5-ALA对干旱胁迫下沙棘叶绿素合成和光合作用的影响

试验采用盆栽方式,设置无干旱胁迫对照、干旱胁迫对照和3个5-ALA质量浓度(40 mg·L^(-1)、80 mg·L^(-1)、120 mg·L^(-1))处理,探讨其对沙棘叶绿素合成和光合速率的影响。结果表明:干旱胁迫与无干旱胁迫相比降低了叶绿素含量,并显著降低了叶绿素合成的前体物质胆色素原、原卟啉IX和Mg-原卟啉Ⅸ含量;80 mg·L^(-1)的5-ALA会显著提高干旱胁迫下叶绿素合成的前体物质胆色素原、原卟啉IX和Mg-原卟啉Ⅸ含量,处理后第30天、第45天和第60天会显著提高叶片内叶绿素含量;40 mg·L^(-1)5-ALA在处理后第60天不能显著提高干旱胁迫下叶绿素、胆色素原、原卟啉IX和Mg-原卟啉Ⅸ含量;干旱胁迫降低了沙棘叶片净光合速率和Rubisco活性,80 mg·L^(-1)5-ALA可以显著提高干旱胁迫下净光合速率和Rubisco活性;5-ALA质量浓度为120 mg·L^(-1)和80 mg·L^(-1)时干旱胁迫下叶绿素含量和净光合速率差异不显著。综上所述,80 mg·L^(-1)的5-ALA更适于促进干旱胁迫下沙棘叶绿素合成和提高其光合能力。

5-ALA光动力-热敏醇质体的制备工艺研究

优化5-氨基乙酰丙酸盐酸盐(5-ALA)醇质体的制备工艺。选用大豆卵磷脂及胆固醇作为囊材,采用乙醇注入法制备5-ALA醇质体。以热敏性、包封率、变形性、粒度分布等为评价指标,分别采用单因素实验和正交实验优化工艺条件。最优制备条件为:m_((大豆卵磷脂))∶m_((胆固醇))=9∶1,m_((囊材))∶m_((药物))=23.3∶1,无水乙醇加入体积为10mL,PBS溶液的pH值为7.4,搅拌时间为30min,超声时间为4min。本实验优化得到的5-ALA光动力-热敏醇质体包封率较高,变形性较好,粒度分布均匀。

5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)的生物学作用及其在动物生产中的应用

5-氨基乙酰丙酸(5-aminolevulinic acid,5-ALA)是四吡咯生物大分子合成酶的前体物质,参与卟啉类化合物的合成,与动物体内血红素的合成及铁的吸收利用密切相关,具有提高细胞的抗氧化能力和机体免疫功能的作用。5-ALA参与植物体内叶绿素的合成,会对光敏素生物合成系统产生影响,具有增强果实着色的作用。5-ALA是光敏剂原卟啉IX(PpIX)生成的前体物质,可以通过血红素生物合成产生原卟啉IX(PpIX),在临床上被用作光检测的光敏剂和癌症光动力疗法(PDT)。文章综述了5-ALA的生物学功能及其在动物中的应用研究进展,以期为5-ALA在畜禽养殖中的进一步应用提供参考。

