微RNA-30d-5p通过调控ABCB5对胰腺癌进程的影响

目的 探讨微RNA(miR)-30d-5p在胰腺癌(PAAD)中的潜在作用和调控机制。方法 选择2016年12月至2019年1月来新疆维吾尔自治区人民医院接受手术治疗的胰腺癌病人35例,术后即刻获得胰腺肿瘤组织和癌旁非肿瘤组织,采用实时定量PCR检测miR-30d-5p在胰腺癌组织和细胞中的表达水平。使用细胞计数试剂盒(CCK-8)、克隆形成、transwell和流式细胞术检测miR-30d-5p对细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。通过萤光素酶测定和蛋白质印迹法评估miR-30d-5p对ABCB5表达的调控作用。进一步构建裸鼠成瘤模型通过肿瘤质量和体积验证miR-30d-5p对肿瘤生长的影响。采用苏木精伊红染色验证肿瘤组织增殖情况。结果 与癌旁组织(1.03±0.17)及正常细胞(0.98±0.18)相比,胰腺癌组织(0.35±0.08)和细胞(0.63±0.08,0.23±0.07,0.48±0.07及0.31±0.05)中miR-30d-5p的表达显著降低(P<0.05);miR-30d-5p的过表达抑制了肿瘤细胞的活力、迁移和侵袭并促进了细胞凋亡且差异有统计学意义(P<0.05);抑制ABCB5的表达能抑制细胞活力、迁移和侵袭性并促进了胰腺癌的细胞凋亡且差异有统计学意义(P<0.05);体内实验证明miR-30d-5p组能够抑制肿瘤生长且差异有统计学意义(P<0.05)。结论MiR-30d-5p通过靶向ABCB5影响胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡,可能是PC病人潜在的预后生物标志物及靶向治疗的靶点依据。

谷氨酰胺转运载体SLC1A5对食管鳞癌细胞恶性生物学的影响及其机制

目的探讨谷氨酰胺转运载体SLC1A5在食管鳞癌细胞系中的表达、对增殖和侵袭的影响及其作用机制。方法采用实时定量PCR及免疫印迹法检测人正常食管上皮细胞系(SHEE)和食管鳞癌细胞系(KYSE30、KYSE70、KYSE140、TE1)中SLC1A5的表达水平。在SLC1A5高表达的KYSE70细胞中采用CRISPR/Cas9方法敲除SLC1A5,采用CCK8测定和划痕实验检测对照、敲除SLC1A5和使用SLC1A5抑制剂V-9302后KYSE70细胞的增殖和迁移能力。采用GSH/GSSG试剂盒检测对照、敲除SLC1A5和使用SLC1A5抑制剂V-9302后KYSE70细胞的谷氨酰胺代谢情况。结果SLC1A5在食管癌细胞系KYSE70中高表达,与正常食管上皮中的表达有统计学差异(P<0.05)。SLC1A5敲除或被抑制的KYSE70细胞的增殖能力低于未处理细胞(P<0.05),处理组划痕的迁移面积较未处理组明显减少(P<0.05),处理组的GSH/GSSG比率较未处理组的显著降低(P<0.05)。结论SLC1A5在ESCC细胞系中表达增高,抑制SLC1A5可降低ESCC细胞的增殖迁移能力与谷氨酰胺代谢,SLC1A5可能是食管癌治疗的潜在靶点。

氨三乙酸配位辅助原位合成Ni@B-HZSM-5对苯和甲醇烷基化反应的影响

利用氨三乙酸离子(NTA3-)与Ni2+的配位作用在强碱溶液中原位合成了负载B-Ni的HZSM-5分子筛(Ni@B-HZSM-5)。采用X射线衍射(XRD)、扫描电子显微镜(SEM)、透射电子显微镜(TEM)、X射线荧光光谱(XRF)、低温N_(2)吸附-脱附、吡啶红外光谱(Py-IR)、NH3程序升温脱附(NH3-TPD)和H_(2)程序升温还原(H_(2)-TPR)等手段对Ni@B-HZSM-5催化剂进行了表征,采用固定床反应器评价其苯和甲醇烷基化反应性能,并与浸渍法负载的Ni/HZSM-5分子筛催化剂进行了对比。结果表明:原位合成的Ni@B-HZSM-5催化剂中B和Ni分布均匀,具有丰富的弱酸和适宜的加氢能力,甲醇加氢形成甲烷的副反应在一定程度上被抑制;在温度460℃、H_(2)压力0.4 MPa、n(苯)∶n(甲醇)=1.2∶1和质量空速2 h^(-1)条件下,4%Ni@B2-HZSM-5催化苯和甲醇烷基化反应,苯转化率可达46.4%,甲苯和二甲苯总选择性达到95.9%,其中C8芳烃选择性为35.1%,C8芳烃中乙苯摩尔分数为6.1%;并表现出优异的稳定性,比浸渍法Ni/HZSM-5分子筛催化剂性能更佳。

