴ（５′ＮＰＤａｓｅ－Ⅴ），结果显示：ＰＨＣ组血清５′ＮＰＤａｓｅ－Ⅴ阳性率显著高于良性肝病组（Ｐ＜０．００５），５′ＮＰＤａｓｅ－Ⅴ在ＡＦＰ阴性或低浓度升高ＰＨＣ中阳性率为５９．５％。提示：①血清５′ＮＰＤａｓｅ－Ⅴ对ＰＨＣ的诊断具有重要价值。敏感性、特异性和准确性分别为７７．８％、９１．７％和８４．５％。②５′ＮＰＤａｓｅ－Ⅴ有助于ＡＦＰ阴性或低浓度升高ＰＨＣ的诊断。

5’核苷酸磷酸二酯酶同工酶V和甲胎蛋白联检对肝癌诊断意义的评价

目的评价血清5’核苷酸磷酸二酯酶同工酶Ⅴ(5’NPD-Ⅴ)和甲胎蛋白(AFP)联检对原发性肝癌(PHC)的诊断意义。方法分别采用聚丙烯酰胺电泳和放射免疫法检测90例 PHC 和84例良性肝病患者血清5’NPD-Ⅴ和 AFP 浓度(≤25ng/ml 为阴性)。结果 PHC 患者血清5’NPD-Ⅴ和 AFP 的阳性率分别为77.8%和76.7%。两者联合检测的慢性率为90%,显著高于任一单项阳性率(P<0.05),5’NPD-Ⅴ在 AFP 阴性或低浓度升高的 PHC中阳性率为59.5%。结论 5’NPD-Ⅴ有助于 AFP 阴性或低浓度升高 PHC 的诊断,两者联合检测显著提高 PHC的检出率。

顺铂致大鼠肾损害与尿5'-核苷酸磷酸二酯酶的关系

目的 :探讨尿 5 '-核苷酸磷酸二酯酶 (5 '- NPD)能否反映顺铂导致的早期肾损害。方法 :采用完全随机设计方法 ,建立顺铂致大鼠肾损害动物模型 ,通过检测顺铂致大鼠肾损害过程中尿 5 '- NPD的活性变化 ,同时用光镜和电镜观察大鼠肾脏的病理改变 ,以验证尿 5 '- NPD能否反映早期肾损害。结果 :实验中空白对照组 (IV组 )和小剂量顺铂组 ( 组 )大鼠的尿5 '- NPD活性以及肾脏病理组织学均无明显改变 ;大剂量顺铂组大鼠 ( 组和 组 )在投药后第 2天 ,尿 5 '- NPD活性开始升高 ,第 4天到达高峰 ,活性明显高于 组和 组 ,而肾脏的病理改变则出现得相对迟缓 ,投药后第 8天可见肾小管中度扩张 ,部分区域有炎性细胞浸润 ;第 15天有较多肾实质细胞坏死。结论 :尿 5 '- NPD指标对顺铂导致的肾损害反映较灵敏 。

尿5′-核苷酸磷酸二酯酶的测定方法

目的 :建立一种测定尿 5 ` -核苷酸磷酸二酯酶 (5′- NPD)的新方法 ,试图为临床诊断提供一项检测早期肾损害的生化指标。方法 :以 5′- [5 -碘吲哚酚 - (3) ]胸腺嘧啶核苷酸铵盐作为检测尿 5′-核苷酸磷酸二酯酶的底物 ,在 p H9.0缓冲体系中进行酶促反应后 ,在波长 A5 80 nm下测定尿 5′- NPD的吸光度 (OD)值。结果 :该法重复性 :cv =1.98% ;尿5′- NPD酶活力与 OD值的线性关系 :Y=4.116 X+0 .0 2 76 ,r =0 .993.用该法分别检测 30例肾病患者和 5 0例正常人的尿 5′- NPD,肾病患者的尿 5′- NPD酶活力明显高于正常人 (P <0 .0 1)。结论 :提示尿 5′-

5′核苷酸磷酸二酯酮同工酶V和甲胎蛋白联检对肝癌诊断意义的评价

为评价血清5′核苷酸磷酸二酯酶同工酶 V(5′NPD-V)和甲胎蛋白(AFP)联检对原发性肝癌(PHC)的诊断意义。本文分别采用聚丙烯酰胺电泳法和放射免疫法检测90例 PHC 和84例良性肝病患者血清5′NPD-V 和AFP 浓度(≤25ng/ml 为阴性)。结果显示 PHC 患者血清5′NPD-V 和 AFP 的阳性率分别为77.8%和76.7%,两者联合检测的阳性率为90%,显著高于任一单项阳性率(p<0.05),5′NPD-V 在 AFP 阴性或低浓度升高的 PHC 中阳性率为59.5%。从而提示5′NPD-V 有助于 AFP 阴性或低浓度升高 PHC 的诊断,两者联合检测显著提高 PHC 的检出率。

