顺铂联合重组人5型腺病毒腹腔灌注治疗胃癌合并恶性腹腔积液的临床疗效

目的探讨顺铂联合重组人5型腺病毒(H101)腹腔灌注治疗胃癌合并恶性腹腔积液的临床疗效。方法采用随机数字表法将68例胃癌合并恶性腹腔积液患者分为顺铂组(n=34,顺铂腹腔灌注)和顺铂联合H101组(n=34,顺铂联合H101腹腔灌注)。比较两组患者的腹腔积液缓解情况、腹腔积液间隔时间、生存情况、生活质量及不良反应发生情况。结果顺铂联合H101组患者腹腔积液总缓解率为73.5%,高于顺铂组患者的50.0%,差异有统计学意义(P﹤0.05)。顺铂联合H101组患者腹腔积液间隔时间为(34.02±9.79)天,明显长于顺铂组患者的(27.56±9.36)天,差异有统计学意义(P﹤0.01)。顺铂联合H101组患者的中位总生存期长于顺铂组(P﹤0.05)。两组患者的不良反应总发生率比较,差异无统计学意义(P﹥0.05)。结论顺铂联合H101腹腔灌注治疗胃癌合并恶性腹腔积液患者,能够安全有效地控制腹腔积液生成,改善患者的生活质量,延长患者的生存期。

表达呼吸道合胞病毒融合前F蛋白的重组人5型腺病毒的构建

目的筛选并构建成功表达A亚型人呼吸道合胞病毒(Human Respiratory Syncytial Virus,HRSV)融合前构象F蛋白的重组人5型腺病毒(Recombinant Human type5 adenovirus,rHADV-5),为制备和研发HRSV重组腺病毒载体疫苗奠定基础。方法在真核表达载体pcDNA3.1(+)上插入具有不同突变位点的HRSV F蛋白编码序列,利用融合前F蛋白单克隆抗体AM14和D25筛选HRSV F蛋白突变体;通过同源重组将筛选出的前构象F蛋白突变体编码序列插入非复制型人5型腺病毒载体,在HEK293细胞中进行重组病毒的包装和扩增,经氯化铯密度梯度法获得纯化的重组病毒;应用夹心ELISA法和Western blot鉴定F蛋白的表达及构象。结果通过AM14和D25单克隆抗体筛选出了2个稳定维持在融和前构象的HRSV F蛋白序列(SC-3M和SC-5M)。将SC-3M和SC-5M编码序列插入非复制型人5型腺病毒载体,对两种重组人5型腺病毒(pAd5-SC-3M和pAd5-SC-5M)和空载体(pAd5-vector)纯化,病毒滴度分别达到2.016×10^(10),2.52×10^(10)和2.948×10^(11)IU/mL。pAd5-SC-3M和pAd5-SC-5M感染HEK293后均能高效表达HRSV融合前构象的F蛋白并维持三聚体结构,且pAd5-SC-5M感染细胞中F蛋白表达量高于pAd5-SC-3M。结论成功在体外传代细胞中获得可高效表达A型HRSV融合前F蛋白的重组人5型腺病毒,为进一步通过动物试验评价该HRSV重组腺病毒载体疫苗奠定了基础。

胸腔内注射重组人5型腺病毒治疗晚期肺癌恶性胸腔积液的疗效观察

目的:观察胸腔内注射重组人5型腺病毒(安柯瑞)治疗肺癌恶性胸腔积液的有效性和安全性。方法:将我院52例肺癌恶性胸腔积液患者随机分为安柯瑞治疗组(26例)和顺铂对照组(26例),胸腔内分别注射安柯瑞或顺铂,观察治疗有效率、不良反应。结果:安柯瑞治疗组和顺铂对照组治疗有效率分别为69.23%及53.84%,两组间比较具有显著差异(P<0.05),两组均出现不同程度的白细胞减少,但较之顺铂对照组,安柯瑞治疗组不良反应明显较轻。结论:安柯瑞胸腔内注射治疗晚期肺癌恶性胸腔积液疗效较好,毒副反应轻。