小肽Ospep5对水稻耐镉性的影响

镉(Cd)胁迫是植物面临的主要重金属胁迫之一,对植物的生长和发育产生严重的影响。尽管已有研究表明植物小肽具有缓解胁迫的作用,但水稻中镉毒害的研究很少。在前期研究中,通过翻译组、转录组和蛋白质组鉴定了一系列水稻小肽,其中发现Ospep5可以显著地提高水稻的耐盐性。本研究以日本晴野生型、日本晴过表达Ospep5-OX和日本晴CRISPR/Cas9突变体ospep5-3作为水稻试验材料,研究Ospep5对镉胁迫下水稻幼苗生长的影响。试验结果表明:500μmol L^(–1)CdCl_(2)处理显著抑制了水稻幼苗的形态生长和叶绿素含量,同时超氧化物歧化酶(SOD)、脯氨酸(Pro)含量、丙二醛(MDA)含量和镉离子含量显著提高。与单独的镉胁迫相比,外源施加Ospep5后,可以有效缓解镉胁迫对水稻幼苗的形态生长的抑制,显著提高超氧化物歧化酶(SOD)活力,同时显著降低丙二醛(MDA)含量、脯氨酸(Pro)含量和镉离子含量,并且能够促进耐镉基因(OsHMA2、OsHMA3、OsCAL1)的表达。总之,Ospep5通过调节水稻幼苗各种生理生化反应以及调控耐镉基因表达的方式,最终提高水稻幼苗对镉胁迫的耐受性。

A10-057与FG5X-265对超导重力仪格值标定结果的对比分析

采用最小二乘与迭代算法,对A10-057绝对重力仪、FG5X-265绝对重力仪及iGrav-053超导重力仪的同期同址观测数据进行处理,得到FG5X-265及A10-057精密测定iGrav-053的格值因子分别为-883.9294 ns^(-2)/V、-884.134 ns^(-2)/V,标定精度为0.04826%、0.0937%,均优于0.1%。同时对比FG5X-265与A10-057在标定工作中各项测量指标与选取测量对数对标定结果的影响,通过列举多场景对格值精度的要求,最终证明A10型绝对重力仪具备标定相对重力仪的能力,为后续相对重力仪标定工作提供参考。

蒙药经典方剂肉豆蔻-5对心肌梗死的保护作用及机制研究

目的探讨蒙药经典方剂肉豆蔻-5对心肌梗死(MI)模型大鼠的保护作用及机制。方法将50只大鼠分为空白对照组(A组),模型对照组(B组),肉豆蒄-5高、中、低剂量干预组(C1组、C2组、C3组),各10只。除A组外,B组、C1组、C2组、C3组大鼠通过冠脉左前降支(LAD)结扎构建MI模型。C1组、C2组、C3组大鼠分别灌胃0.27,0.54,1.08 g/kg肉豆蔻-5,A组和B组大鼠灌胃等量羧甲基纤维素钠。通过检测大鼠左室射血分数(LVEF),心肌组织2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色、Masson染色及外周血心肌损伤标志物肌酸激酶脑型同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)水平,评价肉豆蔻-5对MI模型大鼠的保护作用。对大鼠心肌组织进行蛋白质组学检测及蛋白基因集富集分析(GSEA),明确肉豆蔻-5保护MI的作用机制。结果与B组比较,C1组大鼠的LVEF均显著升高(P<0.05);C1组、C2组大鼠的LDH和CK-MB水平均显著降低(P<0.05),心肌梗死面积占比显著缩小(P<0.05),心肌纤维化程度显著降低(P<0.05)。心肌组织蛋白质组学检测结果显示,与B组比较,C1组大鼠心肌组织中分别有522个和270个蛋白显著高表达和低表达(P<0.05)。维恩图显示,肉豆蔻-5能逆转MI模型大鼠心肌组织中169个蛋白而发挥对MI的保护作用。169个蛋白GSEA结果显示,代谢通路、氧化磷酸化通路、非酒精性脂肪肝通路、阿尔茨海默病通路、帕金森病通路被显著富集(P<0.05),其中代谢通路(EnrichmentScore=0.4538,P=0.0037)和氧化磷酸化通路(EnrichmentScore=0.4928,P=0.044)与心脏功能密切相关。结论肉豆蔻-5对MI的保护作用与调控心肌代谢有关。