麦芽根中5′-磷酸二酯酶的制备及性质

从麦芽根中提取 5′-磷酸二酯酶 ,酶活可达 474U/ m L。将所得酶液用于水解酵母核糖核酸 ,得到 5′-CMP、UMP、GMP、AMP 4种单核苷酸。最佳反应条件为 :底物 RNA浓度为0 .0 1 g/ m L,每毫升底物的酶用量为 3 0 U,酶解温度 70°C,p H7.0 ,时间 2 h,5′-核苷酸转化率达80 %。

高活力5′-磷酸二酯酶制备及水解RNA的研究

目的:获得高活力5′-磷酸二酯酶液,提高核酸RNA酶解效率。方法:采用超滤和盐析技术对从麦芽根浸提液中纯化5′-磷酸二酯酶工艺进行研究,采用单因子试验法优化酶解工艺条件。结果:浸提液依次经过5万Da超滤膜浓缩、40%饱和度硫酸铵盐析、5万Da超滤膜脱盐后,酶活力可达1 500U/ml;第1次超滤膜透过液可作为浸提液循环使用,酶活力是水浸提的1.15倍;第2次超滤膜透过液浓缩5倍后,可回收56.46%硫酸铵,浓缩母液可按1∶2比例循环使用;在底物浓度5.8%、酶用量8%、反应时间2h条件下,RNA酶解率可达95%。结论:初步建立了适合工业化规模的核苷酸生产新工艺。

5'-磷酸二酯酶强化香菇风味基料中鲜味成分

研究了5'-磷酸二酯酶强化香菇鲜味成分的工艺条件及其作用.在香菇打浆料中添加5'-磷酸二酯酶及酵母粉,研究各因素对5'-核苷酸产量的影响.结果表明,酵母粉用量、5'-磷酸二酯酶用量、酶解体系pH值、酶解温度及时间等因素对鲜味核苷酸生成有重要影响,正交试验优化的酶解工艺条件为:酵母粉用量5%,5'-磷酸二酯酶用量5%,pH值4.0,酶解温度60℃,酶解时间60min.在此条件下制备的香菇风味基料中鲜味核苷酸(5'-IMP、5'-GMP)产量达到30.01 mg/g,较未经5'-磷酸二酯酶处理基料的鲜味核苷酸产量提高了3倍.

麦芽根提取5′-磷酸二酯酶对RNA酶解工艺研究

从麦芽根提取中的5′-磷酸二酯酶,原酶液酶活达到300U/mL。将提取的酶液用于水解酵母RNA,得到5′-AMP、UMP、CMP、GMP四种核苷酸,并系统研究了麦芽根5′-磷酸二酯酶对核酸的酶解条件。结果表明,最佳反应条件为:底物浓度3%,酶用量5%,温度68℃,pH6.5,水解时间为4～5h,在此条件下,酶解率可以达到84%。在酶解2h内补加RNA底物可提高酶利用率。

麦芽根中5′-磷酸二酯酶的分离提纯及其固定化

从麦芽根中分离得到了5′-磷酸二酯酶,采用戊二醛为交联剂,将该酶固定到壳聚糖上,用于酵母RNA的催化水解,以制备5′-核苷酸.研究了酶固定化反应的影响因素,在最适条件下,酶活回收率可达53.6%.进一步研究了固定化5′-磷酸二酯酶的酶学性质,测得固定化酶的米氏常数Km为15.38 mg/mL(以RNA为底物),固定化酶催化水解RNA的最适温度为75℃,最适pH值为5.5,实验发现固定化5′-磷酸二酯酶具有更好的耐热性和更高的纯度.

5′-磷酸二酯酶在啤酒废酵母中的应用

啤酒废酵母是啤酒生产过程中的重要副产物之一,同时啤酒废酵母中含有丰富的营养物质,蛋白质、核酸、氨基酸等物质含量高;而麦芽根又是啤酒酵母生产中的另一重要副产物,从中提取的5′-磷酸二酯酶能够有效提高酵母抽提物中5′-核苷酸的含量,对啤酒废酵母的综合利用,将会产生巨大的经济效益和社会效益。

5'-磷酸二酯酶的应用与研究进展

5'-磷酸二酯酶是一种能将单链DNA和RNA水解为5′-核苷酸的磷酸二酯酶,是酶法生产5′-核苷酸的主要工业用酶。文中对5'-磷酸二酯酶的来源、制备方法、应用及研究进展进行了综述。

香菇煮菇水5′-磷酸二酯酶酶解增鲜技术

为高效利用香菇煮菇水中的呈鲜物质,采用5′-磷酸二酯酶对香菇煮菇水进行单因素试验和正交试验酶解工艺优化,并对酶解后5′-核苷酸质量浓度和等效鲜味含量(EUC)进行评价。结果表明,5′-磷酸二酯酶酶解香菇煮菇水提高5′-核苷酸质量浓度的最佳工艺条件为酶解pH值5.0、酶解温度50℃、加酶量0.3%、酶解时间2 h,在此条件下5′-核苷酸质量浓度3.80 g/L。酶解可显著提高香菇煮菇水中5′-AMP和5′-GMP含量,EUC值从酶解前的273.71 g/L显著升高至436.27 g/L,酶解后EUC值约为酶解前的1.59倍。这一结果表明,对香菇煮菇水进行适当酶解,可以显著增强其鲜味。

