香菇乳清酸核苷-5’-单磷酸脱羧酶编码基因le-pyrG的克隆

通过巢式简并PCR和基因组步行技术从香菇(Lentinula edodes)单核体中克隆到乳清酸核苷-5′-单磷酸脱羧酶(orotidine-5’-monophosphate decarboxylase,OMPDC)的编码基因le-pyrG,长度为946bp。经生物信息学分析,香菇le-pyrG基因含有2个长度分别为67bp和51bp的内含子,该基因可以编码1个含有275个氨基酸残基的蛋白质序列,该序列经比对分析显示与裂褶菌(Schizophyllum commne)和灰盖鬼伞(Coprinus cinereus)OMPDC序列的相同性分别为73%和70%,相似性分别为84%和83%。这是首次报道从栽培食用真菌中克隆出乳清酸核苷-5′-单磷酸脱羧酶编码基因的全序列。

过量尿嘧啶胁迫下pyrG对维持构巢曲霉胞内尿嘧啶稳定及正常产孢起关键作用

为减少DNA中尿嘧啶的掺入,细胞内尿嘧啶水平受到严格控制,但其机制尚不清楚.构巢曲霉(Aspergillus nidulans)乳清酸核苷5′-磷酸脱羧酶PyrG催化乳清苷酸(OMP)转化为尿苷酸(UMP)的反应,本研究发现,在过量尿嘧啶存在的情况下,PyrG对维持细胞内较低尿嘧啶浓度具有重要作用.与野生菌株相比,过量尿嘧啶及其代谢物对乳清苷酸脱羧酶缺陷的pyrG89突变体具有更强的抑制作用,并能增强pyrG89突变体的有性发育.通过数字基因表达谱(DGE)分析pyrG89突变体和野生菌株对过量尿嘧啶的转录响应,发现尿嘧啶转录激活pyrG89突变体中有性发育相关的基因.HPLC定量分析显示,在过量尿嘧啶存在的情况下,pyrG89突变体胞内尿嘧啶水平是野生菌株的6.5倍.本研究的结果不仅为细胞内尿嘧啶循环及细胞对过量尿嘧啶的适应机制提供了新内容,还揭示了OMP脱羧酶对真菌生长发育存在潜在影响.