miR-525-5p、围脂滴蛋白3的表达与胶质瘤预后的关系研究

目的 探讨微核糖核酸-525-5p(mi R-525-5p)、围脂滴蛋白3(PLIN3)的表达与胶质瘤预后的关系。方法选取2018年2月至2020年7月青岛市市立医院收治的102例胶质瘤患者,收集术中部分瘤组织和瘤旁组织采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测mi R-525-5p、PLIN3 m RNA表达,免疫组织化学染色法检测PLIN3表达。通过Target Scan数据库预测mi R-525-5p与PLIN3的结合位点,分析二者在胶质瘤组织中表达的相关性。根据胶质瘤组织中PLIN3 m RNA表达均值分为高表达组和低表达组,采用Kaplan-Meier法绘制高/低PLIN3 m RNA表达胶质瘤患者生存曲线,多因素Cox回归分析胶质瘤患者预后影响因素。结果 与瘤旁组织比较,胶质瘤组织中mi R-525-5p表达降低,PLIN3 m RNA表达升高(P<0.05)。与瘤旁组织比较,胶质瘤组织中PLIN3阳性率升高(P<0.05)。mi R-525-5p与PLIN3存在结合位点。mi R-525-5p与PLIN3 m RNA表达在胶质瘤组织中呈负相关(P<0.05)。PLIN3 m RNA高表达组3年总生存率低于低表达组(P<0.05)。多因素Cox回归分析显示,低分化、世界卫生组织中枢神经系统肿瘤分级Ⅲ~Ⅳ级、PLIN3 m RNA≥1.86为胶质瘤患者死亡的独立危险因素(HR>1,P<0.05)。结论 胶质瘤组织中mi R-525-5p低表达和PLIN3 m RNA高表达,二者表达呈负相关,PLIN3 m RNA高表达与胶质瘤患者预后不良有关。

miR-211-5p和miR-202-3p在抑郁症患者中的表达及其与患者病情程度和认知功能的关系

目的探究微小核糖核酸-211-5p(miR-211-5p)和微小核糖核酸-202-3p(miR-202-3p)在抑郁症患者中的表达及其与患者病情程度和认知功能的关系。方法选取2021年1月至2023年6月郑州大学第一附属医院精神科收治的92例确诊为抑郁症的患者为抑郁症组,同期选取本院体检健康(精神状态正常)的志愿者92例为对照组。根据抑郁自评量表(SDS)分为轻度抑郁组(SDS:53~62分)45例、中度抑郁组(SDS:63~72分)30例、重度抑郁组(SDS:73分及以上)17例。根据简易智力状态检查量表(MMSE)评分分为轻度认知功能障碍组(MMSE:21~26分)24例、中度认知功能障碍组(MMSE:10~20分)40例、重度认知功能障碍组(MMSE:1~9分)28例。实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-211-5p和miR-202-3p水平。血清miR-211-5p、miR-202-3p水平对抑郁症的诊断价值采用ROC曲线进行分析。血清miR-211-5p、miR-202-3p水平与病情程度及认知功能的关系采用Spearman相关性分析。结果抑郁症患者血清miR-211-5p水平低于对照组,miR-202-3p水平高于对照组(P<0.05)。miR-211-5p、miR-202-3p联合诊断抑郁症的AUC高于miR-211-5p(Z=4.701,P<0.001)、miR-202-3p(Z=2.275,P=0.023)单独诊断的AUC。与轻度抑郁组相比,中度抑郁组和重度抑郁组miR-211-5p水平依次降低,与轻度抑郁组相比,中度抑郁组和重度抑郁组miR-202-3p水平依次升高。不同认知功能抑郁症患者血清miR-211-5p水平比较:重度认知功能障碍组<中度认知功能障碍组<轻度认知功能障碍组;miR-202-3p水平比较:重度认知功能障碍组>中度认知功能障碍组>轻度认知功能障碍组(P<0.05)。Spearman相关性分析显示,抑郁症患者血清miR-211-5p水平与病情程度及认知功能损害呈负相关,miR-202-3p水平与病情程度及认知功能损害呈正相关(P<0.05)。结论抑郁症患者血清miR-211-5p低表达,miR-202-3p高表达,二者与病情程度及认知功能有关,有成为抑郁症辅助诊断生物学指标的潜力。