反相离子对色谱法测定注射用核糖核酸酶解产物中的5′-核苷酸

目的建立反相离子对色谱法同时测定注射用核糖核酸酶解产物中4种5'-核苷酸的方法,根据核苷酸的含量计算样品中核糖核酸的含量。方法用蛇毒磷酸二酯酶将样品中的核糖核酸水解为5'-核苷酸,采用岛津VP-ODS(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相A为甲醇-水(5:95)[含20 mmol L-1KH2PO4和1%(v/v)四丁基氢氧化铵(TBAOH)溶液,pH=6.5],流动相B为甲醇-水(80:20)[含1%(v/v)TBAOH溶液,pH=6.5],梯度洗脱,检测波长为254 nm。结果建立的色谱法能将4种核苷酸良好分离,4种核苷酸在0.50～15μg mL-1线性关系良好,相关系数分别为0.999 8、0.999 9、0.999 9、0.999 9;平均回收率(n=6)均在95.1%～106.3%,RSD均<3.5%。结论该方法专属性好,具有一定的准确性,可用于检测注射用核糖核酸的含量,测定结果可为注射用核糖核酸的质量研究和评价提供依据。

双孢蘑菇中核苷酸的测定及酶解条件的研究

建立了利用高效液相色谱法(HPLC)分离测定双孢蘑菇核酸提取液中的四种核苷酸(胞苷酸、尿苷酸、鸟苷酸、腺苷酸)的方法。采用紫外检测器,波长为260nm;色谱柱为EclipseXDB-C18,柱温为25℃,流动相为:超纯水:甲醇:冰乙酸:四丁基氢氧化铵(TBAOH,10%)=894·5:100:5:0·5;流速为1·0mL/min;四种核苷酸标准曲线相关系数r均达到0·999。利用5′-磷酸二酯酶酶解双孢蘑菇中提取制得的核酸制品,为获得酶解的最适工艺条件,通过单因素实验,在底物浓度为2mg/mL的条件下,对其酶解条件:时间、温度、pH和酶底比进行了初步研究,研究结果表明酶解的最适工艺条件:时间为3h、温度为40℃、pH为5·8、酶底比为1300U/g核酸,在该条件下核酸酶解率为68·1%。

核酸酶P1研究进展

核酸酶P1是由桔青霉产生的一种能将单链DNA和RNA水解为 5′ 核苷酸的磷酸二酯酶 ,也是酶法生产 5′ 核苷酸的主要工业用酶 ,其水解产物 5′ 核苷酸广泛用于食品、医药、以及分子生物学等方面。文章概述了核酸酶P1的分子结构、催化特性、影响因素。

核苷酸综合利用及制备研究进展

核苷酸主要生产方法有化学合成法、微生物发酵法及酶解法。酶解法应用到从啤酒废酵母中提取核苷酸有很大开发前景,缺点是核苷酸混合物中分离出单一产品,分离难度大。对核苷酸综合利用及生产现状进行了综述。

酵母抽提物中呈味核苷酸含量偏低的原因探讨(Ⅱ) 啤酒酵母自溶过程核酸的降解规律研究

本论文通过详细测定酵母自溶过程中蛋白质、核酸以及各种核苷酸在产物中的变化量,研究pH、外加5’-磷酸二酯酶(麦芽根核酸酶)、外加蛋白酶等对酵母自溶的影响,从而探讨外加5’-磷酸二酯酶不能显著提高酵母自溶产物中呈味核苷酸含量的原因。研究结果显示:在自溶过程直接添加麦芽根核酸酶只能略提高酵母抽提物中呈味核苷酸的含量,但提高程度不明显;在pH8自溶的产物中5’-核苷酸和3’-核苷酸的量均显著低于在pH5自溶的产物中的量。酵母在pH8～8.5条件下自溶时,外加蛋白酶可以显著提高酵母自溶物产物中可溶性固形物含量、可溶性蛋白质和核苷酸的含量,显著降低核酸含量,产物中的5'-核苷酸含量显著比3'-核苷酸含量高。上述结果说明了酵母在外加麦芽根核酸酶条件下自溶时,核酸未能迅速降解并生成大量的呈味核苷酸的原因之一是由于酵母细胞壁的存在阻碍了细胞器中核酸的溶出,致使外加的5'-磷酸二酯酶不能很好与核酸底物接触,从而不能有效提高呈味核苷酸的产量。

环腺苷酸结合蛋白在心脏功能及相关心脏疾病中的作用研究进展

3,5-环磷酸腺苷（cAMP）是心血管系统中细胞对于外界刺激反应的关键信号分子。它控制很多生物效应,如细胞增殖、变异和凋亡等。cAMP是ATP通过跨膜腺苷酸环化酶激活的G蛋白偶联受体^（[1]）。细胞内cAMP不仅由腺苷酸环化酶产生,而且由cAMP的磷酸二酯酶调控其降解,催化cAMP水解成5-AMP。