黑曲霉T21 glaA 5’上游调控区的两个蛋白结合因子及其靶序列

采用凝胶阻滞法从糖化酶高产株黑曲霉(Aspergillus niger)T21部分纯化的蛋白提取液中检测到与糖化酶基因(glaA)5＇cis调控区特异结合的两个蛋白因子,其一的靶DNA定位在glaA翻译起始点(ATG)上游-580～-509及-318～-254bp两个区域,另一蛋白因子的靶DNA定位在-809～-580区域.-580～-509序列含有“TATA”的重复结构,-318～-254序列富含“GC”以及-809～-580序列含有CCAAT的特点暗示此3片段及其所结合的蛋白因子在A.niger T21 glaA的表达调控中可能有重要作用.

黑曲霉T21 glaA 5'上游调控区DNA与蛋白因子的相互作用分析

以糖化酶生产菌株黑曲霉T21（Aspergillus niger T21）的糖化酶基因（glaa）5＇cis调控区片段为探针,采用电泳迁移率变动分析（EMSA）法,从黑曲霉蛋白粗提液中检测到与glaA 5＇调控区特异结合的蛋白因子,并把其结合DNA定位在T21 glaA 5＇调控区的-374～-344,-484～-414以及-580～-540 bp 3个区段,且此3个结合DNA的片段在EMSA实验中呈现交叉竞争,表明这3个DNA区段可与同一个蛋白因子相结合.以-374～344 bp序列为探针的紫外交联实验表明,该蛋白因子的分子量（或亚基分子量）约为10ku.利用DNase I足印分析确定了此蛋白因子在前两个区段的精细结合部位,并对其结合序列的特性进行了分析.