miR-143-3p和miR-509-5p在儿童肺炎支原体肺炎疾病程度及预后评估中的应用价值

目的分析微小核糖核酸-143-3p(miR-143-3p)与微小核糖核酸-509-5p(miR-509-5p)在肺炎支原体肺炎患儿血清中的表达水平,及其与疾病严重程度和预后的关系。方法选取2020年5月至2022年4月邯郸市妇幼保健院收治的肺炎支原体肺炎患儿135例(肺炎支原体肺炎组),根据疾病严重程度分为轻症组84例和重症组51例,另选取同期体检健康儿童130例作为对照组,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清miR-143-3p与miR-509-5p水平;对肺炎支原体肺炎患儿进行肺功能检测,测定呼吸频率(RR)、潮气量(VT)、呼气时间(Te)、达峰时间(TPTEF)、达峰容积(VPTEF),计算TPTEF/Te、VPTEF/VT;采用Pearson法分析肺炎支原体肺炎患儿RR、VT、TPTEF/Te、VPTEF/VT与血清miR-143-3p、miR-509-5p的相关性;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-143-3p和miR-509-5p对重症肺炎支原体肺炎以及预后不良的预测价值。结果肺炎支原体肺炎组miR-143-3p水平为(0.25±0.04),miR-509-5p为(0.37±0.04),均低于对照组(P<0.05);与轻症组相比,重症组肺炎支原体肺炎患儿RR升高,VT、TPTEF/Te、VPTEF/VT、血清miR-143-3p及miR-509-5p水平均降低(P<0.05);肺炎支原体肺炎患儿血清miR-143-3p、miR-509-5p与VT、TPTEF/Te、VPTEF/VT均呈正相关(P<0.05);血清miR-143-3p、miR-509-5p预测重症肺炎支原体肺炎的曲线下面积为0.820(灵敏度为82.4%,特异度为83.3%)、0.849(灵敏度为72.5%,特异度为92.9%);血清miR-143-3p、miR-509-5p预测预后不良的曲线下面积为0.735(灵敏度为79.6%,特异度为63.0%)、0.859(灵敏度为81.5%,特异度为87.3%)。结论肺炎支原体肺炎患儿血清miR-143-3p、miR-509-5p水平降低,二者均对疾病严重程度和预后具有判别价值,有望作为临床病情评估以及预后判断的指标。

缺氧缺血性脑病新生儿血清miR-139-5p,HDAC4和GFAP表达水平及其临床价值研究

目的分析血清微小核糖核酸(micro RNA,miR)-139-5p,组蛋白去乙酰化酶4(histone deacetylase 4,HDAC4)和胶质纤维酸性蛋白(glialfibrillary acidic protein,GFAP)与新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)脑损伤严重程度的关系。方法选取2017年1月~2022年3月广元市中心医院分娩的HIE新生儿72例为研究对象(研究组);同期健康的足月新生儿75例为对照组。实时荧光定量PCR检测血清中miR-139-5p,HDAC4表达水平。酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清GFAP水平。Logistic回归分析影响HIE患儿重度脑损伤发生的因素。结果与对照组相比,研究组血清GFAP(1.30±0.37ng/L vs 0.50±0.15ng/L),HDAC4相对表达水平(2.05±0.39 vs 1.02±0.21)升高,miR-139-5p相对表达水平(0.63±0.14 vs 1.01±0.22)和NBNA评分(33.20±1.43分vs 39.85±2.23分)降低,差异具有统计学意义(t=17.304,20.046,12.436,21.424,均P<0.05);与轻中度组相比,重度组血清GFAP(1.61±0.47ng/L vs 1.16±0.33ng/L),HDAC4(2.43±0.37 vs 1.87±0.40)相对表达水平升高,miR-139-5p相对表达水平(0.38±0.10 vs 0.74±0.16)和NBNA评分(30.52±1.54分vs 34.46±1.38分)降低,差异具有统计学意义(t=4.690,5.669,9.900,10.884,均P<0.05)。Logistic回归分析显示,miR-139-5p低表达,HDAC4高表达,低NBNA评分,低出生后1 min内Apgar评分是影响HIE患儿重度脑损伤发生的危险因素(Waldχ^(2)=5.772~6.969,OR=1.519~1.709,均P<0.05)。Pearson分析显示,血清miR-139-5p表达水平与GFAP,HDAC4呈负相关(r=-0.416,-0.579,均P<0.05),血清HDAC4表达水平与GFAP呈正相关(r=0.437,P<0.05)。Spearman分析显示,血清mi R-139-5p表达水平与NBNA评分、出生后1 min内Apgar评分、出生后5 min内Apgar评分呈正相关(r=0.398,0.367,0.348,均P<0.05);血清HDAC4表达水平与NBNA评分、出生后1 min内Apgar评分、出生后5 min内Apgar评分呈负相关(r=-0.364,-0.345,-0.332,均P<0.05)。结论HIE患儿血清中miR-139-5p表达降低,HDAC4表达升高,mi R-139-5p,HDAC4与HIE患儿脑损伤严重程度有关。