不同浓度5-氨基乙酰丙酸(ALA)浸种对NaCl胁迫下番茄种子发芽率及芽苗生长的影响

为探讨外源5-氨基乙酰丙酸(ALA)对NaCl胁迫下番茄种子发芽率及芽苗生长的影响,以‘中杂九号’番茄种子为试材,不同浓度ALA(0、0.1、0.5、1.0、5.0、10.0mg/L)浸种24h后,在0、25、50、100mmol/L NaCl胁迫下,28℃,黑暗培养7d,研究ALA对番茄种子发芽参数(发芽率、发芽势、发芽指数、活力指数、芽苗总鲜重)及胚芽和胚根中的抗氧化酶(超氧化物歧化酶SOD、过氧化物酶POD、过氧化氢酶CAT)活性和丙二醛(MDA)含量的影响。结果表明:非盐胁迫下,ALA浸种使番茄种子的发芽势、发芽指数、活力指数、芽苗总鲜重增加,胚根中SOD、POD活性降低,MDA含量减少;25mmol/L NaCl胁迫能够提高发芽率、活力指数、芽苗总鲜重,而50—100mmol/L NaCl胁迫极显著的降低发芽率、发芽势、发芽指数、活力指数;0.1—0.5mg/L ALA浸种能够提高NaCl胁迫下番茄种子的发芽率、发芽指数、活力指数、芽苗总鲜重和抗氧化酶活性,降低MDA含量,而高浓度ALA(10.0mg/L)浸种导致发芽率、发芽指数、活力指数降低。总之,ALA浸种能够促进番茄种子萌发和芽苗生长,浸种浓度不宜超过5.0mg/L,NaCl胁迫下以0.1mg/L ALA浸种处理效果最佳。

5-ALA光动力疗法对人结肠腺癌SW480细胞的抑制作用

结直肠癌是当前最常见的消化道恶性肿瘤之一 ,但目前治疗手段单一 ,迫切需要寻找新的解决途径。第二代光敏剂ALA是一种内源性光敏剂 ,我们应用ALA -PDT对人结肠癌细胞SW480进行了体外实验性治疗研究 ,实验表明 :ALA孵育的SW480细胞可产生PpIX ,ALA -PDT可于PDT后早期明显抑制SW480细胞的生长增殖 ,降低细胞存活率 ,本实验结果显示ALA -PDT作为一种新型肿瘤疗法具有治疗结肠癌的可行性。

5-氨基乙酰丙酸(ALA)在水溶液中的稳定性

研究了浓度、pH值、温度等因子对5氨基乙酰丙酸(ALA)在水溶液中稳定性的影响。结果表明,随着ALA水溶液初始浓度、pH值以及贮藏温度的升高,ALA的稳定性迅速下降。提示ALA贮藏应采用原药形式,密封避光保存于干燥处;溶液配制时,浓度不宜过高;配好的溶液尽量一次性用完,且不宜与碱性试剂混合使用。

新型光动力学疗法光敏剂5-ALA-GNPs的制备及其光谱分析

通过聚二烯丙基二甲基胺盐酸盐和氯金酸制备阳离子纳米金,将纳米金和5-氨基乙酰丙酸(5-ami-nolevulinic acid,5-ALA)通过静电吸附作用有效结合得到新型光敏剂。应用共振瑞利散射光谱,紫外-可见吸收光谱,透射电镜和激光散射等方法对其进行了表征。结果表明通过这种方法纳米金与5-ALA可以有效结合。这种新型光敏剂对提高光动力学疗法临床疗效具有重要指导意义。

外源5-氨基乙酰丙酸(ALA)对低温胁迫下垂穗披碱草种子萌发及生长的影响

以2份垂穗披碱草种子（北京和申扎）为试验材料,采用不同浓度5-氨基乙酰丙酸（ALA,0 mg/L、0.1 mg/L、1.0mg/L、5.0 mg/L、10.0 mg/L）浸种24 h后,研究外源5-氨基乙酰丙酸对低温胁迫下垂穗披碱草种子萌发及幼苗生长的影响。结果表明：低温胁迫（5℃）下,0.1~1.0 mg/L ALA浸种后,显著地提高了北京和申扎垂穗披碱草种子的发芽率、发芽指数及幼苗的根长、苗长和鲜重,降低了膜透性以及MDA含量,而高浓度ALA浸种（5.0 mg/L和10.0 mg/L）降低了它们的发芽率和发芽指数。研究结果表明,5-氨基乙酰丙酸能够促进低温下垂穗披碱草种子萌发和幼苗的生长,其中1.0 mg/L ALA浸种效果最好。