攻癌利水散外敷联合重组人5型腺病毒注射液胸腔内灌注治疗肺癌恶性胸水的临床疗效

目的观察外敷攻癌利水散联合重组人5型腺病毒注射液胸腔内灌注治疗肺癌恶性胸腔积液的临床疗效。方法120例肺癌恶性胸水患者随机分为中药组、顺铂(DDP)组、重组人5型腺病毒组及联合治疗组,每组30例,均行胸腔穿刺彻底引流胸水,中药组给予单纯外敷攻癌利水散;DDP组及重组人5型腺病毒组分别予胸腔灌注DDP或重组人5型腺病毒注射液;联合治疗组予外敷攻癌利水散联合胸腔灌注重组人5型腺病毒注射液,4 w后根据胸水量的变化进行疗效评价。结果每组生活质量均得到改善,其中联合治疗组改善最明显。联合治疗组总有效率显著高于中药组及重组人5型腺病毒组,差异有统计学意义(P<0. 05);而中药组及重组人5型腺病毒组显著高于DDP组,差异有统计学意义(P<0. 05);中药组与重组人5型腺病毒组差异无统计学意义(P>0. 05)。结论重组人5型腺病毒注射液胸腔内灌注联合攻癌利水散外敷对肺癌伴恶性胸水疗效最佳,同时显著提高患者生活质量。

重组人5型腺病毒胸腔灌注治疗肺癌恶性胸腔积液

目的观察重组人5型腺病毒注射液胸腔灌注对肺癌恶性胸腔积液的临床治疗效果。方法 45例肺癌恶性胸腔积液患者随机分为观察组(23例)和对照组(22例),两组均应用微创置管胸腔闭式引流结合局部注药,观察组胸腔内局部灌注重组人5型腺病毒注射液,对照组局部灌注顺铂,观察胸腔积液控制情况、毒副反应。结果观察组胸液控制有效率为82.61%,完全缓解率47.83%;对照组有效率为40.91%,完全缓解率为18.18%,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组和对照组均无严重不良反应。结论胸腔内局部灌注重组人5型腺病毒注射液在有效控制肺癌恶性胸腔积液方面明显优于顺铂,值得推广应用。

化学发光法中和抗体检测技术对广州地区人5型腺病毒的流行病学研究

目的建立高通量、可定量中和抗体检测方法,并且调查广州健康成人及儿童人群中人5型腺病毒中和抗体存在情况。方法采用以带有分泌型碱性磷酸酶报告基因的5型重组腺病毒使用化学发光法,调查116份成人血清和94份儿童血清中5型腺病毒中和抗体情况。结果该方法是一种适合高通量调查的血清学调查方法,广州地区成人中人5型腺病毒中和抗体阳性比例占26.72%,儿童中阳性比例为17.02%。结论5型腺病毒在广州人群中具有一定的免疫程度,结合中和实验结果来应用该种病毒载体并同时开发其他血清型的腺病毒载体很有必要。

重组人5型腺病毒对B16黑色素瘤生长的抑制作用

目的研究瘤内直接注射重组人5型腺病毒H101对B16黑色素瘤生长以及对手术后再次接种B16黑色素瘤细胞后肿瘤生长的影响。方法建立小鼠B16黑色素瘤动物模型。瘤内直接注射H101腺病毒,测量肿瘤体积,切除肿瘤,再次接种B16黑色素瘤细胞,观察肿瘤生长情况。结果细胞接种8 d后,全部小鼠均长出肿瘤。H101注射组肿瘤的体积在给药后3,6,9 d,都显著小于对照组。再次接种B16黑色素瘤细胞后,H101注射组肿瘤的生长速度也显著小于对照组。结论瘤内直接注射H101对B16黑色素瘤生长具有抑制作用,对手术后再次接种的肿瘤生长也具有抑制作用。