CCCK-18CTRP-3miR-340-5p预测重症高血压性脑出血患者预后的价值

目的探讨CCCK-18、CTRP-3、miR-340-5p在重症高血压性脑出血患者中的表达及相关性。方法选取哈尔滨医科大学附属第一医院2019-10—2021-10收治的80例重症高血压性脑出血患者为观察组,另选取同期健康体检者80例为对照组,比较对照组与观察组血清CCCK-18、CTRP-3、miR-340-5p水平,依据mRS评分将观察组患者分为预后良好组(55例)和预后不良组(25例),比较不同预后患者一般资料及血清CCCK-18、CTRP-3、miR-340-5p水平,Logistic回归分析重症高血压性脑出血患者预后的影响因素,Pearson相关性分析CCCK-18、CTRP-3、miR-340-5p之间的相关性,ROC曲线分析血清CCCK-18、CTRP-3、miR-340-5p单独及三者联合预测高血压性脑出血预后的价值。结果观察组血清CCCK-18高于对照组,CTRP-3、miR-340-5p低于对照组(P<0.05)。预后良好组血清CCCK-18低于预后不良组,CTRP-3、miR-340-5p高于预后不良组(P<0.05)。Logistic回归分析显示,血清CCCK-18、CTRP-3、miR-340-5p均是重症高血压性脑出血患者预后的影响因素(P<0.05)。血清CCCK-18与血清CTRP-3、miR-340-5p呈负相关(r=-0.385,r=-0.406,P<0.05),三者联合检测预测患者预后的AUC值较高(P<0.05)。结论重症高血压性脑出血患者CCCK-18呈高表达,CTRP-3、miR-340-5p呈低表达,其对高血压脑出血病情判断和预后具有重要意义。

MiR-205-3p靶向PRMT5改善P.g-LPS所致HUVECs炎症反应和凋亡

目的:研究miR-205-3p对P.g-LPS所致HUVECs炎症反应和凋亡的影响及调控机制。方法:利用P.g-LPS刺激HUVECs构建细胞损伤模型,实验分为Con组、LPS组、LPS+miR-NC组、LPS+miR-205组、LPS+si-NC组、LPS+si-PRMT5组、LPS+miR-205+pc-NC组和LPS+miR-205+pc-PRMT5组,RT-qPCR和Western blot检测miR-205-3p、PRMT5和凋亡蛋白表达;ELISA检测炎症因子表达;Tunel染色和流式细胞术检测HUVECs凋亡;双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-205-3p和PRMT5的靶向关系。结果:P.g-LPS刺激HUVECs后,炎症因子表达和凋亡率显著升高,miR-205-3p下调,PRMT5上调(P <0.05)。miR-205-3p可以抑制PRMT5表达,且过表达miR-205-3p和PRMT5低表达均可以降低炎症因子表达和降低细胞凋亡率(P <0.05)。双荧光素酶报告基因实验和Western blot结果表明miR-205-3p可靶向抑制PRMT5的表达(P <0.05)。且过表达PRMT5可明显逆转过表达miR-205-3p对炎症反应和凋亡的抑制作用(P <0.05)。结论:P.g-LPS促进HUVECs炎症反应和凋亡;miR-205-3p靶向负调控PRMT5表达来改善P.g-LPS诱导的HUVECs炎症反应和凋亡。

急性缺血性卒中患者静脉溶栓后血清微小RNA-874-3p、微小RNA-181a-5p及Wnt/β-catenin信号通路与神经功能预后的关系

目的探讨急性缺血性卒中(acute ischemic stroke,AIS)患者静脉溶栓后血清微小RNA(microRNA,miRNA)-874-3p(miR-874-3p)、miRNA-181a-5p(miR-181a-5p)与Wnt/β-catenin信号通路和神经功能预后的关系。方法前瞻性连续纳入2021年3月—2022年12月深圳市龙华区中心医院接受静脉溶栓治疗的AIS患者进入AIS组,选取同期体检健康者进入对照组。检测并比较两组血清miR-874-3p、miR-181a-5p及外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中Wnt/β-catenin相对表达水平,采用Pearson相关性分析AIS患者血清miR-874-3p、miR-181a-5p表达与Wnt/β-catenin信号通路的相关性。所有AIS患者出院后均随访3个月,根据mRS评分将完成随访的患者分为神经功能预后良好组和神经功能预后不良组,比较两组患者血清miR-874-3p、miR-181a-5p相对表达水平。采用多因素logistic回归方程分析AIS患者神经功能预后的影响因素。结果本研究中,AI S组纳入185例患者,平均(62.8±7.3)岁;对照组纳入65例体检健康者,平均(63.4±6.9)岁。与对照组相比,AIS组血清miR-874-3p(1.02±0.21 vs.1.46±0.23,P<0.001)相对表达水平及PBMC中Wnt mRNA(2.41±0.64 vs.4.59±1.13,P<0.001)、β-catenin mRNA(1.19±0.18 vs.2.34±0.73,P<0.001)相对表达水平均低于对照组,血清miR-181a-5p(1.95±0.32 vs.1.27±0.27,P<0.001)相对表达水平高于对照组;Pearson相关性分析显示,AIS患者血清miR-874-3p表达与PBMC中Wnt mRNA(r=0.562,P<0.001)、β-catenin mRNA(r=0.611,P<0.001)表达呈正相关,miR-181a-5p表达与PBMC中Wnt mRNA(r=-0.586,P<0.001)、β-catenin mRNA(r=-0.595,P<0.001)表达呈负相关。AIS组中,神经功能预后良好104例,预后不良81例,预后不良率为43.78%;神经功能预后不良组血清miR-874-3p相对表达水平显著低于神经功能预后良好组(0.79±0.20 vs.1.20±0.22,P<0.001),miR-181a-5p相对表达水平显著高于神经功能预后良好组(2.26±0.31 vs.1.71±0.24,P<0.001);神经功能预后不良组年龄([65.48±7.45)岁vs.(62.29±7.21)岁,P=0.004]、发病至入院时间([4.36±1.03)h vs.(3.79±1.15)h,P=0.001]、入院时NIHSS评分([6.81±2.45)分vs.(4.67±1.76)分,P<0.001]及Hcy水平([13.34±4.12)μmol/L vs.(11.75±3.46)μmol/L,P=0.005]均高于神经功能预后良好组;多因素logistic回归结果显示,年龄偏高(OR 1.056,95%CI 1.005~1.108,P=0.029)、发病至入院时间延长(OR 1.125,95%CI 1.008~1.256,P=0.035)、入院时NIHSS评分高(OR 1.220,95%CI 1.093~1.362,P<0.001)、miR-874-3p低表达(OR 0.632,95%CI 0.498~0.803,P<0.001)及miR-181a-5p高表达(OR 1.506,95%CI 1.209~1.875,P<0.001)是导致AIS神经功能预后不良的危险因素。结论AIS组患者血清miR-874-3p表达下降,miR-181a-5p表达升高,均与Wnt/β-catenin信号通路相关,血清miR-874-3p、miR-181a-5p水平是患者神经功能预后的影响因素。

