马鹿生长激素基因的克隆与5′侧翼序列分析

根据报道的哺乳动物GH基因序列设计引物 ,首次利用PCR方法扩增和克隆了马鹿GH基因 ,该基因大小约为 1.8kb .对该基因上游 34 0bp核苷酸测序及分析表明 ,测序区域包括 5′侧翼序列 ,第一外显子和部分第一内含子 .第一外显子所编码的所有氨基酸与猪的相比完全相同 .初步认为GH基因在马鹿基因组中为单基因 .

三角叶滨藜甜菜碱醛脱氢酶基因5′侧翼序列的克隆与分析

根据三角叶滨藜甜菜碱醛脱氢酶基因(BADH)5′端序列设计特异引物,采用反向PCR技术从三角叶滨藜总DNA中扩增并克隆了该基因的5′侧翼区约855bp的片段。距起始密码子ATG77bp处的T碱基为可能的转录起始位点。在-25～-30bp、-260～-265bp、-337～-342bp以及-715～-720bp含有推测的TATA box(TATAAA),在-389～-393bp和-720～-724bp含有推测的CAAT box(CCAAT),以及在-112～-116bp和-397～-401bp含有推测的ABA作用元件CACGT。仅其-178～-1bp区与中亚滨藜BADH基因启动子区高度同源,同源性为90%。该BADH基因5′侧翼区与其它植物BADH基因的启动子区无同源性。

团头鲂促性腺激素GtHⅡβ亚基基因5′端启动子区克隆及表达载体构建

利用改进的锚定PCR方法克隆了团头鲂(Megalobrama amblycephala)促性腺激素Ⅱβ(GtHⅡβ)亚基基因5′端侧翼序列,并在生物信息学方法分析的基础上构建了荧光素酶质粒表达载体。序列分析结果显示:克隆得到的GtHⅡβ亚基基因5′端侧翼序列长度为1354bp,其中包括TATA盒、ERE、ARE、PRE、GRE、LHX3、SF-1、Sp1、Pit-1、NF-Y和AP1等可能对GtHⅡβ亚基基因转录调控起重要作用的功能转录因子结合位点;转录起始位点位于-40～10bp。进一步利用PCR方法扩增得到了811bp(-771～+40bp)、601bp(-561～+40bp)、386bp(-346～+40bp)、239bp(-199～+40bp)和98bp(-58～+40bp)的5个缺失片段,并同全长片段一起分别连接至pGL3-Basic报告基因载体,成功构建了团头鲂GtHⅡβ亚基基因5′端侧翼序列的表达载体,为进一步研究、分析其转录调控机制提供了基础依据。

小麦低分子量谷蛋白亚基基因5′侧翼保守序列染色体组特异性DNA变异的分析及验证

根据33个低分子量麦谷蛋白亚基(LMW-GS)基因5′侧翼序列的相似性进行聚类分析,可将其划分成8个类群,这与基于N末端推导氨基酸序列进行的类群划分结果完全一致.序列比对发现,各类群基因5′侧翼保守序列间存在DNA多态性,共发现34个多态性位点,其中18个为潜在单核苷酸多态性位点(SNPs,singlenucleotidepolymorphisms).除1个LMW-GS类群之外,其余7个类群的5′侧翼序列均具有类群特异性DNA变异位点.根据类群间的DNA多态性对这7个类群设计了特异引物,利用普通小麦(TriticumaestivumL.)品种中国春及其第1同源群双端体系对其进行染色体定位分析,揭示了1AS,1BS和1DS上分别有第2,1和4类群.对PCR产物的克隆测序进一步验证了不同染色体组上的LMW-GS基因类群间5′侧翼序列具有特异性.这些结果表明,LMW-GS基因的编码区及其5′侧翼保守序列可能是协调进化的.本文报道的7对引物可对7类LMW-GS基因的完整编码区进行特异扩增,因而能在小麦复杂的遗传背景下有目的地对某一类LMW-GS基因进行分离克隆,这有助于弄清单个LMW-GS对小麦品质的贡献.同时,在小麦育种中,这些标记对于有效地选择与品质密切相关的LMW-GS组分有一定应用价值.

草鱼MyD88基因组结构解析及启动子活性探讨

草鱼(Ctenopharyngodon idella)是我国重要的淡水经济鱼类,病毒和细菌性疾病对其造成了重大损失[1]。草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)引起的草鱼出血病,是对草鱼危害最大的传染性疾病之一。GCRV是双链RNA病毒,属呼肠孤病毒科(Reoviridae),水生呼肠孤病毒属(Aquareovirus),G亚型[2]。高密度集约化养殖更增长了疾病暴发的频率,严重地影响了草鱼养殖的经济效益。