重组人5型腺病毒对Lewis肺癌小鼠移植瘤生长的抑制作用

目的探讨重组人5型腺病毒(rAd-5)对Lewis肺癌小鼠移植瘤生长的影响。方法建立C57BL/6小鼠Lewis肺癌移植瘤动物模型,实验组瘤内直接注射rAd-5腺病毒后,测量移植瘤体积;切除肿瘤,再次接种Lewis肺癌细胞,观察肿瘤生长情况。对照组注射相应体积的PBS。结果 Lewis肺癌细胞接种第8天,全部小鼠长出肿瘤。实验组肿瘤的体积在肿瘤细胞接种第11、14天时,都显著小于对照组(P<0.01);再次接种Lewis肺癌细胞后,实验组肿瘤的生长速度也显著小于对照组,在再次接种肿瘤细胞后第14～22天,肿瘤体积都显著小于对照组(P<0.05或0.01)。结论 rAd-5对Lewis肺癌细胞生长具有抑制作用,对肿瘤切除术后再次接种的肿瘤生长也具有抑制作用。

重组人5型腺病毒胸腔内注射治疗晚期肺癌恶性胸腔积液的效果分析

目的探讨重组人5型腺病毒胸腔内注射治疗晚期肺癌恶性胸腔积液的效果。方法 104例晚期肺癌合并恶性胸腔积液患者,以随机数字表法将其分为对照组和研究组,各52例。研究组患者给予胸腔内注射重组人5型腺病毒治疗,对照组患者给予注射顺铂治疗。比较两组患者的治疗效果及不良反应发生情况。结果研究组治疗总有效率为73.08%,高于对照组的51.92%,差异具有统计学意义(χ~2=4.964,P<0.05);两组患者不良反应发生率比较差异无统计学意义(χ~2=0.043,P>0.05)。结论重组人5型腺病毒胸腔内注射治疗在晚期肺癌恶性胸腔积液中具有显著的应用效果,不良反应较少,适于临床应用。

重组人5型腺病毒腔内灌注联合高频热疗治疗恶性胸水的疗效观察

目的:观察重组人5型腺病毒腔内灌注联合高频热疗治疗恶性胸水的疗效及其副反应。方法:确诊恶性胸水患者50例,随机分成治疗组(25例)和对照组(25例),两组均应用微创置管胸腔闭式引流结合腔内灌注药物治疗胸水,治疗组第1天胸腔内注射奈达铂50mg,第3天灌注重组人5型腺病毒1.5ml,灌注结束后,采用HG-2000型高频热疗机行胸腔热疗41℃～42℃,60min,灌注第1、3、5天共完成热疗3次;对照组胸腔内第1天灌注奈达铂50mg,第1、3、5天共完成热疗3次,观察近期疗效和毒副反应。结果:观察组胸水近期控制有效率为72.0%,完全缓解率为40.0%,对照组有效率为44.0%,完全缓解率为20.0%,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组和对照组均无严重不良反应。结论:恶性胸水患者胸腔内灌注重组人5型腺病毒和奈达铂联合高频热疗能有效控制恶性胸水,副反应较小,较单纯灌注奈达铂疗效更佳,值得推广应用。

重组5型腺病毒处理不会加重卵清蛋白诱发哮喘小鼠的哮喘症状

目的探索重组5型腺病毒（rAd5）对卵清蛋白（OVA）诱发的小鼠哮喘模型的影响。方法 60只6~8周龄、体质量18~20 g的雌性C57BL/6小鼠被随机分为健康对照组、rAd5对照组、OVA哮喘对照组、rAd5处理的OVA哮喘组,每组15只。OVA哮喘对照组、rAd5处理的OVA哮喘组在第0、7、14天分别采用含50μg OVA和2 mg氢氧化铝混悬液腹腔注射致敏3次、于第42、43、44天连续3 d用OVA雾化激发制作哮喘模型。其余两组采用相同体积的生理盐水处理。rAd5对照组、rAd5处理的OVA哮喘组于实验第21天开始肌注rAd5（2.5×109个病毒颗粒/只）1次。并于第35天滴鼻加强1次rAd5（2.5×109个病毒颗粒/只）。所有小鼠于最后一次雾化激发48 h内进行安乐死。通过无创肺功能仪体描法检测小鼠气道高反应,收集血清及肺泡灌洗液标本、收集肺组织用于HE及PAS染色,通过ELISA检测肺泡灌洗液中的白细胞介素4（IL-4）、IL-5、IL-13及血清中的总IgE。结果与健康对照组及rAd5对照组相比,OVA哮喘对照组、rAd5处理的OVA哮喘组其肺部炎症及黏液分泌显著增加,其肺泡灌洗液中IL-4、IL-5、IL-13及血清中的总IgE含量显著增高,其气道高反应显著升高。然而,OVA哮喘对照组与rAd5处理的OVA哮喘组之间无显著差异。结论重组5型腺病毒作用于小鼠哮喘模型不会加重哮喘症状。