乙型肝炎病毒相关性肝细胞肝癌患者血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达及临床意义

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)相关性肝细胞肝癌(HCC)患者血清微小核糖核酸(miR)-125a-5p、miR-127-3p表达及临床意义。方法选取2018年1月至2020年10月该院收治的90例HBV相关性HCC患者作为HBV相关性HCC组。另选取同期该院的90例体检健康者作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达。分析miR-125a-5p、miR-127-3p表达与HBV相关性HCC患者病理特征的关系。根据HBV相关性HCC患者血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达的平均值分为高、低表达组,通过Kaplan-Meier法绘制各组不同的生存曲线。通过Cox回归分析影响HBV相关性HCC患者预后的因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达对HBV相关性HCC患者死亡的预测价值。结果HBV相关性HCC组血清miR-125a-5p、miR-127-3p相对表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。不同肿瘤最大径、分化程度、脉管侵犯、TNM分期、淋巴结转移的HBV相关性HCC患者血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达比较差异有统计学意义(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析显示,miR-125a-5p高表达组3年总生存率(64.58%)高于miR-125a-5p低表达组(38.10%),miR-127-3p高表达组3年总生存率(66.00%)高于miR-127-3p低表达组(35.00%),差异有统计学意义(χ^(2)=7.770、9.507,P=0.005、0.002)。HBV相关性HCC患者死亡的独立危险因素为肿瘤最大径≥5 cm、低分化、有脉管侵犯、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移,其独立保护因素为miR-125a-5p、miR-127-3p升高。ROC曲线分析结果显示,血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达联合预测的曲线下面积(AUC)为0.907,高于血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达单独预测的AUC(0.790、0.787),差异有统计学意义(Z=2.691、3.152,P=0.007、0.002)。结论HBV相关性HCC患者血清miR-125a-5p、miR-127-3p低表达,与肿瘤最大径、分化程度、脉管侵犯、TNM分期和预后有关,血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达联合对HBV相关性HCC患者预后有较高的预测价值。

胃癌组织miR-23a-3p、miR-361-5p表达与PI3K/AKT/mTOR信号通路和预后的关系研究

目的探讨胃癌组织微小核糖核酸(miR)-23a-3p、miR-361-5p表达与磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路和预后的关系。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应检测120例胃癌患者胃癌组织与癌旁组织中miR-23a-3p、miR-361-5p、PI3K mRNA、AKT mRNA、mTOR mRNA表达。Pearson相关分析胃癌组织中miR-23a-3p、miR-361-5p表达与PI3K mRNA、AKT mRNA、mTOR mRNA表达的相关性,以及分析miR-23a-3p、miR-361-5p表达与胃癌患者临床病理特征的关系。Kaplan-Meier生存分析胃癌组织中不同miR-23a-3p、miR-361-5p表达与胃癌患者生存预后的关系。单因素及多因素COX回归分析影响胃癌患者生存预后因素。结果相比于癌旁组织,胃癌组织中miR-23a-3p、miR-361-5p表达明显较低,而PI3K mRNA、AKT mRNA、mTOR mRNA表达明显较高,差异有统计学意义(均P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,胃癌组织中miR-23a-3p、miR-361-5p表达与PI3K mRNA、AKT mRNA、mTOR mRNA表达呈负相关(均P<0.05)。不同肿瘤TNM分期、肿瘤分化程度、术后辅助化疗及淋巴结转移的胃癌患者胃癌组织中miR-23a-3p、miR-361-5p表达比较,差异有统计学意义(均P<0.05)。miR-23a-3p低表达胃癌患者3年总体生存率为46.77%(29/62),低于miR-23a-3p高表达胃癌患者3年总体生存率[81.03%(47/58)],差异有统计学意义(Log-Rankχ^(2)=30.243,P<0.001)。miR-361-5p低表达胃癌患者3年总体生存率为50.79%(32/63),低于miR-361-5p高表达胃癌患者3年总体生存率[77.19%(44/57)],差异有统计学意义(Log-Rankχ^(2)=24.932,P<0.001)。单因素及多因素Cox回归分析结果显示,TNM分期Ⅲ期、有淋巴结转移、无术后辅助化疗、miR-23a-3p低表达、miR-361-5p低表达是影响胃癌患者不良预后的独立危险因素(P<0.05)。结论胃癌患者胃癌组织中miR-23a-3p、miR-361-5p表达降低,二者表达与PI3K/AKT/mTOR信号通路有关,是潜在的胃癌预后相关的肿瘤标志物。