负载5-ALA纳米微球对膀胱癌光动力学作用的初步研究

目的探讨负载5-盐酸乙酰氨基丙酸(5-aminolevulinic acid,5-ALA)的光敏感纳米微球的制备方法,并初步研究其在体外对膀胱癌T24细胞的光动力学效应。方法以纳米沉淀法制备光敏感纳米微球,紫外分光光度法检测载药率,动态光散射的方法检测纳米粒径,原子力显微镜观察纳米微球形貌。将膀胱癌T24细胞分别与不同浓度的光敏感纳米微球共同孵育,以能量密度为6 J/cm2,波长为650 nm半导体激光照射。另设空白对照组、空载体组、5-ALA组。以MTT比色法测定T24细胞的生长抑制率。结果光敏感纳米微球载药量为7%,负载效率85%。处理组5、10、25和50μg/ml光敏感纳米微球的细胞生长抑制率分别为73.19%、79.95%、83.86%和89.74%,与空白对照组、空载体组、5-ALA组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论纳米微球负载5-ALA具有理想的载药率,光敏感纳米微球能显著提高光动力学杀伤效应。

基于5-ALA-TS-FA体外光动力疗法灭活HL60细胞实验研究

本文通过癌症靶向性分子叶酸(FA),硅壳包裹的TiO_2(TS)纳米颗粒和5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)进行结合形成新型光敏剂5-ALA-TS-FA,并研究其在光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)治疗白血病肿瘤细胞HL60中的灭活效果。实验采用表面修饰的方法成功制备了5-ALA-TS-FA纳米颗粒,表征样品通过透射电镜(TEM)、傅里叶红外光谱(FTIR)、紫外-可见光吸收光谱(UV-Vis)等测试方法,通过加入不同浓度的复合纳米颗粒5-ALA-TS-FA与HL60细胞共育12 h,分别测量纳米颗粒的暗毒性和PDT灭活效应,其中PDT灭活效应采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测。实验结果表明,5-ALA-TS-FA复合纳米颗粒分散性良好;当药物浓度为100μg/m L与HL60细胞共育12 h后,5-ALA-TS-FA对HL60细胞的暗毒性较低,在光动力疗法中5-ALA-TS-FA灭活效率可达到74.65%,显著高于TiO_2和TS-FA的灭活效率。因此5-ALA-TS-FA作为一种潜在的光敏剂具备良好的应用前景。

外源5-氨基乙酰丙酸(ALA)对盐胁迫下小型西瓜幼苗抗氧化酶活性的影响

以耐盐性较弱的小型西瓜品种秀丽2号为材料,采用营养液栽培法,研究了外源5-氨基乙酰丙酸(ALA)对Na Cl胁迫下西瓜幼苗叶片、根系中超氧阴离子(O-2·)产生速率、丙二醛(MDA)含量、相对电导率和抗氧化酶活性的影响。结果表明,100 mmol/L Na Cl处理下,西瓜幼苗叶片、根系中O-2·产生速率、MDA含量和相对电导率均显著升高;而1.25 mmol/L外源ALA处理显著提高Na Cl胁迫下西瓜幼苗叶片、根系超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)等抗氧化酶活性,显著降低了O-2·产生速率、MDA含量和相对电导率。这些结果表明,外源ALA处理可有效清除体内活性氧,降低膜脂过氧化伤害程度,从而缓解盐胁迫对植株生长的抑制,进而有助于增强西瓜植株对盐胁迫的耐受性。

