烟曲霉5’-磷酸二酯酶的分离纯化和酶学性质的研究

研究了烟曲霉5’-磷酸二酯酶的纯化及性质。烟曲霉固体发酵提取的胞外核酸酶的粗酶液经0-22μm微滤膜过滤、截留分子量为10ku和4ku的膜超滤、硫酸铵沉淀、DEAE-纤维素离子交换层析~DEAE—SepharoseCL-6B层析等方法分离。结果表明，5’-磷酸二酯酶酶液的比活力为1036．76U／mg、纯化倍数为82倍，纯化回收率为7．82％。纯化的酶经sDs-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测显示为单一条带，该酶经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和SephadexG-100凝胶层析测定，其相对分子质量约为9．5ku，由单一亚基组成。酶学性质研究结果表明，该酶反应最适pH为5．0，在pH5．0—9．0之间酶活稳定；最适反应温度为60qC，在低于55。c下酶活较为稳定；该酶的k为13．60mg／mL，v。为0．71mmol／（mg·min）；Fe2＋、Fe2＋和Zn2＋对该酶有抑制作用，而D对该酶有轻微的促进作用。

超滤膜纯化麦芽根中5’-磷酸二酯酶的工艺研究

主要探讨小型工业化水平的超滤膜技术纯化麦芽根中5′-磷酸二酯酶的工艺,通过比较确认,选取截留分子量为13ku的超滤膜浓缩纯化原料液,经优化后其工作参数为:膜运行温度30℃、膜前压0.8MPa、膜表面流量20LPM,此时所得浓缩液中酶比活力为3018.9U/mg,较纯化前提升了21.2倍,酶活力回收率达到了80.8%。证明选用膜技术纯化5′-磷酸二酯酶是完全可行的。

两种3′,5′-环核苷酸磷酸二酯酶的制备及活性测定

3′,5′-环核苷酸磷酸二酯酶[EC.1.4.17](简称PDE),在生物体内有重要的生化功能.它可水解环核苷酸为5'-核苷酸,并与核苷酸环化酶共同维持细胞内环核苷酸水平.根据性质的不同PDE分为多种形式,但总的可分为两大类:依赖于Ca2+的PDE,可被钙调蛋白激活;不依赖于Ca2+的PDE,不被钙调蛋白激活.开展对环核苷酸、钙调蛋白及药物杀虫机理的研究都需要分离制备这两类不同形式的PDE.本实验以新鲜的猪心为材料制备分离出这两种PDE,并进行了活性分析.

5′-磷酸二酯酶的应用与进展

5′-磷酸二酯酶是一种能将单链DNA和RNA水解为5′-核苷酸的磷酸二酯酶,也是酶法生产5′-核苷酸的主要工业用酶。文章对5′-磷酸二酯酶的来源、制备方法、应用及研究进展进行了综述。

外源性3′,5′,环腺苷酸对人胃腺癌细胞系的影响

本实验通过外源性3′,5′环腺苷酸(cAMP)对人胃腺癌SGC-7901细胞系的连续作用,观察到癌细胞的增殖受到明显抑制的同时,膜表面环腺苷酸-磷酸二酶(cAMP-PDEase)的活性及Mg^(++)-ATPase活性均明显下降,而细胞内cAMP免疫荧光强度则明显增强,进一步证实了细胞内cAMP水平与细胞的生长、分化,及膜表面ATPase、cAMP-PDEase的活性有密切的关系。

西地那非在肺动脉高压中的应用

西地那非是5′磷酸二酯酶的选择性抑制剂,通过抑制5′磷酸二酯酶,进而增加了环磷鸟苷的浓度,而达到扩张肺血管的作用。西地那非能降低肺动脉高压。

酵母抽提物中呈味核苷酸含量偏低的原因探讨(Ⅱ) 啤酒酵母自溶过程核酸的降解规律研究

本论文通过详细测定酵母自溶过程中蛋白质、核酸以及各种核苷酸在产物中的变化量,研究pH、外加5’-磷酸二酯酶(麦芽根核酸酶)、外加蛋白酶等对酵母自溶的影响,从而探讨外加5’-磷酸二酯酶不能显著提高酵母自溶产物中呈味核苷酸含量的原因。研究结果显示:在自溶过程直接添加麦芽根核酸酶只能略提高酵母抽提物中呈味核苷酸的含量,但提高程度不明显;在pH8自溶的产物中5’-核苷酸和3’-核苷酸的量均显著低于在pH5自溶的产物中的量。酵母在pH8～8.5条件下自溶时,外加蛋白酶可以显著提高酵母自溶物产物中可溶性固形物含量、可溶性蛋白质和核苷酸的含量,显著降低核酸含量,产物中的5'-核苷酸含量显著比3'-核苷酸含量高。上述结果说明了酵母在外加麦芽根核酸酶条件下自溶时,核酸未能迅速降解并生成大量的呈味核苷酸的原因之一是由于酵母细胞壁的存在阻碍了细胞器中核酸的溶出,致使外加的5'-磷酸二酯酶不能很好与核酸底物接触,从而不能有效提高呈味核苷酸的产量。

cAMP信号通路对根尖乳头干细胞增殖的影响

目的探讨c AMP信号通路对根尖乳头干细胞(SCAP)增殖、迁移的影响。方法酶消化法培养细胞;矿化诱导液和成脂诱导液诱导细胞后,茜素红和油红O染色鉴定细胞多分化潜能;分别用不同浓度的c AMP信号通路激活剂Forskolin和抑制剂H-89处理细胞;MTT和划痕实验检测各组细胞的增殖能力及迁移能力。结果矿化和成脂诱导液分别诱导SCAP后,茜素红和油红O染色显示有钙盐沉积及脂滴形成。低浓度的Forskolin(2.5μmol·L^(-1))促进细胞增殖,高浓度的Forskolin(10μmol·L^(-1),20μmol·L^(-1))则发挥相反作用。用低浓度H-89(5μmol·L^(-1),10μmol·L^(-1))抑制c AMP信号后,SCAP的增殖能力增加,而高浓度H-89(20μmol·L^(-1))在MTT第3天时促进细胞增殖,第5天和第7天时抑制该细胞增殖。迁移结果显示高浓度Forskolin(10μmol·L^(-1),20μmol·L^(-1))抑制SCAP的迁移,而H-89(5μmol·L^(-1),10μmol·L^(-1))促进该细胞的迁移。结论 c AMP信号通路对根尖乳头干细胞增殖、迁移有一定的调节作用。

香菇柄提取液鲜味成分的酶解增效工艺研究

为了进一步增强鲜味,采用5’-磷酸二酯酶和中性蛋白酶双酶酶解香菇柄提取液。通过单因素实验和正交实验优化5’-磷酸二酯酶酶解的最佳工艺条件,并在此基础上与中性蛋白酶联合,通过正交实验优化双酶酶解香菇柄提取液最佳工艺条件。结果表明,5’-磷酸二酯酶酶解的最佳工艺条件为加酶量0.3%、酶解pH5.0、酶解时间2 h、酶解温度60℃,在此条件下5’-核苷酸含量为0.41 mg/mL。复合酶法最佳工艺条件为5’-磷酸二酯酶加酶量0.3%、中性蛋白酶加酶量0.8%,酶解pH6.5、酶解温度50℃、酶解时间2 h,在此条件下测得5’-核苷酸含量为0.42 mg/mL,氨基态氮含量为0.45 mg/mL。通过以上结果,在不显著降低呈现滋味成分含量的情况下,复合酶解可比单酶分步酶解(5'-磷酸二酯酶2 h、中性蛋白酶3 h)节约一半时间以上。