miR-98-5p和DNMT3A在溃疡性结肠炎患者和动物模型中的表达及作用机制

目的:探讨微小RNA-98-5p(miR-98-5p)和DNA甲基转移酶3A(DNMT3A)在溃疡性结肠炎(UC)患者和动物模型中的表达及作用机制。方法:选取2021年1月-2022年12月100例UC患者作为观察组,另选取100名健康受试者作为对照组,检测血清miR-98-5p、DNMT3A mRNA及蛋白表达水平,分析miR-98-5p、DNMT3A mRNA与UC临床病理特征的关系;建立UC大鼠模型,大鼠随机分为空白组(CT组)、模型组(UC组)、miR-98-5p对照组(antagomiR-NC组)、miR-98-5p抑制剂组(antagomiR-98-5p组),ELISA测定血清白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α含量,HE染色观察结肠组织病理学变化,RT-qPCR和Western blot检测结肠组织miR-98-5p、DNMT3A mRNA及蛋白表达水平。结果:与对照组比较,UC患者血清miR-98-5p表达升高,DNMT3A mRNA、DNMT3A表达降低,miR-98-5p、DNMT3A mRNA表达水平与病情分级、黏液脓血便、黏膜急慢性炎症和不典型增生有关(P<0.05);与CT组比较,UC组大鼠结肠黏膜层缺损,可见大量炎性细胞浸润,血清IL-1β、IL-6、TNF-α以及结肠组织miR-98-5p表达升高,DNMT3A mRNA及蛋白表达降低(P<0.05);与antagomiR-NC组比较,antagomiR-98-5p组黏膜层缺损部分和炎症细胞浸润减少,结构较清晰,血清IL-1β、IL-6、TNF-α以及结肠组织miR-98-5p表达降低,DNMT3A mRNA及蛋白表达升高(P<0.05);miR-98-5p与DNMT3A有靶向结合位点。结论:UC患者血清和模型大鼠结肠组织miR-98-5p表达升高,DNMT3A表达降低,下调miR-98-5p的表达能够促进DNMT3A的表达,改善UC症状。

miR-532-3p、MAPK、Nrf2表达与非小细胞肺癌患者对EGFR-TKIs耐药的关系研究

目的 探讨血清微小核糖核酸-532-3p(miR-532-3p)、有丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、核因子E2相关因子2(Nrf2)表达情况与非小细胞肺癌患者表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)治疗耐药的关系。方法 回顾性选取2021年1月—2023年7月张家口市第一医院收治的198例EGFR基因突变非小细胞肺癌EGFR-TKIs治疗耐药患者作为耐药组,另选同期收治的202例非耐药患者作为非耐药组。比较两组血清miR-532-3p、MAPK、Nrf2表达水平,用Pearson相关性分析EGFR基因突变非小细胞肺癌EGFR-TKIs治疗耐药患者血清miR-532-3p、MAPK、Nrf2表达的相关性,并予以多因素Logistic回归分析EGFR基因突变非小细胞肺癌EGFR-TKIs耐药的危险因素。结果 耐药组血清miR-532-3p表达水平高于非耐药组(P<0.05),血清MAPK、Nrf2表达水平低于非耐药组(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,EGFR基因突变非小细胞肺癌EGFR-TKIs耐药患者血清miR-532-3p与血清MAPK、Nrf2均呈负相关(r=-0.612、-0.598,P<0.05),血清MAPK与Nrf2呈正相关(r=0.499,P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,血清miR-532-3p表达水平上调、血清MAPK、Nrf2表达水平下调是EGFR基因突变非小细胞肺癌EGFR-TKIs耐药的独立危险因素(OR=3.089、2.217、3.428,P<0.05)。结论 EGFR基因突变非小细胞肺癌EGFR-TKIs耐药的发生与血清miR-532-3p上调、MAPK、Nrf2下调密切相关,检测三者表达水平可能成为非小细胞肺癌治疗过程中的关键生物治疗靶点。