Caspase-3对5-ALA诱导鳞状细胞癌Colo-16细胞凋亡效应的影响

目的探讨半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)对光敏剂5-氨基酮戊酸(5-ALA)诱导鳞状细胞癌Colo-16细胞凋亡效应的影响。方法取对数生长期的Colo-16细胞用于实验,将细胞分为对照组、5-ALA-光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)组和Caspase-3抑制剂组(Z-DEVD-FMK),对照组不给予光敏剂和照光处理,5-ALA-PDT组给予0.4 mg/ml的5-ALA避光孵育4 h后,采用(功率密度10 m W/cm2,能量密度2.5 J/cm2)激光照射3 min,之后继续培养12 h。Caspase-3抑制剂组除孵育时同时加入Z-DEVD-FMK(终浓度40μmol),其余处理与5-ALA-PDT组相同。实验后收集各组细胞,通过免疫荧光观察各组细胞胞内Caspase-3荧光强度的变化,通过流式细胞术检测活性Caspase-3阳性细胞百分率和细胞凋亡率。结果免疫荧光结果发现对照组和Caspase-3抑制剂组Colo-16细胞胞浆中有微弱绿色荧光,表明Caspase-3表达量低,而5-ALA-PDT组中绿色荧光显著增强,表明其胞浆内Caspase-3含量显著增高。流式细胞仪的检测结果显示,对照组、5-ALA-PDT组和Caspase-3抑制剂组active-Caspase-3阳性细胞百分率分别为(2.26±0.16)%、(32.16±1.31)%和(3.36±0.31)%,5-ALA-PDT组高于对照组和Caspase-3抑制剂组,差异有统计学差异(P<0.05)。对照组、5-ALA-PDT组和Caspase-3抑制剂组的凋亡率分别为(2.35±0.22)%、(31.55±3.68)%和(11.46±2.25)%,三组之间两两比较,差异都有统计学意义(P<0.01)。结论 5-ALA-PDT可以诱导Colo-16细胞发生凋亡,且这种效应与caspase-3的激活密切相关。

5%氮酮提高5-ALA-PDT治疗皮肤鳞状细胞癌的疗效

目的:确定氮酮对5-氨基酮戊酸光动力疗法(5-ALA—PDT)治疗皮肤鳞状细胞癌(SCC)疗效的影响。方法:制备含不同浓度氮酮的5-AIA促渗乳膏;大鼠经皮给药,观察原卟啉Ⅸ(PpⅨ)体内生成动力学;30例皮肤鳞状细胞癌患者分别以不加氮酮的5-ALA乳膏和含5%氮酮的5-ALA促渗乳膏外用(每组15例),然后均给予光动力治疗,对比两种治疗方案的疗效。结果:5%氮酮对5-ALA表皮细胞内促PpⅨ合成增强作用最明显;含5%氮酮5-ALA-PDT组治疗SCC的CR率为93.3%,不含氮酮的5-ALA-PDT为66.7%(P<0.05)。结论:含5%氮酮的5-ALA乳膏能显著提高5-ALA-PDT治疗鳞状细胞癌的疗效。

5-氨基酮戊酸光动力疗法(ALA-PDT)治疗老年面部Bowen病的疗效观察

目的:观察5-氨基酮戊酸光动力疗法(ALA-PDT)治疗老年面部Bowen病的疗效和美容效果。方法:对10例年龄大于65岁、患高血压、糖尿病或不愿手术治疗的Bowen病患者面部皮损进行ALA-PDT治疗。结果:10例Bowen病患者的18个皮损获得完全缓解,1例复发,复发率10%。结论:对老年面部Bowen病,ALA-PDT是一种痛苦小、疗效好、无瘢痕形成、复发率低、美容效果好的治疗方法。

DFO、5-ALA联合诱导大肠癌细胞原卟啉Ⅸ聚积的时间动力学研究

目的探讨DFO、5-ALA联合体外诱导大肠癌SW480细胞原卟啉Ⅸ聚积随时间变化的规律,为该药物诱导大肠癌组织原卟啉Ⅸ聚积用于大肠早癌的诊断提供依据。方法DFO、5-ALA浓度分别为10momL/mL、2momL/mL的诱导培养液,作用SW480细胞2h后,分别在2、3、4、5、8及10h终止培养;SW480细胞用上述诱导培养液分别作用20、40、60、80、100及120min后终止培养;密度为1×106/mL的细胞悬液处理后,用高效液相色谱-荧光检测仪测定细胞内原卟啉Ⅸ含量。结果SW480细胞株在药物作用2h后,细胞内原卟啉Ⅸ含量在第4h达到高峰;药物作用40min以后,原卟啉Ⅸ含量明显升高;60min以后各组间差异不明显。结论DFO、5-ALA联合诱导时间最短不得少于40min,药物作用后最佳检测时间为第4小时。

