大鼠脑梗死后神经前体细胞的增殖及电针作用的实验研究

目的 研究脑梗死病灶周围及海马处神经前体细胞增殖水平的动态变化及电针治疗对其的影响。方法 采用易卒中型肾性高血压大鼠 (RHRSP) ,电凝法凝闭大脑中动脉 (MCAO)。用Garcia等的综合评分法评定大鼠的神经行为学功能 ,免疫组化观察梗死灶边缘、对侧镜区及双侧海马 5 溴脱氧尿核苷 (Bromodeoxyuridine,BrdU)标记细胞的变化。结果 MCAO后大鼠轻偏瘫 ,5天时神经行为学功能恢复正常。MCAO后梗死灶边缘、双侧镜区及双侧海马均有BrdU阳性细胞分布 ,且病灶侧多于病灶对侧 ,病灶周围分布密集。电针治疗促使梗死灶边缘BrdU阳性细胞增多 ,随着治疗时间增加细胞增多更明显。结论 脑梗死可诱导病灶周边及海马神经前体细胞增殖水平上调 ,2周内神经前体细胞随着电针治疗时间的增加而增多。神经前体细胞可能是脑梗死康复的重要物质基础。

反映成年大鼠脑组织神经发生水平显示方法的灵敏性和可靠性评价

目的评价反映成年大鼠脑组织神经发生水平的显示方法。方法采用免疫细胞化学法观察溴化脱氧尿核苷(BrdU)显示细胞增殖的可靠性、灵敏性,以及寻找BrdU给药的合适剂量。结果BrdU25mg/kg剂量组与50mg/kg、100mg/kg组相比,齿状回BrdU阳性细胞数差异明显(P<0.05),50mg/kg和100mg/kg两组无显著性差异(P>0.05)。BrdU25mg/kg剂量组阳性细胞不易与周围细胞区分;50mg/kg剂量组和100mg/kg剂量组阳性细胞较易识别。且BrdU阳性细胞大多数分化为神经元。结论BrdU标记法可以准确反映成年大鼠脑组织神经发生水平。

碱性成纤维细胞生长因子对缺血后脑组织新生神经元的影响

目的研究脑缺血再灌流后海马齿状回神经元发生水平的动态变化及外源性碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对其的影响。方法采用5-溴脱氧尿核苷(5-bromodeoxyuridine,BrdU)标记有丝分裂、免疫组织化学的方法观察大鼠全脑缺血再灌流后海马齿状回神经元发生的动态变化以及在侧脑室注射外源性bFGF对神经元发生变化的影响。结果大鼠全脑缺血-再灌注损伤后第14天齿状回神经元发生水平达到峰值。全脑缺血-再灌注损伤大鼠侧脑室注射外源性bFGF后齿状回神经元发生水平升高,神经元发生峰值时间提前。结论脑缺血可以诱导齿状回神经元发生水平上调,外源性bFGF能促进齿状回神经元发生。

GDNF对局灶性脑缺血大鼠SVZ和SGZ细胞增殖及学习记忆的影响

目的 观察胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对局灶性脑缺血再灌注大鼠SVZ和SGZ细胞增殖的影响。方法 大脑中动脉线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,立体定位下侧脑室注射GDNF,应用5 -溴脱氧尿核苷(Brd U )标记分裂细胞,观察模型组、GDNF组大鼠SVZ和SGZ神经干细胞的增殖,同时应用Y迷宫监测大鼠学习记忆能力。结果 局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠GDNF组神经干细胞增殖明显增加,Brd U免疫阳性细胞数与相应对照组比较,差异有显著性意义(P<0 .0 5 )。GDNF组大鼠学习和记忆能力与相应对照组比较,差异有显著性(P<0 .0 5 )。结论 GDNF可增强局灶性脑缺血SVZ和SGZ细胞增殖能力,外源性GDNF可加速中枢神经损伤的修复。