油莎豆5-烯醇式丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶基因CeEPSPS的克隆与分析

起源于非洲和地中海沿岸的油莎豆以适应性广、产油量高而成为我国的新型油料作物。为促进该物种的开发与利用,研究基于基因组和转录组数据对油莎豆及代表性单子叶植物的EPSPS基因进行系统鉴定。结果表明:与大多数植物类似,油莎豆仅含有1个EPSPS基因,其包含7个内含子,命名为CeEPSPS;RT-PCR分离到的CeEPSPS编码区序列为1584 bp,预测编码514个氨基酸,其N端的前70个残基为叶绿体信号肽,77~508位残基为高度保守的EPSP合酶结构域(PF00275);与EPSP合酶结构域相比,信号肽在不同植物中变异较大;CeEPSPS成熟蛋白的理论分子量为47.32 kDa,等电点为5.49,总平均疏水指数为0.069,脂肪族指数为93.76,不稳定系数为31.73,与其他物种相近,均属于稳定的疏水型酸性蛋白;进化分析支持油莎豆划归为禾本目莎草科。序列比对和基因组测序分析结果显示,56份油莎豆种质不存在已报道的草甘膦抗性变异。qRT-PCR分析结果显示,CeEPSPS主要在成熟叶片和块茎中表达,其表达水平显著高于芽、幼嫩叶片、衰老叶片和芽茎。此外,本研究还构建了CeEPSPS的植物过表达载体,这为下一步的草甘膦抗性育种奠定了坚实的基础。

多酶一锅法合成硫酸基供体3′-磷酸腺苷-5′-磷酸硫酸(PAPS)

以腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)等为原料,来源于乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)的ATP硫酸化酶(ATPS)和来源于产黄青霉菌(Penicillium chrysogenum)的APS激酶(APSK)构建的多酶催化体系可合成3′-磷酸腺苷-5′-磷酸硫酸(PAPS)。同时,在酶法合成PAPS的反应体系中引入铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)来源的无机焦磷酸水解酶(PPase),消耗反应过程中的副产物PPi,使得反应向生成PAPS的方向进行,大幅提高多酶法合成PAPS的产率。本研究构建了重组质粒pET-28a-sumo-ATPS、pET-28a-APSK和pET-28a-PPase,并在大肠杆菌中表达了重组酶,研究酶学性质和优化多酶催化反应合成PAPS的反应条件,以提高PAPS的产量水平,最终PAPS的累积量为14.47 g/L。该工艺可大幅降低PAPS的制备成本。

冠状动脉CT血管造影定量分析指标与冠心病患者血清分泌性卷曲蛋白5几丁质酶-3样蛋白-1表达水平相关性

目的 分析冠状动脉CT血管造影定量分析指标与冠心病患者血清分泌性卷曲蛋白5(SFRP-5)、几丁质酶-3样蛋白-1(YKL-40)表达水平的相关性。方法 选择安阳市第六人民医院2019年10月至2022年10月收治的96例接受冠状动脉CT血管造影检查的患者作为研究对象。根据冠状动脉CT血管造影Agatston法积分的不同将所有患者分为钙化组(75例)和对照组(21例),根据CT血管造影Agatston法积分从低至高的顺序将钙化组患者分为A组、B组和C组。其中A组患者22例,B组患者25例,C组患者28例,对比对照组和钙化组患者基线资料,检测并对比对照组和A、B、C组患者血清SFRP-5、YKL-40水平,采用Pearson分析法分析冠状动脉CT血管造影Agatston法积分与血清SFRP-5、YKL-40指标的相关性。结果 2组患者性别、体质指数经对比,差异无统计学意义,钙化组患者年龄较对照组大,钙化组患者糖尿病史、高血压史患者占比相较于对照组升高,差异有统计学意义(P<0.05);A、B、C组血清YKL-40水平均比对照组高,且C组比B组高,B组比A组高,A、B、C组血清SFRP-5均比对照组低,且C组比B组低,B组比A组低,差异有统计学意义(均P<0.05);Pearson分析法显示,冠状动脉CT血管造影Agatston法积分与血清YKL-40表达水平呈正相关(r=0.63,P<0.05),而与血清SFRP-5表达水平呈负相关(r=-0.66,P<0.05)。结论 冠状动脉钙化的影响因素有年龄、糖尿病史、高血压史,冠状动脉CT血管造影检查所显示的冠状动脉钙化程度与患者血清SFRP-5、YKL-40表达水平之间存在紧密联系,检测上述指标可用于对患者冠状动脉钙化程度进行评估。

N6-甲基腺苷甲基化对小鼠脑缺血-再灌注损伤中微小核糖核酸-155表达和脑损伤的调控作用

目的研究N6-甲基腺苷(m6A)甲基化对小鼠脑缺血-再灌注损伤(CIRI)模型中微小核糖核酸(micro RNA,miRNA,miR)-155表达和脑损伤的调控作用。方法栓线法构建小鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)分析MCAO小鼠脑细胞中pri-miR-155、pre-miR-155及miR-155表达水平,检测建模24 h小鼠脑组织细胞中甲基转移酶样蛋白(METTL)3、miR-155 mRNA表达水平及蛋白表达水平。用慢病毒转染构建METTL3高表达和低表达小鼠模型,再构建MCAO模型,检测右脑组织中pri-miR-155、pre-miR-155和miR-155表达水平。结果 MCAO小鼠脑组织细胞中pri-miR-155表达水平显著降低(P=0.009),pre-miR-155、miR-155表达水平显著升高(P=0.007、0.000 8);MCAO建模24 h小鼠右脑中METTL3、miR-155表达水平均升高(P<0.05),METTL3蛋白表达水平也随miR-155剂量增加而升高,但METTL14、肾母细胞瘤1相关蛋白(WTAP) mRNA表达水平差异均无统计学意义(P>0.05);小鼠右脑组织中METTL3过表达显著降低pri-miR-155表达水平(P=0.008),同时升高premiR-155、miR-155表达水平(P=0.04、0.009);METTL3在细胞中沉默表达显著升高pri-miR-155表达水平(P=0.006),同时降低pre-miR-155、miR-155表达水平(P=0.03、0.009)。结论 CIRI中METTL3异常表达可增强m6A修饰作用,促进pre-miR-155成熟,进而升高miR-155表达水平。这可能为未来缺血性脑卒中患者提供一新治疗策略。