5-ALA-纳米金光动力治疗小鼠光老化的初步研究

目的:初步探讨5-ALA-纳米金光动力治疗小鼠皮肤光老化的作用。方法:48只雄性健康ICR小鼠分为正常对照组(8只)、光老化组(40只),正常组不予特殊处理,光老化组照射紫外线,肉眼观察和HE染色验证光老化模型。40只光老化组小鼠分为B组光老化对照组,C组红光组、D组纳米金组、E组5-ALA组、F组5-ALA-纳米金组,C、D、E、F组小鼠背部分别涂抹不同溶液0.5ml(分别为生理盐水、纳米金溶液、5-ALA溶液和5-ALA-纳米金组溶液)避光封包3h,红光照射10min,2周治疗1次,共治疗2次,A组为正常组对照组不予任何处理。观察各组小鼠皮肤表现和组织病理改变。结果:与A组比较,紫外线照射后,B组小鼠皮肤皮肤增厚,出现皮屑、深皱纹、缺乏弹性等光老化特征;组织切片显示,B组小鼠表皮厚度[(168.235±13.665)μm]较A组[表皮(87.165±2.627)μm]增厚(P<0.05),而胶原纤维面积密度[(7.390±2.5)%]均较A组[(40.114±3.0)%]明显减少(P<0.05)。与B组相比,C、D、E和F组小鼠的表皮变薄[分别为(154.458±2.942)μm,(114.958±2.229)μm,(50.623±4.203)μm和(31.694±1.970)μm,P<0.05],胶原纤维面积密度增加[分别为(15.840±3.0)%,(27.320±2.5)%,(60.812±2.0)%和(70.024±3.0)%,P<0.05],其中以F组效果最显著。结论:5-ALA结合体能提高光动力疗法治疗小鼠光老化的疗效,同时纳米金的光热作用可能用于治疗光老化。

ALA-PDT对K562、HL60细胞株破坏的实验研究

探讨基于氨乙酰丙酸介导的光动力作用(ALA-PDT)对白血病细胞株HL60和K562细胞的杀伤模式及其可能机制。在ALA-PDT处理细胞的优化条件下,用透射电镜对处理细胞进行超微结构观察,选择AnnexinV-FITC/PI双标法明确ALA-PDT对两种白血病细胞的杀伤模式,PI染色流式细胞仪分析ALA-PDT后细胞周期的变化,以Fluo-3/AM为钙离子指示剂采用激光共聚焦显微镜检测细胞内钙离子浓度的变化。透射电镜观察发现PDT后即刻的细胞呈现典型的凋亡小体,24h后大部分发生坏死;双标法检测显示PDT后即刻及24h后细胞的死亡模式分别以凋亡和凋亡后坏死为主。光动力作用后即刻和作用后2h,K562细胞S期所占的比例分别为57.67%±1.13%和84.77%±6.20%,HL60细胞S期所占的比例分别为74.6%±7.27%和84.60%±1.74%;两种细胞内钙离子浓度的均明显升高。在最佳试验条件下,凋亡是ALA-PDT杀伤白血病细胞K562和HL60细胞的最初模式,而凋亡后坏死为其主要模式,ALA-PDT使白血病细胞株阻滞于S期,在白血病细胞株死亡的过程中,细胞内钙离子浓度的增加可能起着重要的作用。

5-ALA-PDT对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞的抑制作用

目的:确定5-ALA-PDT对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞的抑制作用。方法:用5-ALA与A431细胞共同孵育,经630 nln红光照射后,采用MTF法检测细胞生长的抑制率,确定培育时间、5-ALA浓度及光照剂量对皮肤鳞状细胞癌A431细胞的抑制作用。结果:当光照剂量为80 J/cm^2和5-ALA浓度为3.2 mmol/L,5-ALA与A431细胞共同孵育120 min时,抑制率最大。结论:5-ALA-PDT对体外培养的A431细胞的增殖有明显抑制作用。

