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常规PCR法扩增口蹄疫病毒基因组5’端序列的探索
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作者 朱研 苗书魁 +6 位作者 马文戈 李金娜 魏玉荣 汪萍 魏婕 米晓云 黄炯 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期572-580,共9页
【目的】扩增口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)基因组5’端序列,为获得基因组全长准备基础。【方法】将FMDV O/Akesu/58 CE39A株液氮冻存基因组RNA反转录三次,对c DNA的5’端序列进行扩增、克隆、测序。【结果】以c DNA1... 【目的】扩增口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)基因组5’端序列,为获得基因组全长准备基础。【方法】将FMDV O/Akesu/58 CE39A株液氮冻存基因组RNA反转录三次,对c DNA的5’端序列进行扩增、克隆、测序。【结果】以c DNA1与c DNA3为模板,用LA Taq DNA polymerase、EX Taq DNA polymerase、Prime STARHS DNA polymerase及3对引物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ均未扩增出5’端目的片段;以c DNA2为模板,用LA Taq DNA polymerase为扩增酶,两对引物Ⅰ、Ⅱ均能扩增出5’端目的片段,且所测得的序列长度787 bp、797 bp与参考序列核苷酸同源性分别为86.2%和86.3%。【结论】常规PCR法扩增5’端序列较其它技术具有价格便宜、操作简便等优点,但扩增成功率偏低。试验共进行了72次PCR,成功率为6/72,说明FMDV 5’端序列的扩增难度大,应合理设计反转录引物和扩增引物。为许多RNA病毒反向遗传学研究提供了更多的选择。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 常规PCR 5’端序列 基因扩增
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鹅催乳素受体基因cDNA5′端序列克隆 被引量:6
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作者 傅泽红 邢光东 +1 位作者 刘铁铮 孔鸽萍 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2007年第3期213-217,共5页
为寻找鹅就巢性相关基因,从洪泽湖性成熟公鹅睾丸组织分离并合成鹅cDNA第一链;利用RACE克隆了鹅催乳素受体基因(gPRLR)5′端序列。所克隆的499 bp 5′端序列可划分为348 bp的5′-UTR、151 bp的以ATG作为起始密码子的阅读开放框。与鸡催... 为寻找鹅就巢性相关基因,从洪泽湖性成熟公鹅睾丸组织分离并合成鹅cDNA第一链;利用RACE克隆了鹅催乳素受体基因(gPRLR)5′端序列。所克隆的499 bp 5′端序列可划分为348 bp的5′-UTR、151 bp的以ATG作为起始密码子的阅读开放框。与鸡催乳素受体基因(cPRLR)cDNA序列作比对,此499 bp序列可划分为238 bp的第1外显子、69 bp的第2外显子、114 bp的第3外显子及81 bp的部分第4外显子,起始密码子位于第3外显子45 bp处。阅读开放框核苷酸序列与cPRLR cDNA同源部位的阅读开放框同源性达到88%,推导的氨基酸序列同源性达到84%。 展开更多
关键词 鹅催乳素受体 5’端序列 克隆
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鸡卵清蛋白基因5’ 端调控区序列表达载体的构建
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作者 贺聪 龚浪 +1 位作者 谢青梅 陈峰 《科技传播》 2014年第9期143-144,共2页
本研究从鸡输卵管组织中扩增并克隆了约1400bp的鸡卵清蛋白基因5’端调控序列。经测序结果和序列分析表明其具有调控外源基因在输卵管内表达的能力,并构建了鸡卵清蛋白基因5’端调控序列调控外源基因表达载体PVAX1-OVP。
关键词 鸡卵清蛋白基因 5’调控序列 克隆 表达载体
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胆汁酸衍生物INT-767激活FXR及TGR5降低小鼠动脉粥样硬化风险 被引量:5
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作者 张秉全 禹晶 +2 位作者 梁波 林佰艳 鲍红光 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第16期4488-4491,4491,共4页
目的探讨胆汁酸衍生物INT-767激活FXR及TGR5及其对小鼠动脉粥样硬化风险的影响。方法选取8周龄载脂蛋白(Apo)E-/-和低密度脂蛋白(LDL)R-/-的C57BL/6J小鼠分别用含INT-767(30 mg/kg)高纯度饲料(D12079B)喂养12 w和16 w,收集样本后进行组... 目的探讨胆汁酸衍生物INT-767激活FXR及TGR5及其对小鼠动脉粥样硬化风险的影响。方法选取8周龄载脂蛋白(Apo)E-/-和低密度脂蛋白(LDL)R-/-的C57BL/6J小鼠分别用含INT-767(30 mg/kg)高纯度饲料(D12079B)喂养12 w和16 w,收集样本后进行组织生化分析(主动脉窦组织生化分析),对CD68和MCP1进行免疫荧光检测,血清样本进行快速蛋白液相色谱分析;血清胆汁酸水平通过q TRAP LC-MS/MS法检测。血清炎性细胞因子水平通过酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒检测。采用电泳迁移率实验(EMSA)测定核转录因子(NF)-κB与DNA的结合活性。结果 INT-767可降低Apo E-/-和LDLR-/-小鼠血清胆固醇和甘油三酯水平,抑制肝CYPB1表达下调血清胆酸和去氧胆酸水平,从而抑制LDLR-/-和APOE-/-小鼠动脉粥样硬化斑块形成、降低Apo E-/-小鼠巨噬细胞浸润和炎症水平;INT-767主要是通过激活TGR5降低巨噬细胞细胞因子表达水平。结论胆汁酸的类似物INT-767可通过双激活TGR5和FXR调控靶基因,降低和减缓动脉粥样硬化的风险。 展开更多
关键词 胆汁酸衍生物 INT-767 法尼醇X受体 TβR5’编码序列 动脉粥样硬化 风险分析
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Cloning and Analysis of 5’ Flanking Region of Sporamin A Gene from Sweet Potato 被引量:2
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作者 王登瞻 季勤 +1 位作者 李荣鹏 陈敏 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2008年第2期54-57,共4页