瞬时受体电位通道5对间歇性低氧致心肌焦亡的影响

目的探讨瞬时受体电位通道5(TRPC5)对间歇性低氧致心肌焦亡的影响。方法TRPC5^(-/-)大鼠及SD大鼠各12只,两种大鼠分别随机分为慢性间歇性低氧组(CIH组)和常氧组(Control组),即WT-Control组、WT-CIH组、TRPC5^(-/-)-Control组、TRPC5^(-/-)-CIH组,每组6只。通过Masson染色观察大鼠心肌纤维化情况,ELISA检测血清炎症因子水平,Western blot检测TRPC5及焦亡相关蛋白相对表达水平。结果Masson染色显示,TRPC5^(-/-)-CIH组胶原容积分数高于TRPC5^(-/-)-Control组,低于WT-CIH组。ELISA结果显示,TRPC5^(-/-)-CIH组血清IL-1、IL-6、TGF-β水平高于TRPC5^(-/-)-Control组,低于WT-CIH组。Western Blot结果显示,TRPC5^(-/-)-CIH组焦亡相关蛋白Caspase-1、NLRP3、GSDMD、GSDMD-N相对表达量高于TRPC5^(-/-)-Control组、低于WT-CIH组。结论TRPC5缺乏减轻间歇性低氧导致的心肌焦亡,并改善心肌纤维化。

骨形态发生蛋白5对肝癌细胞生物学行为的影响及机制

目的 探究骨形态发生蛋白5(BMP5)对人肝癌细胞生物学行为的影响及机制。方法 将正常人肝细胞系L02与人肝癌细胞系Hep3B、Huh7置于37℃、5%CO_(2)细胞培养箱中培养,采用RT-qPCR法检测正常人肝细胞系L02与人肝癌细胞系Hep3B、Huh7中BMP5 mRNA表达。将肝癌细胞系Hep3B、Huh7分为对照(NC)组及低、中、高剂量组,低、中、高剂量组分别用1、10、100 ng/mL浓度的重组人骨形态发生蛋白5(rh-BMP5)处理细胞,通过CCK-8法检测细胞增殖,Annexin-V/PI流式细胞术检测细胞凋亡,划痕实验检测细胞迁移,Western blotting法检测增殖细胞核抗原PCNA和SMAD通路关键蛋白及其磷酸化(SMAD3、p-SMAD3)表达。结果 与正常肝细胞系L02相比,BMP5在肝癌细胞系Hep3B、Huh7中表达升高(P均<0.05)。与NC组相比,中、高剂量组rh-BMP5可促进Hep3B、Huh7细胞增殖和PCNA表达上调(P均<0.05),高剂量组100 ng/mL的rh-BMP5处理肝癌细胞24及48 h细胞凋亡率降低、迁移率增高(P均<0.05)。高剂量组与NC组相比,p-SMAD3表达升高(P<0.05)。结论 BMP5在肝癌细胞系中高表达,可能通过增强SMAD3活化促进肝癌细胞Hep3B、Huh7的增殖、迁移并抑制凋亡。