外源5-氨基乙酰丙酸(ALA)对菘蓝苗期生长及有效成分含量的影响

采用盆栽法研究了质量浓度0.0(对照)、50.0、25.0、13.3和12.5 mg.L-15-氨基乙酰丙酸(ALA)处理1至3次(每次间隔10 d)对菘蓝(Isatis indigotica Linn.)苗期生长的影响;并采用高效液相色谱法分析了叶片内靛蓝和靛玉红含量的变化。结果表明:处理1至3次后各处理组菘蓝根的干质量均高于对照且总体上差异极显著,其中,以12.5 mg.L-1ALA处理组根干质量最高;多数处理组根鲜质量也高于对照,其中用12.5 mg.L-1ALA处理3次根的鲜质量最高。处理1次或2次后各处理组叶片干质量和鲜质量或高于对照或低于对照,其中12.5 mg.L-1ALA处理组叶片的干质量和鲜质量均极显著高于对照;但处理3次后各处理组的叶片干质量和鲜质量也均极显著高于对照。处理1次或2次后各处理组的根冠比总体上高于对照,而处理3次后各处理组的根冠比均低于对照。处理1次或2次后各处理组叶片中靛蓝和靛玉红含量均高于对照,且多数处理组靛蓝和靛玉红含量与对照有显著或极显著差异;而处理3次后各处理组的靛蓝含量均显著高于对照,但仅13.3和12.5 mg.L-1ALA处理组靛玉红含量极显著高于对照;总体上看,用13.3和12.5 mg.L-1ALA处理2次或3次,叶片中靛蓝和靛玉红含量均显著或极显著高于对照,其中,用12.5 mg.L-1ALA处理3次靛蓝含量最高(22.51μg.g-1),用13.3 mg.L-1ALA处理3次靛玉红含量最高(99.48μg.g-1)。研究结果表明:采取适宜的ALA处理对菘蓝生长及叶片中有效成分积累均有一定的促进作用,其中,用低浓度ALA喷施2或3次较为适宜。

外源5-氨基乙酰丙酸对NaCl胁迫下黑果枸杞幼苗生理及生长的影响

5-氨基乙酰丙酸(ALA)是植物血红素、叶绿素等四吡咯化合物的关键生物合成前体,对植物适应非生物胁迫至关重要。为验证外源ALA对黑果枸杞幼苗生理生长的影响,该研究用300 mmol·L^(-1)NaCl和不同浓度(0、5、10、15、20、25 mg·L^(-1))的ALA共同处理黑果枸杞幼苗,并测定其相关的生理指标和生长指标,综合评价各处理幼苗的耐盐性。结果表明:(1)NaCl胁迫使黑果枸杞幼苗总生物量和叶片总叶绿素、类胡萝卜素、可溶性糖含量以及过氧化物酶(POD)活性较CK分别显著降低了33.39%、19.06%、24.38%、39.57%和47.91%(P<0.05),使黑果枸杞幼苗脯氨酸和丙二醛的含量较CK分别显著增加了165.74%和49.16%。(2)当外源ALA和NaCl同时处理时,黑果枸杞幼苗叶片类胡萝卜素和丙二醛含量、POD和过氧化氢酶(CAT)活性以及株高、总生物量均恢复至对照水平,叶片总叶绿素和脯氨酸含量以及SOD活性较CK显著增加。(3)黑果枸杞幼苗叶片叶绿素和脯氨酸含量以及抗氧化酶活性、生物量等指标随ALA浓度增加均呈先上升后下降的趋势,隶属函数综合评价发现,叶面喷施15 mg·L^(-1)ALA缓解盐胁迫伤害的效果最佳。研究认为,适宜浓度ALA可通过促进叶绿素和血红素的积累来调节黑果枸杞幼苗光合作用能力和抗氧化酶活性,增加体内脯氨酸的积累,有效缓解盐胁迫对植物的毒害作用,从而促进植株生长。