重组人5型腺病毒在体外对A549细胞的影响

目的探讨重组人5型腺病毒对A549细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法采用MTT法、细胞迁徙试验、流式细胞术、TUNEL法等方法检测重组人5型腺病毒对A549细胞生物学特性的影响。结果重组人5型腺病毒在体外对A549细胞有显著的生长抑制作用,且具有时间和浓度依赖性;一定质量浓度的重组人5型腺病能显著降低A549细胞迁徙活性,诱导细胞凋亡,阻滞A549细胞于G0/S期。结论重组人5型腺病在肿瘤的临床治疗中有着重要的作用和广阔的前景。

人5型腺病毒六邻体蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备抗人5型腺病毒(HAdV5)六邻体(Hexon)蛋白的单克隆抗体并对其进行鉴定。方法用纯化的Hexon蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合,经ELISA间接法筛选和克隆化培养,获得4株分泌抗HAdV5的Hexon蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞。纯化获得单克隆抗体,使用ELISA和Western blot鉴定单克隆抗体的敏感性和特异性。结果 ELISA和Western blot结果表明这4株单克隆抗体与HAdV5的Hexon蛋白可以特异性结合。单克隆抗体株4A9-HRP标记和8D6建立的ELISA夹心法具备较高灵敏度和特异性。结论获得4株抗HAdV5的Hexon蛋白的单克隆抗体,为HAdV5相关的疫苗研制和HAdV5感染性疾病的早期快速诊断奠定了基础。

K562/ADR细胞的5型腺病毒感染率研究

腺病毒是目前肿瘤基因治疗研究的常用载体,而5型腺病毒(Ad5)以其复制效率高、载体容量大等优势而被广泛用于基因治疗的相关研究。比较5型腺病毒对人白血病细胞K562及其耐药株K562/ADR的感染效率,并分析引起这种差异的分子机制。流式细胞术及荧光显微镜观察,结果显示,5型腺病毒对K562/ADR的感染效率明显高于K562;Real time PCR定量分析表明K562/ADR细胞株表面的CAR表达水平约为K562的1.33倍(P<0.05),而整合素αν表达则是K562的4.36倍(P<0.01)。

9例复发性宫颈癌患者瘤内注射重组人5型腺病毒联合化疗的护理

对9例复发性宫颈癌患者实施瘤内注射重组人5型腺病毒,并联合全身化疗。其护理要点是做好心理护理,治疗前充分准备,治疗时严格按照基因药物治疗流程,治疗后严密观察患者不良反应,对出现的不良反应采取相应的护理措施,同时做好妇瘤科常规护理和随访记录。本组患者治疗后的不良反应有发热6例,肌肉酸痛2例,乏力5例,骨髓抑制6例,轻度胃肠道反应3例等,经对症处理后缓解,所有患者均按时完成了治疗计划。治疗后1个月患者入院复查,肿瘤治疗结果显示完全缓解3例,部分缓解4例,稳定2例,进展0例。

重组人5型腺病毒注射液治疗肝癌256例临床护理

目的探讨重组人5型腺病毒注射液治疗肝癌的临床护理措施。方法对256例肝癌患者在应用常规化疗药物介入治疗的基础上给予重组人5型腺病毒注射液(5支),对其进行精心的术前和术后护理。结果 256例肝癌患者在加用重组人5型腺病毒注射液介入治疗经精心的护理后,AFP的阳性率降低,不良反应并无增加,均顺利出院。结论有效的护理措施能保证重组人5型腺病毒注射液治疗肝癌的顺利进行,对临床治疗有重要意义。