基于转录组学探究GIMAP8和SEC14L5对肺纤维化发展的影响

目的 基于转录组学测序技术,观察肺纤维化进程中GIMAP8和SEC14L5在尘肺患者和矽肺小鼠模型中的表达变化,为阐明肺纤维化的发生和发展提供理论依据。方法 将雄性C57BL/6小鼠随机分为PBS组(磷酸缓冲盐溶液)和Silica组(二氧化硅悬液),通过非暴露式气管插管方式在第0、14天向Silica组小鼠灌注100 mg/mL二氧化硅悬液50μL,PBS组灌注等量磷酸缓冲盐溶液。第28天时评估小鼠肺功能并处死所有小鼠,进行肺组织形态观察、纤维化评价以及mRNA水平的检测。结果 与健康对照者相比,尘肺患者筛选出有显著表达差异的mRNA共584种,其中242种mRNA显著上调,342种mRNA显著下调。富集分析显示,这些差异表达的mRNA主要参与了P53、NF-κB、TNF、AMPK等信号通路。PBS组小鼠肺结构正常,而Silica组小鼠呈现肺泡结构破坏,胶原纤维沉积和纤维团块。肺组织中GIMAP8表达上调,SEC14L5表达下调。Silica组小鼠肺功能有所下降。结论 在尘肺患者及矽肺小鼠模型中,GIMAP8和SEC14L5可能参与肺纤维化的发生和发展,这可能为预防和治疗这些疾病提供分子理论基础。

HES5对肾小管上皮细胞转分化和凋亡的影响及其机制研究

目的探讨HES5(hairy and enhancer of split 5)对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化和凋亡的作用及其潜在机制。方法分析和筛选GSE66494数据中的差异表达基因。建立小鼠的输尿管梗阻模型(unilateral uretera obstruction,UUO),检测肾组织中HES5的表达水平。TGF-β1(10 ng/mL)处理HK-2细胞24 h建立肾小管上皮-间质转化模型后,通过qRT-PCR和Western blot检测HES5的表达水平。用过表达HES5的质粒转染HK-2细胞,24 h后检测其纤连蛋白(Fibronectin,FN)、胶原蛋白Ⅰ(CollagenⅠ)和波形蛋白(Vimentin)及凋亡相关标志物(Bax、Bcl2)等蛋白表达;然后,将HK-2细胞分为4组:Control组、siHES5组、TGF-β1组、siHES5+TGF-β1组,检测各组的纤维化及凋亡标志物的表达情况。运用TUNEL及流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况。Western blot检测各组AKT、p-AKT、PI3K、p-PI3K的蛋白表达。通过加入PI3K抑制剂(LY294002)处理过表达HES5的HK-2细胞后,检测Vimentin的表达。结果HES5的表达在慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)和小鼠纤维化肾组织中均显著上调;过表达HES5可以促进HK-2细胞中FN、CollagenⅠ、Vimentin、Bax的合成,抑制Bcl2的表达(P<0.05);敲低HES5不仅下调纤维化标志物的表达,还抑制了肾小管上皮细胞凋亡;此外,HES5基因敲低使TGF-β1诱导的HK-2细胞内PI3K/AKT信号通路的激活程度降低(P<0.05);PI3K/AKT信号通路抑制剂减弱了HES5对Vimentin的诱导作用。结论敲低HES5可以抑制TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化和凋亡,这可能与PI3K/AKT信号通路活性降低有关。

过表达同源盒A5对人甲状腺癌细胞增殖的影响及作用机制

目的:探讨同源盒A5(HOXA5)对人甲状腺癌TPC1细胞生物学功能的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:采用RT-qPCR和免疫印迹分析人甲状腺癌TPC1细胞中的HOXA5 mRNA和蛋白表达水平。采用慢病毒转染技术将阴性对照质粒(OE-NC)和HOXA5过表达质粒(OE-HOXA5)转染至TPC1细胞,并验证转染效率;CCK-8法、克隆形成实验和流式细胞术分别检测细胞增殖、克隆形成及细胞周期;免疫印迹检测增殖相关蛋白及AKT通路相关蛋白的表达水平。结果:与甲状腺滤泡上皮细胞相比,甲状腺癌TPC1细胞中的HOXA5 mRNA和蛋白表达水平明显降低。上调HOXA5表达后,TPC1细胞的增殖活性和克隆形成能力明显受到抑制,细胞在G0/G1期的细胞百分比显著增加,但在S期的细胞百分比下降;且增殖相关蛋白Ki67、c-Myc及AKT信号通路关键蛋白p-GSK3β、p-AKT表达水平明显下调。结论:HOXA5在甲状腺癌TPC1细胞中表达下调,且过表达HOXA5基因可抑制甲状腺癌细胞增殖和克隆形成能力,其机制可能涉及AKT信号通路的激活。