肌筋膜经线选穴法针刺治疗对脑性瘫痪模型大鼠神经细胞再生及运动功能恢复的影响

目的探讨基于肌筋膜经线的选穴法针刺治疗对脑瘫模型大鼠神经细胞再生及运动功能恢复的影响。方法健康21日龄雄性Sprague-Dawley大鼠20只,分成对照组、针刺1组、针刺2组和假手术组,对照组、针刺1组和针刺2组采用左侧颈总动脉结扎结合低氧环境制作脑瘫模型。针刺1组接受传统针刺疗法,针刺2组接受基于肌筋膜经线的选穴法针刺治疗。各组于针刺开始后第3、7、14天行BBB评分、斜板试验;第14天用5-溴脱氧尿核苷(BrdU)标记检测左脑运动皮层和纹状体的细胞增殖情况。结果第7天和第14天针刺2组的BBB评分恢复明显优于针刺1组和对照组(P<0.01),第3、7、14天针刺2组斜板支撑能力均较对照组升高(P≤0.05);第14天针刺2组运动皮层BrdU含量较针刺1组升高(P<0.05)。结论基于肌筋膜经线的选穴法针刺治疗能有效促进脑瘫模型神经细胞再生和运动功能的改善,且优于传统针刺疗法。

骨髓间充质干细胞在mdx鼠体内分化为骨骼肌细胞及其dystrophin/utrophin蛋白的表达

目的研究骨髓间充质干细胞(MSCs)移植入放疗的mdx鼠后dystrophin/utrophin的表达变化。方法将BrdU标记的大鼠P5代MSCs移植入放疗处理的mdx鼠,分别于移植后4、8、12和16周断头处死取其腓肠肌,冰冻切片应用免疫荧光、RT-PCR及Western blotting检测BrdU/dystrophin及utrophin的表达变化。另分别取5只正常C57BL/6鼠和mdx鼠作阳性和阴性对照。结果经γ射线放疗预处理的mdx鼠,在尾静脉移植MSCs后4周时肌纤维抗肌萎缩蛋白的表达少于1%,随移植时间延长增加,16周时为15%,dystrophin/BrdU激光共聚焦免疫荧光显示肌细胞核中移现象较同龄mdx鼠对照组减少,边居增多。RT-PCR及Western blotting检测到dystrophin表达也随移植时间延长增多。移植后mdx鼠肌细胞膜utrophin表达较对照组mdx鼠减少,RT-PCR结果显示mRNA在移植前后没有明显改变。结论MSCs移植后mdx鼠的肌细胞膜有dystrophin表达,激光共聚焦技术表明dystrophin阳性肌纤维部分来自于移植的MSCs。utrophin在mdx鼠肌膜上表达上调,MSCs移植后dystrophin表达对utrophin有一定的抑制作用,两者存在互补关系。

成年大鼠弥漫性脑损伤后海马齿状回神经前体细胞增殖的Glu-iGluRs通路机制研究

目的 观察选择性iGluRs拮抗剂MK-801对弥漫性脑损伤后齿状回神经发生的调控作用,探讨Glu-iGluRs通路在神经发生中的角色。方法 选用成年弥漫性脑损伤大鼠模型,采用BrdU标记分裂细胞及免疫组织化学方法,比较弥漫性脑损伤后2、4、6、8、12 d时MK-801干预弥漫性脑损伤组大鼠与相应对照组大鼠之间海马齿状回神经前体细胞的增殖速度。结果 MK-801 1mg/kg腹腔注射后,明显抑制了成年大鼠弥漫性脑损伤后4、6、8、12 d时齿状回神经前体细胞增殖,BrdU免疫阳性细胞数目较相应对照组明显减少(P<0.01)。结论 弥漫性脑损伤后脑组织Glu-iGluRs通路的激活促进了海马齿状回神经发生,在这一过程中,NMDA受体介导的级联生物学事件可能发挥了重要作用。