sPE患者血清miR-199a-5p、miR-142-3p表达变化及与产妇血管内皮损伤、围产儿结局的关系

目的观察重度子痫前期(sPE)患者血清微小核糖核酸-199a-5p(miR-199a-5p)、微小核糖核酸-142-3p(miR-142-3p)表达变化,并分析其与产妇血管内皮损伤、围产儿结局的关系,为围产儿结局的改善提供参考。方法选取sPE患者200例(观察组)和产检健康孕妇200例(对照组),采用RT-PCR法测算两组血清miR-199a-5p、miR-142-3p,酶联免疫吸附试验检测两组血清可溶性细胞内皮因子(sEng)、可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)、内皮素-1(ET-1)、血管内皮生长因子(VEGF),Pearson相关分析法分析观察组血清miR-199a-5p、miR-142-3p与血管内皮功能相关指标的相关性。根据围产儿结局将观察组分为结局不良组(29例)和结局良好组(171例),采用单因素分析法及多因素Logistic回归分析法分析患者血清miR-199a-5p、miR-142-3p表达与围产儿结局的关系。结果与对照组比较,观察组血清miR-199a-5p表达及VEGF水平降低,血清miR-142-3p表达及sEng、sFlt-1、ET-1水平升高(P均<0.05)。观察组血清miR-199a-5p表达与sEng、sFlt-1、ET-1水平呈负相关,与VEGF水平呈正相关(P均<0.05);血清miR-142-3p表达与sEng、sFlt-1、ET-1水平呈正相关,与VEGF水平呈负相关(P均<0.05)。结局不良组和结局良好组年龄、早发型sPE比例、并发水肿比例、并发子痫比例、并发胎盘早剥比例、并发产后出血比例、血清miR-142-3p表达变化、血清miR-199a-5p表达变化比较,P均<0.05;多因素Logistic回归分析显示,早发型sPE、胎盘早剥、miR-142-3p高表达是sPE围产儿结局不良的危险因素(P均<0.05),miR-199a-5p高表达是sPE围产儿结局不良的保护因素(P<0.05)。结论sPE患者血清miR-199a-5p表达降低、miR-142-3p表达升高,与血管内皮损伤有关,miR-142-3p高表达是sPE围产儿结局不良的危险因素,miR-199a-5p高表达是sPE围产儿结局不良的保护因素。

膜联蛋白5对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌及3β-羟基类固醇脱氢酶表达的影响

目的先前研究发现促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)刺激Leydig细胞后,膜联蛋白5(annexin 5)及睾酮水平同时增加,推测annexin 5和睾酮之间可能存在某种内在的联系,3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)是间质细胞的标记酶。文中旨在研究annexin 5对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌及3β-HSD表达的影响。方法原代培养大鼠睾丸间质细胞,用不同浓度的annexin 5(0、10-10、10-9、10-8mol/L)处理间质细胞24h和用10-9mol/L的annexin 5处理细胞不同时间(6、12、24、36h),收集培养液,用化学发光法测定培养液中的睾酮含量;Western blotting方法分析睾丸间质细胞中3β-HSD的表达变化。结果不同浓度的annexin 5处理间质细胞24h后,与对照组比较,终浓度为10-10mol/L和10-9mol/L时,睾酮水平分别升高了18%[(14.38±0.30)nmol/Lvs(12.12±0.74)nmol/L](P<0.01)和26%[(15.25±0.47)nmol/Lvs(12.12±0.74)nmol/L](P<0.01);浓度为10-8mol/L时,睾酮水平虽也有升高趋势,但无显著性差异;而Western blotting结果显示,浓度为10-9mol/L时,3β-HSD表达量升高了63%(2.19±1.00vs1.34±0.19,P<0.05),浓度为10-10mol/L和10-8mol/L时,3β-HSD表达量无显著性差异;睾酮分泌与3β-HSD的表达呈显著正相关(r=0.430,P<0.05)。10-9mol/L的an-nexin5处理细胞不同时间,与对照组相比,6h和12h后睾酮的分泌虽有升高,但无统计学意义(P>0.05);24h后睾酮的分泌量显著升高了18%[(12.59±0.41)nmol/Lvs(10.70±0.09)nmol/L](P<0.01);而处理36h后,睾酮分泌量下降了21%[(14.44±1.65)nmol/Lvs(17.46±0.31)nmol/L](P<0.01)。结论在大鼠睾丸间质细胞中,annexin 5对睾酮分泌具有调节功能且呈剂量和时间依赖性;3β-HSD是该调节过程中的关键酶之一。