SOX5对大鼠成骨细胞增殖及核因子-κB信号通路的影响

目的:探究Y-box蛋白5(SOX5)对大鼠成骨细胞(OB)增殖及核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法:取新生24 h SPF级SD乳鼠,应用酶消化法分离大鼠颅骨OB。形态学观察和ALP染色鉴定成骨细胞;取生长良好的第4代OB,分为空白对照组、pcDNA3.1组、pcDNA-SOX5组、si-NC组、siRNA-SOX5组。转染48 h后qRT-PCR检测细胞中SOX5 mRNA的表达;MTT法检测细胞增殖活力;ALP活性检测试剂盒测量ALP活性;茜素红染色观察钙结节的形成情况;Western blotting检测OB分化及NF-κB信号通路相关蛋白Runt相关转录因子2(Runx2)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)、NF-κB p65及其磷酸化蛋白、KB抑制蛋白激酶α(IκBα)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达。结果:与空白对照组相比,pcDNA-SOX5组大鼠OB中SOX5 mRNA水平、p-NF-κB p65/NF-κB p65、TNF-α蛋白表达显著升高(P<0.05),OB增殖活力、ALP活性、钙化结节数量和面积、Runx2、CollagenⅠ、IκBα表达显著降低(P<0.05);siRNA-SOX5组大鼠OB中SOX5 mRNA水平、p-NF-κB p65/NF-κB p65、TNF-α蛋白表达明显降低(P<0.05),OB增殖活力、ALP活性、钙化结节数量和面积、Runx2、CollagenⅠ、IκBα表达明显升高(P<0.05)。结论:SOX5具有调控OB增殖、分化的作用,其作用机制可能与调控NF-κB信号通路有关。

Ga、Zn改性ZSM-5对生物质热裂解产物单环芳烃选择性的影响

针对生物油组分复杂、含氧量高等问题,通过使用金属改性催化剂改善生物油的组成,提高生物油中单环芳烃(Monocyclic Aromatics Hydrocarbon,MAHs)的选择性,并探讨了生物质催化热裂解反应机理。以硝酸镓、硝酸锌为改性剂,采用离子交换法对不同硅铝比的ZSM-5进行改性,使用Py-GC/MS外标法探究硅铝比(30、40、50和60)和金属元素类型(Ga、Zn)对玉米秸秆催化热裂解产物单环芳烃选择性的影响。结果表明,对于Ga/ZSM-5,硅铝比为30时更有利于单环芳烃的产生,此时玉米秸秆催化热裂解产物单环芳烃的相对含量为19.02%,是在母体ZSM-5(30)催化下的1.38倍;对于Zn/ZSM-5,硅铝比为40时更有利于单环芳烃的产生,此时玉米秸秆催化热裂解产物单环芳烃的相对含量为22.18%,是在母体ZSM-5(40)催化下的1.51倍。硅铝比对二甲苯、萘和二甲基萘的产率影响比改性金属元素影响大,改性金属元素对苯、甲苯和茚的产率影响比硅铝比影响大。从生物油的相对含量、元素组成、芳香烃的相对含量、以及单环芳烃的产率来看,Zn/ZSM-5(40)的催化效果优于Ga/ZSM-5(30)。

肿瘤坏死因子受体相关因子5对缺氧诱导心肌细胞损伤的影响及作用机制研究

目的:分析肿瘤坏死因子受体相关因子5(TRAF5)对缺氧诱导心肌细胞损伤的影响及相关分子机制。方法:体外培养H9c2细胞,以800μmol/L浓度的二氯化钴(CoCl2)处理细胞建立缺氧诱导心肌细胞损伤模型,采用脂质体转染法将TRAF5过表达质粒(pcDNA-TRAF5)和空载质粒(pcDNA-NC)转染至缺氧诱导的H9c2细胞。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测细胞TRAF5基因表达水平,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,试剂盒法检测乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量,蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测细胞中TRAF5、细胞外信号调节激酶(ERK)、磷酸化ERK(p-ERK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)、氨基末端激酶(JNK)、磷酸化JNK(p-JNK)蛋白表达水平。结果:与Control组比较,Hypoxic组H9c2细胞中TRAF5 mRNA和蛋白表达水平均降低,细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,细胞中LDH水平、MDA含量升高,SOD、GSH-Px水平降低,细胞中p-ERK/ERK、p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-JNK/JNK比值均升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与Hypoxic组比较,Hypoxic+pcDNA-TRAF5组H9c2细胞中TRAF5 mRNA和蛋白表达水平均升高,细胞存活率升高,细胞凋亡率降低,细胞中LDH水平、MDA含量降低,SOD、GSH-Px水平升高,细胞中p-ERK/ERK、p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-JNK/JNK比值均降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:TRAF5通过介导心肌酶活性和氧化应激水平减轻缺氧诱导的心肌细胞损伤,其作用机制可能与调控MAPK信号通路有关。