成年大鼠弥漫性脑损伤后海马齿状回神经前体细胞增殖的NOS-NO通路机制研究

目的 观察NO前体及选择性NOS干预剂对弥漫性脑损伤后齿状回神经发生的调控作用 ,探讨NOS -NO通路在成年脑神经发生中的角色。方法 选用成年弥漫性脑损伤大鼠模型 ,采用BrdU标记分裂细胞及免疫组织化学方法比较弥漫性脑损伤后 2、4、6、8、12d时各干预剂干预组大鼠与相应对照组大鼠之间海马齿状回神经前体细胞的增殖速度。结果 L -精氨酸 (L -Arg) 2 0 0mg/kgi.p .后 ,成年大鼠弥漫性脑损伤后各个时间点海马齿状回BrdU免疫阳性细胞数目均显著增多 ,以脑损伤后 6d和 8d时增加最为明显 (P <0 0 1)。 7-硝基引唑 (7-NI) 5 0mg/kgi.p .后 ,明显抑制了大鼠弥漫性脑损伤后不同时间点齿状回细胞增殖 ,在弥漫性脑损伤后 4d时抑制作用相对最为明显 (P <0 0 1)。氨基胍 (AG) 10 0mg/kgi.p .后 ,也明显减少了大鼠弥漫性脑损伤后不同时间点齿状回BrdU免疫阳性细胞数目 ,从第 8天后抑制作用相对更为明显 (P <0 0 1)。结论 弥漫性脑损伤后激活的NOS -NO通路是海马齿状回神经发生过程中一个重要的调控通路 ,不同来源的NO分别在弥漫性脑损伤后不同时间齿状回神经发生中发挥作用。

丹栀逍遥散对广泛性焦虑大鼠海马齿状回神经干细胞增殖与分化能力的干预作用

目的观察广泛性焦虑(generalized anxiety disease,GAD)大鼠海马齿状回区(Dentate Gyms,DG)5-溴脱氧尿核苷(Brdu)单标记和Brdu/神经元核抗体(Brdu/Neun)双标记阳性细胞的数量和中药丹栀逍遥散对其的干预作用。方法将雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、中药组和西药组,每组10只。模型组、中药组、西药组采用不确定空瓶饮水刺激方法造成GAD大鼠模型。中药组和西药组分别以丹栀逍遥散和盐酸丁螺环酮水溶液灌胃7天,正常组和模型组以蒸馏水灌胃7天,每天1次。取脑组织,行冰冻切片,免疫荧光双标记法检测海马齿状回区Brdu单标记和Brdu/Neun双标记阳性细胞数量。结果与正常组相比,模型组Brdu阳性细胞数明显增多(P<0.01),但Brdu/Neun双标阳性细胞数减少(P<0.05),差异均有统计学意义。与模型组相比,中药组Brdu阳性细胞数、Brdu/Neun双标阳性细胞数均明显增多,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论 GAD大鼠齿状回神经干细胞(NSCs)增殖较为活跃,但NSCs分化为成熟神经元的能力降低;丹栀逍遥散能够促进GAD大鼠DG区NSCs的增殖和向神经元的定向分化,增强机体的神经修复与再生能力,从而改善临床症状。

头针对脑缺血再灌注大鼠神经干细胞增殖分化干预效果的实验研究

目的观察大鼠脑缺血再灌注损伤后反应性星形胶质细胞及神经细胞的活化增殖情况,探讨头针治疗脑缺血的可能机制。方法将Wistar雌性大鼠随机分为假手术组、模型组、头针组(模型组和头针组再根据缺血再灌注时间的不同,随机分为7d、14d、28d共6个亚组)。采用大脑中动脉线栓法制备大脑中动脉闭塞(MCAO)再灌注模型,选取顶颞后斜线、顶颞前斜线,进针后接韩氏穴位神经刺激仪。应用神经功能缺损评分(NSS)、免疫荧光双标方法观察各组缺血再灌注后不同时间点缺血侧室管膜下区及海马齿状回5-溴脱氧尿核苷(BrdU)、BrdU+胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞数值的变化。结果头针组与模型组各时相上的组间比较,第28天头针组的NSS显著低于模型组(P<0.01);与模型对照组比较,头针组于缺血再灌注第7天缺血侧室管膜下区、海马BrdU、BrdU+GFAP阳性细胞数基本相同,第14天、28天时均明显升高。结论大鼠缺血再灌注损伤后可引起其缺血侧室管膜下区、海马星形胶质细胞及神经细胞反应和增殖,而头针可显著增加大脑中动脉阻塞大鼠的神经干细胞增殖分化能力,实现对缺血脑组织保护的目的。

