拟南芥CBF4基因启动子缺失载体的构建及转化

利用PCR方法,从拟南芥基因组中克隆脱水响应因子CBF4基因启动子全序列4A(1 260 bp)及两段不同长度5′缺失片段4B(565 bp)和4C(470 bp),通过亚克隆构建含有该系列启动子的可溶性绿色荧光蛋白基因(smGFP)的植物表达载体p1301-4A-GFP、p1301-4B-GFP、p1301-4C-GFP,用农杆菌介导烟草叶盘法分别导入烟草。20%PEG6000模拟干旱诱导转基因植株,检测转基因烟草转入不同启动子片段烟草植株诱导前后叶片GFP的表达强度。在倒置荧光显微镜和384 nm紫外灯照射下检测到的全片段4A与5′缺失片段4B和4C转化植株均显荧光,且随启动子长度的变短,荧光强度逐渐增强。基本确定了启动子的核心区域为4C(470 bp)。