去泛素化酶UCHL5对小鼠空间学习记忆能力的影响

目的利用泛素羧基末端水解酶L5(UCHL5)脑部基因敲除小鼠模型,研究UCHL5对空间学习记忆功能的影响。方法使用CRISPR/Cas9技术构建UCHL5脑部条件敲除小鼠。选择4月龄及以上的UCHL5脑敲除小鼠与野生型小鼠各16只。他莫昔芬腹腔注射连续5次,隔日1次,建模成功后采用Western blotting方法鉴定小鼠脑组织UCHL5表达水平。利用Morris水迷宫实验检测UCHL5敲除对小鼠空间学习记忆能力的影响。结果Western blotting实验结果表明UCHL5蛋白在敲除小鼠脑组织中表达缺失。UCHL5敲除影响小鼠空间学习记忆能力,定位航行实验结果显示UCHL5脑敲除小鼠的平均潜伏期长于野生型小鼠,在训练第1、3日平均潜伏期延长,但差异无统计学意义(P=0.403,P=0.067),在训练第2、4、5日平均潜伏期均明显延长(均P<0.05);空间探索实验结果显示UCHL5脑敲除小鼠在目标象限时间占比明显低于野生型小鼠[(7.71±0.81)%vs(9.60±0.51)%,P=0.042];UCHL5脑敲除小鼠的游泳总路程大于野生型小鼠[(7500.92±14.35)cm vs(6034.48±17.10)cm,P<0.001]。结论UCHL5的表达水平影响小鼠空间学习记忆能力。

周期蛋白依赖性激酶5对去势抵抗性前列腺癌细胞生长及侵袭转移的影响

目的研究周期蛋白依赖性激酶5(CDK5)对去势抵抗性前列腺癌(CRPC)细胞DU145生长及侵袭转移的影响。方法将CDK5小分子抑制剂20-223添加到细胞中,根据其浓度分为对照组(20-223浓度为0.00μmol/L)、2.00μmol/L组(20-223浓度为2.00μmol/L)、4.00μmol/L组(20-223浓度为4.00μmol/L)以及8.00μmol/L组(20-223浓度为8.00μmol/L),每组100株。采用CDK5小干扰RNA(siRNA)干扰CDK5在DU145细胞内的表达,CDK5抑制剂20-223抑制CDK5在DU145细胞内的活性;采用噻唑蓝(MTT)检测细胞生长活力,单克隆形成实验测定细胞增殖能力,采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(AnnexinV-FITC)和碘化丙啶(PI)双染法测定细胞凋亡,划痕实验和Transwell实验测定细胞的迁移能力,Western Blot测定Myc促癌基因(c-Myc)、SRY-box转录因子4(SOX4)及侵袭转移相关蛋白的表达情况。对比分析CDK5抑制剂20-223对CRPC细胞DU145生长、凋亡、侵袭转移能力,以及四组细胞c-Myc、SOX4、上皮间质转化(EMT)相关蛋白的表达量。结果在用药后24、48、72 h的细胞生长抑制率方面,2.00μmol/L组、4.00μmol/L组、8.00μmol/L组均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。CRPC细胞DU145生长活力随着CDK5抑制剂的浓度升高而降低,其生长受到显著抑制。2.00μmol/L组、4.00μmol/L组、8.00μmol/L组用药后48 h Q1象限、Q2象限、Q3象限、Q4象限的细胞凋亡率均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。4.00μmol/L组在用药后48 h的迁移率(2.28%)低于对照组(2.37%),差异有统计学意义(P<0.01)。细胞经过2 d的处理后,2.00μmol/L组、4.00μmol/L组、8.00μmol/L组c-Myc、SOX4、Vimentin、Zeb1蛋白的表达量均低于对照组,而E-cadherin的表达量高于对照组。CDK5基因沉默组CDK5、c-Myc、SOX4蛋白的表达明显低于对照组和NC组。结论CDK5在CRPC中的表达及活性下降,在一定程度上抑制了DU145细胞的恶性增殖及浸润,并且对其凋亡起到了促进作用。CDK5的潜力很强,属于去势抵抗药物的一种,当对其的活性进行抑制后,c-Myc、SOX4等蛋白水平明显下降,进而上调E-cadherin、Vimentin、Zeb1等蛋白水平,从而减弱了去势抵抗药物敏感性。