促性腺激素释放激素类似物对大鼠睾丸间质细胞膜联蛋白5和3β-羟类固醇脱氢酶mRNA表达的影响

目的:观察促性腺激素释放激素(GnRH)类似物对大鼠睾丸间质细胞annexin 5和3β-HSD mRNA表达的影响。方法:原代培养大鼠睾丸间质细胞48 h后,分别用不同终浓度的GnRH激动剂(GnRH-agonist,GnRHa)(10-5mol/L、10-6mol/L、10-7mol/L)和GnRH拮抗剂(GnRH-antagonists,GnRHant)(10-6mol/L、10-7mol/L、10-8mol/L)处理细胞,提取细胞总RNA,反转录,设计特异性引物和Tagman探针,荧光定量PCR检测膜联蛋白5(annexin 5)和3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)mRNA表达的改变。结果:荧光定量PCR结果显示,与未加GnRH类似物的对照组相比,当GnRHa的终浓度为10-5mol/L、10-6mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞annexin 5 mRNA分别升高了38.89%和35.29%,均具有统计学意义(P<0.05);当GnRHa的浓度为10-5mol/L时,3β-HSD mRNA也显著升高了46.43%(P<0.01)。同样,与对照组相比,当GnRHant的浓度为10-6mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞annexin 5 mRNA下降了45.45%(p<0.05),当GnRHant的浓度为10-6mol/L,10-7mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞3β-HSD mRNA也分别显著地降低了63.64%(P<0.01)和50%(P<0.05),其余各组与对照组相比,差异无统计学意义。结论:GnRH类似物能够调控大鼠睾丸间质细胞annexin5和3β-HSD mRNA表达,GnRH类似物可能与睾丸间质细胞上GnRH受体结合后,通过特定的生理机制,进而影响annexin5和3β-HSDmRNA表达,为揭示GnRH类似物调控间质细胞分泌睾酮的作用机制提供了一定的依据,其内在的机制还有待进一步研究。

测定食品中呋喃它酮代谢物3-氨基-5-吗啉甲基-2-恶唑烷酮的酶联免疫吸附法

目的 建立以多克隆抗体为基础的测定食品中呋喃它酮代谢物3-氨基-5-吗啉甲基-2-恶唑烷酮(AMOZ)的间接竞争酶联免疫吸附分析法(ELISA).方法 以4-甲酰基苯氧基乙酸(4-FPA)为修饰剂,合成AMOZ半抗原衍生物,并使其分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)交联制备得到免疫原和包被抗原,经免疫动物(兔),获得抗NPAMOZ(AMOZ与衍生化试剂2-硝基苯甲醛所形成的结合物)的多克隆抗体.用酶联免疫分析法测定AMOZ(以NPAMOZ形式).结果 在包被抗原为2.5 ng/mL,抗体为1:300 000稀释,酶标二抗为1:10000稀释的优化条件下,ELISA测定AMOZ(以NPAMOZ形式)的IC50值(标准曲线中吸光度抑制至最大吸光度值50％时所对应的待测物浓度)为1.86 ng/mL.抗体与呋喃它酮的交叉反应率较高(70.7％),与AMOZ的交叉反应率仅为0.32％,与其余三种硝基呋喃抗生素及它们的代谢物以及其它八种药物的交叉反应率很小(＜0.01％),表明抗体的特异性高.四种市售的肉样(鱼肉、虾肉、鸡肉、猪肝)用作加标实验,加标浓度分别为0.5、1.0和5.0 ng/g,加标样品经衍生化处理后用ELISA测定,回收率为75.6％～112.2％,批间相对标准偏差(RSD)为8.3％～17.5％.结论 本法具有高灵敏性和高特特异性,能用于动物产品中AMOZ的检测.

利用宏基因组文库筛选草甘膦不敏感的5-烯醇式丙酮莽草酰-3-磷酸合酶（EPSPS）基因

为探索利用宏基因组文库筛选草甘膦不敏感的5-烯醇式丙酮莽革酰-3-磷酸合酶（EPSPS）基因，直接从土壤中提取细菌DNA，构建草甘膦污染土壤细菌宏基因组文库，并利用EPSP合酶缺失突变株ER2799筛选到4个能互补EPSP合酶功能的克隆，其中两个克隆的转化子能够在含5mmol／L草甘膦的MOPS培养基上生长。测序结果表明它们均含有完整的EPSP合酶编码基因，GT-1aroA核苷酸长度为1335bp，编码445个氨基酸，GT-4aroA核苷酸长度为1350bp，编码450个氨基酸。利用PCR方法将两个基因克隆到原核表达载体pET28a上后，可以使宿主细胞BL21（DE3）在含100mmol／L草甘膦的MOPS培养基中良好生长。上述结果表明，利用宏基因组文库筛选方法可以得到高抗草甘膦的EPSPS基因。