运动对急性癫痫大鼠海马神经发生的影响

目的探讨中等负荷运动对急性癫痫大鼠海马神经发生的影响。方法应用免疫荧光单标记和激光共聚焦显微镜观察癫痫大鼠在中等负荷运动后海马齿状回新生神经元的5-溴脱氧尿核苷(BrdU)表达情况;应用RT-PCR半定量分析癫痫大鼠在中等负荷运动后海马神经生长因子(neurotrophic growth factor,NGF)的表达情况。结果运动组癫痫大鼠海马齿状回BrdU的表达比未运动组癫痫大鼠表达减少,差异有统计学意义(P<0.01);运动组癫痫大鼠海马NGF基因表达比未运动组癫痫大鼠也下调,差异有统计学意义(P<0.01),且海马NGF基因表达与齿状回BrdU的表达变化相一致。结论中等负荷的运动可减少急性癫痫大鼠海马新生神经元BrdU的表达,而NGF对急性癫痫大鼠神经发生可能有一定的促进作用。

缺血启动脑白质损伤新生大鼠室管膜下区和白质的胶质源性内在修复功能

目的探讨缺血启动脑白质损伤新生大鼠室管膜下区(SVZ)和白质途径对损伤白质的内源性自我修复功能。方法建立5日龄脑室周围白质软化(PVL)新生大鼠模型,随机分为PVL组和Sham组,光镜和电镜下评估脑白质病理和髓鞘形成,TUNEL法观察脑白质细胞凋亡,5-溴脱氧尿核苷(Brdu)示踪以及免疫荧光共标记技术观察SVZ和白质胶质源性祖细胞的激活、增殖、迁移和分化情况。结果建模后第7和21天,PVL组大鼠脑室周围白质的凋亡细胞数较Sham组增加,差异均有统计学意义(P<0.05);PVL组的脑白质均呈现轻度或重度病变;PVL组脑白质内髓鞘形成数目以及髓鞘厚度亦低于Sham组,差异均有统计学意义(P均<0.01)。PVL组在各时段的NG2+祖细胞和BrdU+(源自SVZ)以及GPR17+(源自白质)的O4+少突胶质细胞(OL)前体均较Sham组明显增多,差异均有统计学意义(P均<0.05);建模第7天,PVL组的GPR17+不成熟OL和成熟OL均未能检测到,代之为BrdU+不成熟OL和成熟OL;直至建模第21天,PVL组的不成熟OL和成熟OL一直呈低水平状态,低于Sham组(P均<0.05)。结论缺血可诱导PVL大鼠脑SVZ和白质这两条途径的胶质源性祖细胞激活和出现明显增殖,并沿OL系细胞分化和迁移至脑白质的损伤部位进行修复,但最终仅有极少量新生细胞能分化为未成熟和成熟OL。推测有限的内源性修复作用可能与不良的脑微环境密切相关。

局灶性脑缺血大鼠学习记忆能力与海马齿状回nNOS表达的关系

目的观察局灶性脑缺血再灌注大鼠学习记忆与海马齿状回神经元型一氧化氮合酶(nNOS)表达的关系。方法大脑中动脉线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,5溴脱氧尿核苷(BrdU)标记分裂增殖细胞,应用Y型电迷宫监测大鼠学习记忆能力,免疫组化单标和双标技术检测大鼠海马齿状回BrdU阳性细胞数和nNOS的表达。结果局灶性脑缺血再灌注对学习记忆能力损害明显,但随着再灌注时间的延长学习记忆能力有较好恢复,再灌注28d恢复明显。海马齿状回BrdU阳性细胞增加,14d达高峰;再灌注后7dnNOS表达增强,28d达高峰,BrdUnNOS双标细胞在14d达高峰。结论局灶性脑缺血再灌注可增强大鼠海马齿状回细胞的增殖能力,增殖细胞nNOS的表达对大鼠学习记忆能力恢复有促进作用。

电针对慢性癫痫大鼠海马新生神经元生长抑素表达的影响

目的探讨电针对慢性癫痫大鼠海马新生神经元生长抑素(SS)表达的影响。方法应用免疫荧光双标记和激光共聚焦显微镜观察了电针慢性癫痫大鼠督脉穴位"大椎"与"百会"后海马新生神经元生长抑素的表达情况。结果海马新生神经元有SS的表达,且电针后的癫痫大鼠表达比未电针的癫痫大鼠减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论电针可抑制海马新生神经元SS的表达,而SS有致痫作用。由此推测电针的抑痫机制可能是通过海马新生神经元SS的表达而实现的。