重组人5型腺病毒H101联合索拉非尼对肝癌细胞株HepG2的体外抑制作用

目的:探讨重组人5型腺病毒H101联合索拉非尼(sorafenib)体外对人肝癌细胞株Hep G2增殖及凋亡的影响。方法:将重组人5型腺病毒H101和索拉非尼分成单用组及联合用药组,作用于Hep G2细胞,另设不加药对照组。CCK-8法检测Hep G2细胞存活率,流式细胞术及DAPI染色检测Hep G2细胞凋亡。结果:重组人5型腺病毒H101及索拉非尼均可显著抑制Hep G2细胞增殖并诱导其凋亡;与重组人5型腺病毒H101或索拉非尼单用相比,两药联合对Hep G2细胞增殖抑制及诱导凋亡作用更为显著(均P<0.05)。结论:重组人5型腺病毒H101、索拉非尼单用及联用均能体外抑制Hep G2细胞增殖并诱导其凋亡,且在特定索拉非尼浓度范围内两药联合存在协同作用。

重组人5型腺病毒术中浸润注射治疗食管癌22例

目的观察重组人5型腺病毒在术中浸润注射食管癌的临床疗效。方法选取开胸探查术中确定不能切除的食管癌患者22例,术中给予瘤体内注射重组人5型腺病毒,于治疗期间密切观察患者的生命体征和不良反应;于术后第7天进行血常规、血液生化检查;8周后行纵隔CT平扫复查。结果 22例患者对重组人5型腺病毒术后瘤腔内注射耐受性良好,未见严重不良反应,复查纵隔CT,对肿瘤的控制有效率为86.36%。结论重组人5型腺病有显著的抑瘤效果和良好的安全性。

重组人5型腺病毒局部注射联合同步放化疗对鼻咽癌患者预后情况和肿瘤恶性程度的影响

目的分析重组人5型腺病毒局部注射联合同步放化疗对鼻咽癌患者预后情况和肿瘤恶性程度的影响。方法 56例鼻咽癌患者随机分为观察组及对照组各28例。对照组患者接受单纯放化疗,观察组患者接受重组人5型腺病毒局部注射联合同步放化疗。对比两组患者的治疗后肿瘤相关蛋白表达、病情相关指标、凋亡相关基因表达、复发转移相关因子水平。结果观察组患者的治疗后鼻咽局部Raf激酶抑制蛋白(RKIP)、上皮型钙黏蛋白(SE-CAD)表达量高于对照组患者,Ras基因编码的蛋白质(ras P21蛋白)、Ezrin表达量低于对照组患者(P<0.05);观察组患者的治疗后血清P-选择素(P-selectin)、血小板源性生长因子(PDGF-BB)、可溶性CD4(s CD4)、可溶性CD8(s CD8)、同型半胱氨酸(Hcy)、唾液酸(SA)值均低于对照组患者(P<0.05);观察组患者的治疗后Bcl-2、Bcl-xl表达量高于对照组患者,Bax、Bak、Bad、Bid表达量低于对照组患者(P<0.05);观察组患者的治疗后血清细胞角蛋白19片段21-1(CYFRA21-1)、EB病毒壳抗原Ig A水平(VCA-IGA)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、恶性肿瘤特异性生长因子(TSGF)水平均低于对照组患者(P<0.05)。结论鼻咽癌患者接受重组人5型腺病毒局部注射联合同步放化疗,可以有效抑制肿瘤细胞活性,降低远期肿瘤复发及侵袭转移的能力,具有积极的临床意义。

重组人5型腺病毒术中瘤腔内注射治疗脑胶质瘤的安全性研究

目的观察脑胶质瘤切除术后瘤腔注射重组人5型腺病毒注射液(安柯瑞)的安全性。方法按入选标准筛选脑胶质瘤患者21例,给予手术切除后瘤腔内注射安柯瑞。治疗前对患者进行全面体检,治疗期间密切观察患者的生命体征和不良反应,并于术后第7天、4周进行血常规、血液生化、尿常规检查。结果21例患者对安柯瑞术后瘤腔内注射耐受性良好,未见严重不良反应,主要不良反应是发热。结论安柯瑞应用于脑胶质瘤瘤腔内注射有良好的安全性。