盐酸多奈哌齐调控lncRNA GAS5对血管性痴呆小鼠认知功能障碍和炎症反应的影响

目的:探究盐酸多奈哌齐(DPH)对血管性痴呆(VD)小鼠认知功能障碍的影响及其作用机制。方法:75只雄性C57BL/6小鼠按照随机数字表法分为5组:假手术组(Sham组)、VD模型组、DPH组(VD+DPH组)、DPH+长链非编码RNA-生长抑制特异性转录本5(lncRNA GAS5)无关片段组(VD+DPH+lncRNA GAS5 NC组)以及DPH+lncRNA GAS5过表达组(VD+DPH+lncRNA GAS5 OVE组),每组15只。采用小鼠双侧颈总动脉缩窄法构建VD模型。造模成功后2 d, DPH组小鼠给予DPH 1 mg/(kg·d)灌胃8周。Sham组和VD模型组小鼠给予等量的生理盐水灌胃处理。VD+DPH+lncRNA GAS5 OVE组小鼠脑室注射lncRNA GAS5 (每只1 010 pfu)后构建VD模型,2 d后给予DPH 1 mg/(kg·d)灌胃8周。VD+DPH+lncRNA GAS5 NC组小鼠脑室注射lncRNA GAS5 NC后构建VD模型,2 d后给予DPH 1 mg/(kg·d)灌胃8周。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测脑组织中lncRNA GAS5表达水平;Morris水迷宫实验检测各组小鼠学习记忆能力;分光光度法测定脑组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)以及谷光甘肽过氧化物酶(GSH-Px);酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;苏木素-伊红(HE)染色观察各组小鼠脑组织海马区域病理学改变。结果:与Sham组相比,VD模型组小鼠脑组织lncRNA GAS5水平和MDA含量,血清IL-6、IL-1β和TNF-α含量均明显升高(P<0.01),学习记忆能力、SOD、GSH-Px含量明显降低(P<0.01),且海马区域病理损伤明显。与VD模型组相比,VD+DPH组小鼠上述指标均被明显逆转,海马区域损伤减轻。与VD+DPH组相比,VD+DPH+lncRNA GAS5 OVE组小鼠lncRNA GAS5水平和MDA含量,血清IL-6、IL-1β和TNF-α含量均升高(P<0.01),学习记忆能力、SOD、GSH-Px含量明显降低(P<0.01),且海马区域病理损伤加重。结论:DPH能够改善VD小鼠认知功能障碍和炎症反应,其机制与抑制lncRNA GAS5表达相关。

小分子多肽LK-5对CCl4致急性肝损伤小鼠的保护作用研究

【目的】研究小分子多肽LK-5(氨基酸序列为LHMFK)对CCl4致急性肝损伤模型小鼠的保护作用,探讨其作用机制。【方法】72只小鼠随机分为正常组、模型组、联苯双酯组(150 mg/kg)及LK-5低、中、高剂量组(30、60、120 mg/kg),每组12只。连续给药10 d, 1次/d,每次10 mL/kg。末次给药2 h后,各组(除正常组外)腹腔注射0.1%CCl4花生油溶液,建立CCl4致小鼠急性肝损伤模型,16 h后,按照试剂盒方法,检测小鼠血清天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、总胆汁酸(TBA)和碱性磷酸酶(AKP)水平,检测肝脏超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-10、血管紧张素1-7(Ang 1-7)和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平。制作肝脏病理组织切片,苏木精-伊红染色(HE)后观察肝脏组织病理学变化。【结果】与正常组比较,模型组小鼠肝细胞有明显的脂肪变性,炎细胞分散分布于肝小叶血管周围和肝实质内,血清ALT、AST、AKP活性和TBA水平均显著上升,肝组织SOD、GSH-Px活性显著下降,MDA水平显著上升(P<0.05),说明成功建立急性肝损伤模型,TNF-α、IL-6、AngⅡ水平显著升高(P<0.05)。与模型组比较,LK-5中、高剂量组能够显著降低血清ALT、AST活性(P<0.05),各剂量组均可降低血清TBA水平和AKP活性(P<0.05),LK-5高剂量组能够显著提高小鼠肝组织SOD、GSH-Px活性(P<0.05),LK-5中、高剂量组能够显著降低肝组织MDA水平(P<0.05),LK-5高剂量组TNF-α水平显著降低(P<0.05),各剂量组能够显著降低肝组织IL-6、AngⅡ水平(P<0.05)。病理切片结果显示,LK-5各剂量组炎细胞均有不同程度减少,LK-5高剂量组肝小叶血管周围和肝实质内无炎细胞浸润。【结论】LK-5各剂量组对CCl4致急性肝损伤小鼠具有保护作用,其中60、120 mg/kg LK-5效果更为明显,其作用机制可能与抗氧化、抗炎及对肾素-血管紧张素系统(RAS)的调控有关。

