延边地区牛病毒性腹泻病毒YBHC株的分离鉴定与遗传进化分析

延边朝鲜族自治州地理位置特殊,边境畜产品贸易往来日见频繁,为了解延边地区牛病毒性腹泻病毒(BVDV)流行株情况,本研究采集延边州规模化养牛场疑似感染BVDV牛的粪便样品,经常规处理后接种MDBK细胞,盲传5代后观察细胞病变并经PCR鉴定,结果显示未出现BVDV典型的空泡病变,PCR扩增得到约300 bp与预期相符的目的条带,结合患牛临床症状初步判定为非细胞病变型(NCP型)BVDV。对5’UTR基因序列(OM622422)的扩增产物测序并进行遗传进化分析,结果显示分离株为BVDV-1b亚型,为NCP型,命名为YBHC株BVDV-1b。对鉴定为BVDV阳性的细胞培养并传至7代,收集细胞经磷钨酸负染后电镜观察,可见典型BVDV病毒粒子,大小为40 nm~60 nm。本研究首次对延边地区进行BVDV流行株的分离与鉴定,并得到病毒粒子,为BVD疫情防控和疫苗研制提供了物质基础和参考依据。

猪源牛病毒性腹泻病毒的分离与鉴定

为了对临床疑似牛病毒性腹泻病毒(BVDV)感染病料进行确诊,并掌握致病原的生物学和遗传变异特征,试验通过临床样品PCR检测、病毒分离培养与细胞病变特征观察、理化特性试验、5′UTR基因序列分析等方法对临床病料进行了BVDV的分离和鉴定。结果表明:临床病料BVDV特异性引物PCR扩增为阳性,可引起单层MDBK细胞产生细胞病变,分离毒株的TCID_(50)高达1×10^(-5.23)/0.1 mL,其对氯仿、乙醚、胰酶、酸、热均敏感,在基于5′UTR基因的遗传进化树中其位于BVDV-1型的分支中,归属于BVDV-1a型,与登录号为JN400273.1的猪源BVDV-1a型毒株的亲缘关系最近,同源性达100%。说明试验获得了1株猪源BVDV分离毒株,属于BVDV-1a型,并掌握了该毒株的生物学特性和遗传特征。