[ Objective] The aim of the study is to clone the 5' flanking region of Sporamin A gene from sweet potato. [ Method ] The sweet potato "Xushu 18" was used to amplify the 5' flanking region of Sporamin A gene using... [ Objective] The aim of the study is to clone the 5' flanking region of Sporamin A gene from sweet potato. [ Method ] The sweet potato "Xushu 18" was used to amplify the 5' flanking region of Sporamin A gene using specifically designed primers and then target fragment was analyzed by PLACE and PlantCare online. [ Result ] Besides the conserved elements including TATA-box and CAAT-box, the cis-acting elements including sucrose responsive element CMSRE1, SP8 acting site and some other regulatory sequence such as MYB binding site were also found in Spo A promoter sequence. The results suggest that the promoter has sucrose responsive function. [ Conclusion ] The study provided reference to reveal the regulation law of Spo A, and to develop high-level expression vectors promoted by Spo A promoter. 展开更多
关键词 Sproramin A gene Sweet potato
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Characterization of 5'-proximal sequence of mouse GABAtransporter gene(GAT-1)
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作者 FEI JIAN FANG HUANG +1 位作者 YIN HUA MA LI HE GUO(Shanghai Institute of Cell Biology, Chinese Academy of Sciences, Shanghai 200031) 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 1997年第1期61-67,共7页
The cDNA molecule encoding the mouse GABA transporter gene (GAT-1) was used as probe for selecting GAT-1 gene from mouse genomic library. A positive clone, harboring the whole open reading frame of the GAT-1 protein a... The cDNA molecule encoding the mouse GABA transporter gene (GAT-1) was used as probe for selecting GAT-1 gene from mouse genomic library. A positive clone, harboring the whole open reading frame of the GAT-1 protein and designated as MGABAT-G, was fished out from the library, the 5’ proximal region and nitron 1 were sequenced and analysed, and low homology was found in the above region between GAT-1 genes from mouse and human except some short conserved sequences. The DNA-protein interactions between DNA fragments containing the conserved sequences in the 5’ proximal region and nuclear proteins from different tissues of mouse were studied by means of gel-shift assay, and Southern-Western blot. The results indicate a possible positive-negative regulation mode controlling the expression of the mouse GAT-1 gene. 展开更多
关键词 Mouse GABA transporter gene expression regulation CLONING
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‘红肉蜜柚’CmMYB330基因的分离与表达分析 被引量:6
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作者 杨华丽 蔡韡韡 +4 位作者 吕恃衡 徐世荣 余磊 潘腾飞 潘东明 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期268-278,共11页
【目的】分析‘红肉蜜柚’果实汁胞粒化相关的MYB转录因子基因特征与表达模式,探讨MYB转录因子在蜜柚汁胞木质素代谢过程中的作用机制,为研究蜜柚汁胞粒化发生机制提供借鉴。【方法】以‘红肉蜜柚’果实汁胞为试材,参考甜橙MYB全基因组... 【目的】分析‘红肉蜜柚’果实汁胞粒化相关的MYB转录因子基因特征与表达模式,探讨MYB转录因子在蜜柚汁胞木质素代谢过程中的作用机制,为研究蜜柚汁胞粒化发生机制提供借鉴。【方法】以‘红肉蜜柚’果实汁胞为试材,参考甜橙MYB全基因组分析,利用生物信息学分析和PCR技术克隆Cm MYB330的编码区序列及其5’端调控序列,并对序列进行生物信息学分析。利用实时荧光定量PCR技术对Cm MYB330在‘红肉蜜柚’果实汁胞不同发育时期和不同部位的表达情况进行分析。利用农杆菌介导法将Cm MYB330与GFP的融合表达载体注射转化到烟草叶片中进行亚细胞定位分析。利用酵母双杂交系统对Cm MYB330进行转录激活活性分析。【结果】Cm MYB330的编码区序列长度为942 bp,编码313个氨基酸,预测为核定位蛋白,为典型的R2R3 MYB转录因子。Cm MYB330与甜橙Cs1g19400.1、Am MYB330等亲缘关系近,都属于R2R3 MYB第4亚组。Cm MYB330的5’端调控序列为起始密码子上游-1 748 bp序列,预测该序列含有TATA-box、CAAT-box 2个启动子核心元件,3个MBS,1个AC-I,1个5UTR Py-rich stretch,还有大量激素(如赤霉素、乙烯、水杨酸等)响应元件。Cm MYB330表达量在‘红肉蜜柚’果实汁胞发育过程中有起伏,但总体呈现上升趋势,表达量在花后208 d达到最大,之后开始下降。在转化p-super1300-Cm MYB330-GFP的烟草叶片细胞核中检测到绿色荧光信号,与预测结果一致,说明Cm MYB330定位在细胞核中。在Y2H Gold酵母中,Cm MYB330表现为没有转录激活活性。【结论】克隆了‘红肉蜜柚’MYB转录因子Cm MYB330编码区序列及其5’端调控序列,Cm MYB330属于R2R3 MYB第4亚组,与汁胞粒化相关,为核定位蛋白,同时分析了其在‘红肉蜜柚’果实汁胞发育过程中的表达水平,总体呈上升趋势。为进一步研究Cm MYB330与蜜柚汁胞粒化的关系奠定了基础。 展开更多
关键词 '红肉蜜柚’ 转录因子 CmMYB330 5’调控序列 表达分析
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