阿氏芽孢杆菌解硅微生物菌剂MB35-5对日光温室黄瓜土壤有效硅含量及产量的影响

为了明确新型解硅菌剂阿氏芽孢杆菌解硅微生物菌剂MB35-5在日光温室黄瓜中的应用效果,并为新型生物解硅菌剂在实际生产中应用提供理论依据,通过大田试验与室内分析相结合的方法,研究了阿氏芽孢杆菌解硅微生物菌剂MB35-5对日光温室黄瓜土壤有效硅含量以及黄瓜生长、产量和抗病性的影响。结果表明:在不施用外源硅的条件下,施用微生物菌剂MB35-5能够有效补充黄瓜生长消耗的土壤有效硅,施用量为3 000和6 000 g/hm^(2)处理黄瓜收获后的土壤有效硅含量分别较播前增加了13.8%和16.1%,分别较CK增加了24.6%和27.2%;能够显著促进黄瓜植株生长,有效增强抗病性,明显提高黄瓜产量,施用量为3 000和6 000 g/hm^(2)处理的产量分别较CK增加8.8%和11.9%。施用量6 000 g/hm^(2)处理在补充土壤有效硅、提高黄瓜产量、增强黄瓜抗病性方面的效果优于施用量3 000 g/hm^(2)处理,在实际生产中建议MB35-5的施用量为6 000 g/hm^(2)。

普鲁卡因通过调控PRMT5对肺癌细胞的增殖和凋亡的影响

目的探讨普鲁卡因通对肺癌细胞的增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法采用不同浓度(0、1.0、2.5、5.0 mmol/L)的普鲁卡因处理肺癌细胞A549,记为不同浓度的普鲁卡因组;将si-NC和si-PRMT5转染至未处理的肺癌细胞A549,记为si-NC组和si-PRMT5组;pcDNA和PRMT5转染肺癌细胞A549后加入5.0 mmol/L的普鲁卡因处理,记为普鲁卡因+pcDNA组和普鲁卡因+PRMT5组。MTT检测细胞的活力;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测PCNA、p21、Bcl-2、Bax和PRMT5蛋白表达;qRT-PCR检测PRMT5 mRNA的表达。结果随着普鲁卡因浓度的增加,肺癌细胞的OD值、PCNA蛋白、Bcl-2蛋白、PRMT5 mRNA和蛋白表达表达逐渐降低(P<0.05),p21蛋白、Bax蛋白表达逐渐升高(P<0.05);与si-NC组比较,si-PRMT5组的PRMT5 mRNA和蛋白表达、OD值、PCNA蛋白表达显著降低(P<0.05),p21蛋白表达显著增加(P<0.05);与si-NC组比较,si-PRMT5组的细胞凋亡率、Bax蛋白表达显著增加(P<0.05),Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05);与对照组比较,普鲁卡因组的PRMT5 mRNA及蛋白表达、OD值、PCNA蛋白表达、Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05),细胞凋亡率、p21蛋白表达、Bax蛋白表达明显增加(P<0.05);与普鲁卡因+pcDNA组比较,普鲁卡因+PRMT5组的PRMT5 mRNA及蛋白表达、OD值、PCNA蛋白表达、Bcl-2蛋白表达明显增加(P<0.05),细胞凋亡率、p21蛋白表达、Bax蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论普鲁卡因能够抑制肺癌细胞的增殖和促进细胞的凋亡,其作用机制可能与调控PRMT5表达有关。