卡马西平对匹罗卡品诱导成年癫间疒大鼠海马齿状回神经前体细胞增殖的影响

目的研究卡马西平对成年癫大鼠海马齿状回内源性神经前体细胞增殖的影响。方法采用氯化锂和匹罗卡品联合诱导大鼠癫模型,将癫大鼠随机分为癫对照组和癫卡马西平组,正常大鼠随机分为正常对照组和正常卡马西平组。癫对照组和正常对照组给以蒸馏水灌胃,同时癫卡马西平组和正常卡马西平组给予卡马西平灌胃。于灌胃后第6d腹腔注射5-溴脱氧尿苷嘧啶(BrdU)标记海马齿状回的内源性神经前体细胞的增殖情况;用免疫组化方法观察各组大鼠在注射BrdU后第1d、第7d齿状回BrdU阳性细胞数量的表达。结果①注射BrdU后第1d,癫对照组大鼠海马齿状回BrdU阳性细胞数较正常对照组明显增加(P<0.01),癫卡马西平组大鼠海马齿状回BrdU阳性细胞数较癫对照组减少(P<0.05);②注射BrdU后第7d,癫对照组大鼠海马齿状回BrdU阳性细胞数较正常对照组明显增加(P<0.01),癫卡马西平组大鼠海马齿状回BrdU阳性细胞数较癫对照组明显减少(P<0.05)。结论卡马西平抑制癫大鼠海马齿状回内源性神经前体细胞增殖。

运动对不同年龄大鼠海马神经发生的影响

目的探讨运动对不同年龄大鼠海马神经发生的影响。方法应用免疫荧光单标记和激光共聚焦显微镜观察不同年龄大鼠在中等负荷运动后海马新生神经元的表达情况;应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)半定量分析不同年龄大鼠在中等负荷运动后海马脑源性神经生长因子(BDNF)的表达情况。并探讨二者的相关性。结果运动组幼年大鼠与青年大鼠海马齿状回5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)的表达均比相应年龄段未运动组大鼠增加,且运动组幼年大鼠比青年大鼠海马齿状回BrdU表达增加,各组差异均有统计学意义(P<0.01);运动组大鼠海马BDNF基因表达上调,以幼年运动组上调明显,差异有统计学意义(P<0.05),且海马BDNF基因表达与齿状回BrdU的表达规律基本一致。结论中等负荷的运动可增加海马新生神经元的表达,而年龄因素可影响运动对海马新生神经元的增殖效应;海马神经发生的快慢与年龄依赖的BDNF表达有关。

缺血性脑损伤后齿状回神经元再生的研究进展

成年脑组织神经元再生的规律和机制的研究是近几年来神经科学领域研究的热点。文章综述了缺血性脑损伤后成年脑组织海马齿状回神经元再生的研究现状 ,重点介绍了缺血性脑损伤后海马齿状回神经元再生的时间规律、新生神经元的移行和分化特点 ,同时还介绍了影响神经元再生的因素和神经元再生的调节机制 。

不同程度的性发作对成年大鼠空间学习记忆影响的研究

目的研究不同程度的性发作对成年大鼠空间学习记忆的影响。方法采用氯化锂和匹罗卡品联合诱导大鼠不同程度的癫模型(轻型和重型)。于造模后第6d给所有大鼠腹腔注射5-溴脱氧尿苷嘧啶(BrdU+)标记海马齿状回增殖的内源性神经前体细胞;用免疫组化方法观察各组大鼠注射BrdU+后第1d和第28d齿状回BrdU+阳性细胞数以及第28d的BrdU+/神经元核性蛋白(NeuN+)阳性细胞数及分布情况;利用Morris水迷宫评价大鼠的学习记忆功能。结果与正常组及轻型组比较,在各个时间点重型组海马齿状回BrdU+细胞数均增加(P<0.05),28d时BrdU+/NeuN+细胞数相应增多,但其占BrdU+细胞数的比例明显下降(P<0.05)。28d时重型组大鼠的学习记忆功能较正常组及轻型组明显下降(P<0.05)。结论严重的癫发作造成大鼠对空间学习记忆功能的损害,可能与其刺激大鼠海马齿状回内源性神经前体细胞增殖水平,抑制其分化为新生的成熟神经元有关。